Enseignement pratique de physiologie et d’expérimentation animale sur rongeur (rats et souris)

Le projet que nous proposons est un projet de formation des étudiants à la physiologie animale et s’inscrit dans la troisième année de notre parcour. Afin de réduire l’utilisation d’animaux pour la formation d’un étudiant à la physiologie nous avons modifié notre programme de cours afin qu’il soit couplé à la formation réglementaire d’applicateur des procédures et de soins aux animaux décernéé par notre établissement et habilitée par le ministère de l’Enseignement supérieur et la CNEA. Notre formation nécessite la réalisation de travaux pratiques sur des rongeurs pour compléter les connaissances acquises pendant les enseignements par des études expérimentales et pour initier aux techniques de l’expérimentation animale (préhension, contention, anesthésies des animaux, prélèvements d’organes, études de mécanismes in vitro et in vivo). Le maintien des travaux pratiques permet d’augmenter les chances de réussite des étudiants à leur arrivée sur le marché du travail. Ils permettent aussi de maintenir une confrontation directe des étudiants avec l’expérimentation animale et de les conforter dans leur plan de formation ou au contraire de leur laisser la possibilité d’une réorientation afin d’éviter des prises de conscience trop tardive, source d’échec et de difficultés pour les étudiants. Tous les étudiants de la formation n’effectuent pas ces travaux pratiques nécessitant l’apprentissage des techniques d’expérimentation animale. Seul les étudiants volontaires et ayant validés les enseignements de physiologie avec une note supérieure à 10/20 et un examen éthique et réglemantaire avec une note supérieure à 12/20 peuvent réaliser les procédures décrites dans cette saisine. Les autres étudiants réalisent des travaux pratiques sur des logiciels de simulations.

Le projet permettra de maintenir une confrontation des étudiants destinés à la recherche médicale avec la manipulation et l’expérimentation animale. Cette confrontation de l’étudiant à la réalité de l’expérimentation animale permet de conforter ou à l’inverse d’infirmer les choix d’orientation des étudiants. Ce projet est aussi nécessaire pour l’initiation des étudiants à la physiologie animale. Avec ce projet, chaque étudiant qui travaille en trinôme aura utilisé en tout 1 animal pour apprendre la contention d’animaux vigiles, les injections sur rongeurs, pour étudier la régulation de la glycémie, la régulation de la pression artérielle, la régulation de la fonction digestive et cardiaque, l’analyse électrocardiographique du cœur, la réalisation d’une culture primaire, mais aussi l’anesthésie d’une souris. Avec un animal (majoritairement des animaux de réformes qui étaient destinés à l’euthanasie pour tri génétique par exemple), les étudiants volontaires, sélectionnés sur leur maitrise de l’éthique et la réglementation en expérimentation animale et ayant les prérequis académiques necessaires à la poursuite de leur cursus en physiologie pourront valider leur diplome de physiologie et la formation réglementaire d’application des procédures et de soins aux animaux. Le couplage de notre formation avec la formation réglemantaire agréeé par la CNEA permet de former directement les étudiants aux bonnes pratiques de l’expérimentation animale et à l’utilisation de méthodes alternatives quand cela est possible. Pour les laboratoires de recherche, cela permet de recruter dès le master 1 des étudiants formés aux bonnes pratiques de l’expérimentation animale et detenteur d’une habilitation d’applicateur des procédures.

Durant nos trois procédures les animaux seront soumis à différentes interventions. Dans la première procédure , les animaux seront manipulés par les étudiants afin d’apprendre la préhension, la contention, l’injection intrapéritonéale et la mesure de glycémie. Dans cette procédure ils recevront une injection intrapéritonéale de glucose suivie de 5 prélevements de 3µl de sang au bout de la queue afin de mesurer la glycémie. Dans la seconde procédure, les souris recevront une injection d’anésthésiant et une injection intrapéritonéale soit d’un régulateur sympathique soit d’un régulateur parasympatique. Certaines souris seront euthanasiées afin de prélever l’intestin et du tissu adipeux dans l’objectif d’étudier la physiologie intestinale et de réaliser une culture primaire d’adipocytes. Dans la troisième procédure les rats reçoivent une injection de morphinique suivie d’une anesthésie sans réveil. Pendant l’anesthésie, les rats sont canulés sur la jugulaire et la carotide afin de mesurer la pression arterielle et de recevoir une injection en intraveineux d’un régulateur sympathique et parasympathique. Ensuite le coeur de ces animaux est prélevé afin de réaliser un TP la physiologie cardiaque.

Afin d’éviter toute nuisance pour les animaux, les travaux pratiques sont réalisés par trinôme d’étudiants dans un box isolé en présence d’un enseignant. Lors de nos protocoles la préhension des animaux pourra générer du stress. Afin de le limiter, la préhension sera réalisée avec un tube et les animaux seront habitués à être manipulés. Ensuite lors de la contention et des injections intrapéritonéales qui dureront moins d’une minute les animaux ressentiront du stress et la douleur d’une piqure d’aiguille. Pour le protocole de mesure de glycémie comme pour le protocole de mesure d’un électrocardiogramme les nuisances attendues seront aussi du stress lié à la manipulation des animaux et la douleur d’une piqure d’aiguille. Cette nuisance sera très courte et durera moins d’une minute. Pour la mesure de glycémie le protocole nécessite aussi le retrait de la nourriture pendant 6h. Pendant ces 6 heures les animaux pourront néanmoins boire à volonté. Pour les deux protocoles, suite à l’injection qui générera la douleur d ‘une piqure d’aiguille nous gardons la souris sous surveillance pendant 1 heure afin d’observer les signes cliniques et de comportement. Si le comportement de la souris est anormal après l’injection (souris prostrée, qui évite les interactions avec les congénères, saignements apparents) nous procédons immédiatement à son euthanasie. Pour le protocole sur les rats les nuisances attendues seront aussi un stress lié à la préhension et la douleur d’une piqure d’aiguille. Sinon pendant la période d’hébergement le projet n’aura aucun impact sur les 5 libertés individuelles de l’animal. Nos animaux pourront s’alimenter à leur convenance ce qui n’induira aucune sensation de faim ou de soif. Comme nos conditions d’élevages seront adaptées à la physiologie des animaux, nos souris ou nos rats n’auront aucune sensation de peur, de détresse, de stress physique ou thermique et de manque d’interaction sociale. Enfin, notre surveillance régulière aura pour but de prévenir toute douleur, lésion ou maladie sur nos animaux.

Quand cela sera possible nous essaierons de placer à l’adoption des souris. Par expérience nous arrivons à faire adopter tous les ans quelques souris aprés l’accord de la vétérinaire responsable de notre animalerie en lien avec la ddpp. Les autres souris seront euthanasiées car non replaçable dans d’autres procédures. De plus dans la plupart des cas, il s’agira de souris qui étaient déja destinées à l’euthanasie et reutilisées pour nos séances de travaux pratiques. Pour les rats il s’agit d’une classe sans réveil ou le coeur est prélevé

Nous adaptons les espèces en fonction des besoins. Les rats présentent l’avantage de pouvoir être manipulés plus facilement pour les expériences in et ex vivo. Les souris sont parfaites pour apprendre aux étudiants à manipuler un animal avec moins d’appréhension. Enfin, notre formation d’applicateur des procédures et de soins aux animaux est agréée sur rongeurs souris et rats. Pour les rats nous utilisons une lignée non-consanguine (Srague-Dawley) de 10-14 semaines c’est l’âge idéal d’utilisation des animaux et celui le plus utilisé dans la littérature. Pour les souris : nous utiliserons des souris adultes et quand cela est possible de réforme. L’âge précis n’a pas d’importances dans notre cas. Pour la souche elle peut varier avec les animaux de réforme mais dans la majorité des cas nous aurons des souris de lignée consanguine (C57BL6) et quand nous les commandons nous achetons des souris non consangunes (Swiss) de 10 semaines.