Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2022-02-08 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-606798)
203 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. Cet amendement décrit chez des souris immunodéficientes le développement d’une tumeur à la nuque, une injection sous-cutanée, huit injections intrapéritonéales et cinq séances d’imagerie, avant la mise à mort pour analyser la tumeur. Le porteur teste une thérapie cellulaire par lymphocytes T corrigés contre une immunodéficience humaine. Il indique que l’essai préclinique sur modèle animal est exigé par l’Agence nationale de sécurité du médicament avant tout essai chez l’homme.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Cet amendement a pour but de modifier le protocole afin d’obtenir une meilleure réponse immunitaire des lymphocytes T. Des tests préliminaires in vitro nous ont indiqué que le Blinatumomab permet d’augmenter la réponse immunitaire des lymphocytes T. Il s’agit d’un anticorps humain bi-spécifique permettant de cross-linker les lymphocytes T avec les cellules pré-cancéreuses. 1 microgramme de Blinatumomab sera donc coinjecté en même temps que l’IL2 à partir de la date d’injection des lymphocytes T. Cet anticorps n’a pas d’effet physiologique chez la souris. L’ajout de cet anticorps n’entraine pas un plus grand nombre de souris à utiliser ni d’injection supplémentaire.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Les résultats de ce rpojet permettaont d’évaluer l’efficaicté et l’inocuité d’un nouvrea traitement de thérapie celulaire pour le symdrome de la Pi3kinase activée (APDS1)
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Une injection sous cutanée, 8 injections intra péritonéale, 5 points d’imagerie non invasive (IVIS Spectrum).
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
En l’absence de système immunitaire, une tumeur se développera au niveau de la nuque de l’animal.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les animaux seront euthanasiés afin d’étudier le contenu tumoral et l’infiltration des lymphocytes T.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
La mise en place d’essais pré-cliniques sur modèles animaux, quand ceux-ci existent, est exigée par l’Agence Nationale de Sécurité du Médicament dans tout dossier préalable à la demande d’un nouvel essai clinique chez l’homme.
2. Réduction
Les prélèvements de cellules de patients sont très limités ce qui entraine un faible nombre de souris à utiliser. Des mises au point sur la quantité de cellules permettront d’ajuster le protocole.
3. Raffinement
Toutes les manipulations induisant de la douleur chez l’animal (injection intraveineuse, injection sous-cutanée) seront précédées par une anesthésie générale gazeuse (isoflurane 2%). Un collyre à base de tétracaïne sera appliqué sur l’œil après l’injection dans le sinus rétro-orbitaire afin de limiter la douleur. Les animaux seront surveillés quotidiennement et nous avons établi des points-limites entrainant l’euthanasie des animaux si nécessaire. Tout au long de l’étude, les animaux seront hébergés en groupe dans un environnement exempt d’organisme pathogène, et avec une nourriture et une eau stérile. De plus, nous veillerons à l’enrichissement de l’environnement des animaux par la mise à disposition de cotons, de bâtonnets à ronger et de maisonnettes en carton. Ces mesures permettent de maintenir les meilleures conditions de vie et de santé des souris répondant à l’impératif du raffinement.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
La souris immunodéficiente NSG est un modèle de choix pour tester l’efficacité de nouvelles approches de thérapie cellulaire et génique des déficits immunitaires. En effet, ce modèle est capable de permettre la greffe de tumeurs développées à partir de cellules B-EBV de patients. L’injection de lymphocytes T de ce même patient qui auront été corrigées, permettra de mesurer l’efficacité d’immunosurveillance des cellules corrigées par rapport aux cellules malades non corrigées. Le potentiel d’immunosurveillance est corrélé à la régression tumorale induite par ces cellules. La lignée NSG est commercialisée par Charles River et ne présente pas de phénotype dommageable à l’état basal. Des adultes de 6-8 semaines seront utilisés, un protocole précédemment établi (PMID : 27799161) a en effet permis de déterminer que des souris de cet âge permettent de mesurer le potentiel d’immunosurveillance de lymphocytes T corrigés.