Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 09/10/2023
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-451931)
124 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. Le porteur provoque un accident vasculaire cérébral en poussant un fil dans l’artère cérébrale moyenne pour l’obstruer une heure, avant de tester quatre thérapies géniques virales censées limiter la lésion. Il décrit un déficit sensorimoteur, une désorientation au réveil et des pertes d’équilibre, puis une perfusion transcardiaque terminale pour prélever le cerveau. Il rattache le projet à un financement industriel et juge « indispensable » de développer de nouvelles stratégies, les procédures ne pouvant selon lui être remplacées.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
L’objectif de ce projet est de tester quatre virus adéno-associé (AAV) par administration de manière prophylactique en intra veineuse 14 jours avant l’induction de l’ischémie afin d’étudier la diminution des volumes lésionnels et œdème après AVC. Pour cela, ces AAV seront étudiés à l’aide d’un modèle d’ischémie-reperfusion. Leurs mécanismes d’action est suceptible d’agir sur la phase aigüe de l’AVC pour limiter la lésion et la formation d’oedème.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Ce projet fait l’objet d’un financement industriel afin d’étudier de nouvelles stratégies thérapeutiques permettant la diminution de la lésion causée par l’occlusion artérielle. L’accident vasculaire cérébral (AVC) ischémique est une pathologie neurologique survenant après l’occlusion d’une artère irriguant le cerveau. Actuellement, la prise en charge des patients à la phase aigüe de l’infarctus cérébral est réalisée par l’injection intraveineuse de l’activateur tissulaire du plasminogène (tPA) associée ou non à la thrombectomie. Toutefois, seule une faible proportion des patients (
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
L’injection des virus adéno-associé (AAV) se fera par voie intra-veineuse. Cette méthode d’administration durera 1 minute. Les animaux seront soumis à une chirurgie au niveau du cou afin de pouvoir insérer un monolfilament dans la carotide interne puis poussé jusqu’à la base de l’artère cérébrale moyenne (ACM) provoquant ainsi une occlusion. Cet acte chirugical durera 20 minutes. 1 heure plus tard, une seconde chirurgie sur le même site sera réalisée afin d’extraire ce monofilament et ainsi permettre une reperfusion. Cet acte chirugical durera 10 minutes. Enfin, à la fin du projet, les animaux seront soumis à une laparo-thoracotomie pour accéder au cœur. Une perfusion transcardiaque sera réalisée permettant de rincer le système vasculaire et pouvoir récupérer le cerveau. La durée de cette intervention sera comprise entre 10 et 15 minutes pour la perfusion puis 10 minutes pour le prélèvement du cerveau. Les procédures douloureuse (chirurgie, perfusion transcardiaque) seront réalisées sous anesthésie générale associée à une couverture analgésique. Une fois le cerveau récupéré, des tranches d’1mm d’épaisseur seront faite à l’aide d’une matrice permettant de les colorer et ainsi déterminer les volumes lésionnels et oedème.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Le modèle, par définition, reproduit les effets d’un AVC à savoir : déficit sensorimoteur et lésions cérébrales. Cela peut occasionnellement entraîner des pertes d’équilibres et une faiblesse musculaire des membres opposés à la lésion. L’embolisation de l’ACM provoque une désorientation prononcée au moment du réveil post-chirurgical (phénomène de circling). Les fonctions motrices peuvent également être altérées durant les premières heures après l’ischémie-reperfusion. Nous pouvons nous attendre à déceler sur certains animaux des signes de complications et de détresse postchirurgicales tels qu’une absence de réaction aux stimuli, une inactivité de l’animal dans sa cage ou encore une perte de poids suite à un arrêt de la prise alimentaire. Les situations précédemment citées définissent nos points limite à appliquer pour ce projet. Nous surveillerons à ce qu’ils ne soient pas dépassés. Aucune nuisance n’est à prévoir concernant les injections d’AAV car les gènes injecter ne sont pas délétères pour les hôtes. De plus, ces AAV ne sont pas réplicatifs. Les injections i.v par le sinus rétro orbital peuvent engendrer une hemorragie, un gonflement autour du site d’injection ou une cécité partielle.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
A la fin du projet, tous les animaux seront donc mis à mort permettant le prélèvement du cerveau pour analyse.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
L’ensemble des connaissances et des acquis dont nous disposons dans la littérature font que la souris est un modèle préférentiel pour mener à bien ce projet. En effet, la souris est une des espèces animales la plus étudiée dans le domaine de l’AVC, ce qui permettra une analyse comparative et critique des résultats obtenus. De plus, les procédures expérimentales ne peuvent pas être remplacées par d’autres méthodes alternatives pertinentes n’impliquant pas l’utilisation d’animaux vivants et susceptibles d’apporter le même niveau d’information.
2. Réduction
Les données de la littérature ainsi qu’une étude de puissance statistique en amont permettent de nous assurer que nous utiliserons le nombre minimal d’animaux pour pouvoir conclure d’un effet ou non de nos stratégies thérapeutiques. D’un point de vue statistique, nous avons déterminé que le nombre idéal d’animaux par groupe est de 28. En effet, ce nombre est reconnu pour réduire au maximum le nombre d’individus, tout en conservant la pertinence scientifique et la significativité statistique.
3. Raffinement
Les expériences seront réalisées par du personnel qualifié en respectant les règles de bonnes pratiques de laboratoire pour le respect des animaux, tout en veillant à ne pas dépasser les points limites fixés au préalable. Le bien-être des animaux sera suivi bi-quotidiennement par du personnel qualifié 5j/7 et quotidiennement pendant les week-ends et jours fériés et cela pendant toute la durée du projet. Les animaux seront hébergés dans des cages standards répondant aux normes européennes actuelles (Directive 2010/63/UE) dans la zone de sécurité L2 du bâtiment. Pour éviter de stresser les animaux, les cages seront isolées de tout bruit extérieur et l’accès à l’eau et à la nourriture sera ad libitum. Enfin, une importance particulière sera apportée au bien-être des animaux. Tout sera mis en oeuvre pour réduire l’angoisse, la souffrance et la douleur de chaque animal, pouvant être occasionnées pendant le projet. Les principes éthiques et les standards de raffinement seront utilisés jusqu’à la mise à mort de l’animal.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
La souris (Mus musculus) est l’espèce animale qui a été la plus étudiée dans le domaine des neurosciences et notamment dans le cadre de développement de stratégies de thérapies pharmacologiques. L’ensemble des connaissances et des acquis dont nous disposons au laboratoire et dans la littérature rend cette espèce particulièrement intéressante pour étudier la protection, la perfusion cérébrale ainsi que le devenir des lésions induites par une ischémie-reperfusion. Les animaux utilisés seront âgés de 10 semaines soit un poids de 25g pour les C57BL6N. Nous effectuerons notre modèle sur des adultes afin de pouvoir comparer les données de cette étude avec la majorité des données déjà disponibles sur les modèles d’AVC.