Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 29/03/2023
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-146339)
920 souris vont etre utilisees, toutes tuees a l’issue, dans des procedures impliquant un niveau de souffrance severe. 855 d’entre elles subissent une ligature de la veine cave inferieure et sont tuees entre deux et vingt-huit jours plus tard, les 50 autres une ablation de la rate, toutes mises a mort par dislocation cervicale pour prelever organes et sang. Le porteur indique que l’induction de la thrombose peut causer douleur, durcissement et sensation de chaleur, et decrit brievement des grilles d’evaluation de la douleur comme mesure de raffinement. Il affirme qu’aucun modele in vitro ne reproduit la thrombose veineuse, maladie qu’il presente comme multifactorielle.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Notre projet porte sur la compréhension des mécanismes moléculaires et cellulaires qui participent à la chronicité de la maladie veineuse thromboembolique. Notre hypothèse est que les lymphocytes B et les cellules sécrétant l’IFN-γ (lymphocytes T et NK) induisent la maladie veineuse thromboembolique. Les objectifs de notre projet de recherche sont les suivants : Objectif 1 : Déterminer quelles cellules, parmi les lymphocytes B, T et NK, sont modulées par la thrombose veineuse Objectif 2 : Déterminer comment les cellules immunitaires, parmi les lymphocytes B, T ou NK, modulent la thrombose veineuse.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Le traitement de la maladie veineuse thromboembolique repose sur les anticoagulants présentant un risque hémorragique important que les patients doivent le plus souvent prendre à vie. Le but de ce projet est de mettre en évidence de nouveaux mécanismes moléculaires qui permettront le développement de traitements adjuvants aux anticoagulants et donc une prise en charge plus personnalisée.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Huit cent cinquante-cinq souris subiront la ligature de la veine cave inférieure et seront mises à mort entre 2 et 28 jours. Cinquante souris subiront la splénectomie et seront mises à mort entre 2 et 10 jours.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les procédures d’induction de la thrombose peuvent être source d’inconfort pour les animaux (douleur, durcissement de la zone de chirurgie, sensation de chaleur). Afin de réduire au maximum ces dommages, nous avons conçu ce projet dans le respect des 3R. En effet, nous avons élaboré des grilles d’évaluation de la douleur et du site de suture afin de limiter la souffrance des animaux.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Afin de réaliser des analyses histologiques et de cytométrie en flux, des prélèvements d’organes vitaux et de sang seront effectués sur les souris. C’est pourquoi, les animaux seront mis à mort par dislocation des vertèbres cervicales.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
La maladie veineuse thromboembolique est une maladie multifactorielle impliquant le système vasculaire, les cellules circulantes (plaquettes, globules rouges et cellules immunitaires) et les organes lymphoïdes secondaires. L’étude des mécanismes qui provoquent ou contribuent à la thrombose veineuse nécessite la mise en place de protocoles in vivo pour que toutes les composantes nécessaires soient présentes. Il n’est aujourd’hui pas possible de reproduire la thrombose veineuse par l’utilisation de modèles in vitro.
2. Réduction
• Nous devrons faire des groupes de 12-15 animaux afin de se placer au plus près de la loi Normale (Test de Shapiro) et d’obtenir un p inférieur à 0,05. Les moyennes de 2 échantillons (souris d’intérêts et leurs contrôles) seront analysées avec un t-test et les moyennes de plus de 2 échantillons (comparaison des lots) seront analysées par un test Anova suivi d’un post-test de Tukey. • Nous constituerons des groupes de 15 animaux et nous ferons un point à n=12 animaux inclus dans l’expérience en réalisant une étude statistique avant de poursuivre ou non les inclusions d’animaux. • Nous avons optimisé nos tests de sorties afin qu’au terme de chaque procédure expérimentale, le sang et différents organes soient prélevés sur un même animal et puissent servir aux analyses. • L’utilisation de l’échographie-doppler permet de réduire le nombre d’animaux par groupe et de ne pas inclure dans nos procédures des animaux qui n’auraient pas développé de thrombose veineuse suite à la chirurgie.
3. Raffinement
La douleur et le site de suture des animaux seront jugés selon des grilles d’observation et chaque animal ayant atteint les points limites sera pris en charge.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
L’utilisation de souris comme modèle d’étude de la maladie veineuse thromboembolique est pertinente car : – Le modèle de thrombose veineuse utilisé dans ce projet chez la souris est très bien caractérisé dans la littérature. – Nous maîtrisons la technique chirurgicale nécessaire à la mise en place de ce modèle. – Nous utiliserons les souris transgéniques µMT (B6.129S2-Ighmtm1Cgn/J) qui ont subi un knockout pour un gène codant la chaîne lourde de la fraction constante des immunoglobulines de type M et n’ont pas de lymphocyte B matures. Les souris témoins sont de la souche suivante : JAX™ C57BL/6J SOPF. La maladie veineuse thromboembolique touche les adultes, tous les animaux que nous utiliserons seront âgés de 8 à 12 semaines dont le poids variera entre 20-30g.