Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2023-10-30 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-901878)
3 368 rats vont être utilisés, tous tués à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. On leur induit une hyperammoniémie par médicament puis on administre des composés par voie intrapéritonéale ou par gavage, avec des prélèvements sanguins sous anesthésie et un prélèvement terminal intracardiaque, pour chercher un traitement de l’excès d’ammoniaque dans le sang. Le porteur indique que les gavages répétés peuvent irriter et que les prélèvements se font sous anesthésie pour réduire le stress. Il conclut qu’aucune méthode in vitro ou in silico ne reproduit l’ensemble des symptômes et qu’il est donc « nécessaire » de travailler sur un « organisme entier ».
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Note de l'OXA. Cette question est celle du formulaire européen de résumé non technique. Elle est posée au laboratoire qui demande l'autorisation, et sa réponse est écrite avant que la première procédure commence (arrêté du 1er février 2013, art. 5). Ces objectifs servent à justifier l'utilisation des animaux devant le comité d'éthique. Aucun document public ne dira ensuite s'ils ont été atteints : la directive permet aux États de faire mettre à jour le résumé avec les résultats de l'appréciation rétrospective (directive 2010/63/UE, art. 43), la base européenne prévoit de les recevoir, et aucune entrée française n'en porte (base ALURES).
Le but du projet est de rechercher des produits efficaces pour diminuer significativement une hyperammoniémie induite par un traitement médicamenteux. Chez l’humain adulte, une petite partie de l’ammoniaque est utilisée pour la synthèse des protéines et d’autres composés essentiels. Le reste est un déchet neurotoxique et il doit être éliminé. La majeure partie de l’ammoniaque est excrétée dans l’urine sous forme d’urée. Cependant, l’ammoniémie, qui représente la concentration d’ammoniaque dans le sang, peut être fortement augmentée par différents facteurs comme certains médicaments (valproate de sodium, fluorouracil), une insuffisance hépatique, une anomalie du cycle de l’urée, ou un déficit enzymatique. Dans ces conditions, une hyperammoniémie aigûe sévère peut entraîner l’apparition d’une encéphalopathie avec oedème qui peut être mortelle. Une hyperammoniémie moins sévère peut entraîner une léthargie, des maux de tête, un état de confusion et de l’agitation. De même, une hyperammoniémie chronique légère pourrait favoriser des troubles neuropsychiatriques. La neurotoxicité de l’ammoniaque entraîne également des perturbations au niveau des neurotransmetteurs, de la production d’énergie et du débit sanguin cérébral notamment. Ce projet consiste à identifier des produits inducteurs d’hyperammoniémie, et de rechercher des produits qui pourraient réduire et/ou prévenir cette hyperammoniémie, selon un protocole établi à partir de données de la littérature. Actuellement, il n’y a pas de guide ou de protocole pour faire face à une hyperammoniémie induite par un médicament. Les solutions proposées sont l’arrêt du traitement médicamenteux, la diminution des doses ou la poursuite du traitement en mesurant l’ammoniémie régulièrement. Une hémodialyse est la thérapie la plus efficace pour supprimer une hyperammoniémie, mais c’est très invasif. Deux procédures seront utilisées dans notre projet : la première procédure permettra valider la méthode de prélèvement du sang et la méthode de dosage de l’ammoniémie, et d’identifier des produits inducteurs d’hyperammoniémie; la deuxième procédure consistera à évaluer l’effet de différents traitements capables de réduire et/ou de prévenir cette hyperammoniémie.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Note de l'OXA. Le formulaire européen demande les bénéfices « susceptibles de découler » du projet. Il appelle donc une projection, et il l'obtient : ce que le laboratoire écrit ici est ce qu'il espère, avant d'avoir commencé. Deux chercheuses ont repris six corpus d'études précliniques déjà menées et pesé les dommages réellement infligés aux animaux contre les bénéfices cliniques réellement obtenus : moins de 7 % de ces études ressortaient défendables (Pound et Nicol, 2018).
Actuellement, il n’y a pas de guide ou de protocole pour faire face à une hyperammoniémie induite par un médicament. Il est important de développer de nouveaux traitements qui permettraient de réduire et/ou de prévenir une hyperammoniémie.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Note de l'OXA. La formule « en règle générale » autorise une réponse générale, et c'est l'un des points sur lesquels les examens de qualité trouvent ces documents défaillants. Cruelty Free International a établi en 2018 que les résumés allemands et britanniques, les seuls examinés à ce jour, décrivaient mal ce qui est fait aux animaux et ce que ceux-ci pourraient éprouver (Taylor et al., 2018). L'adoption d'un modèle commun européen a nettement amélioré le premier point, à peine le second (Taylor et al., 2024).
Deux prélèvements sanguins à 30 ou 90 minutes d’intervalle auront lieu sous anethésie générale pour réduire le stress et la douleur. Le protocole de chaque prélèvement comprend l’anesthésie, le prélèvement et l’arrêt du saignement, et dure environ 10 minutes. Une ou deux administrations de produits seront réalisés par voies intrapéritonéale ou par gavage.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Note de l'OXA. C'est l'endroit du document où les animaux devraient apparaître, et c'est celui qui résiste. Cruelty Free Europe a mesuré en 2024 que cinq des six éléments attendus sur les dommages prévus progressaient depuis l'adoption d'un modèle commun européen. Les effets indésirables sont le sixième : 41 % des résumés allemands et 48 % des britanniques les décrivent complètement. Les auteurs relèvent aussi des effets présentés comme minimes sur des projets classés modérés ou sévères (Taylor et al., 2024). Ces deux pays sont les seuls dont les résumés ont été examinés. Les résumés français relèvent du même modèle européen, et leur qualité n'a jamais été mesurée.
Les animaux sont observés attentivement en respectant les points limites et ils seront euthanasiés en cas d’atteinte des points limites. L’administration répétée par gavage peut entraîner des irritations, c’est pourquoi les traitements seront effectués par une personne expérimentée à l’aide de sondes souples pour limiter le stress et les irritations liés aux gavages répétés. Les prélèvements sanguins des animaux se feront sous anesthésie générale afin de réduire le stress de la manipulation et toute souffrance.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Note de l'OXA. Le formulaire demande de justifier ce sort, non de le décrire. L'analyse dommage-avantage que la directive impose au comité d'éthique porte sur « la souffrance, la douleur et l'angoisse » infligées aux animaux (directive 2010/63/UE, art. 38). Quand ce sort est la mise à mort, celle-ci ne figure donc pas parmi les dommages que le comité met en balance avec les bénéfices annoncés. L'OXA écrit « mise à mort » plutôt que « sacrifice », qui emprunte au registre du don consenti, ou « euthanasie », qui désigne une mort décidée dans l'intérêt de celui qui meurt.
En fin de procédure, chaque animal sera euthanasié après prélèvement de sang par voie intracardiaque et recueil d’un grand volume de sang.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Note de l'OXA. La directive demande au résumé « une démonstration de la conformité » aux exigences de remplacement, de réduction et de raffinement (directive 2010/63/UE, art. 43). C'est donc le demandeur qui démontre sa propre conformité, dans le document même qui sollicite l'autorisation. Cette démonstration peut prendre la forme d'une affirmation qu'aucune méthode de substitution n'existe, que le document n'a pas à sourcer. Ces trois exigences sont par ailleurs subordonnées à l'objectif du projet : elles cherchent à remplacer les animaux dans un projet donné, elles n'interrogent pas ce projet.
L’étude de l’ammoniémie chez l’animal implique l’utilisation d’animaux entiers. L’hyperammoniémie est une pathologie complexe avec des symptômes qui touchent différents organes. L’utilisation de modèle avec des organes isolés ne permet pas d’enregistrer l’influence de différents produits sur l’hyperammoniémie. Des résultats obtenus lors de précédentes études et des données de la littérature permettent de sélectionner les produits à étudier (doses, voies d’administration, volumes). Des alternatives non animales ne peuvent être envisagées pour rechercher l’ensemble des objectifs prévus. Les méthodes expérimentales in vitro ou in silico ne permettent pas de reproduire l’ensemble des symptômes de l’hyperammoniémie, il est donc nécessaire de travailler sur un organisme entier.
2. Réduction
Note de l'OXA. La réduction dont il est question ici porte sur le nombre d'animaux par groupe expérimental, calculé pour que l'analyse statistique tienne. Le total annoncé dans la fiche est une estimation portant sur une autorisation de cinq ans au maximum (code rural, art. R214-123) : il ne dit pas combien d'animaux seront effectivement utilisés, et il ne se rapporte pas à une année.
La variabilité des réponses aux effets d’un traitement chez le rongeur justifie une taille de groupe de minimum 12 animaux par condition expérimentale. Un effectif inférieur expose à un risque de devoir reproduire les procédures pour valider statistiquement la solidité des résultats obtenus par une analyse de la variance (ANOVA). En cas de résultat significatif, les différences entre chaque groupe et le groupe contrôle seront explorées à l’aide d’un test de comparaisons multiples adapté (Dunnett ou Tukey). En cas de trop petit nombre d’animaux, il faudrait refaire une étude pour confirmer les effets et observer des différences significatives entre les groupes. En cas de faible ou non efficacité d’un produit, son étude sera arrêtée.
3. Raffinement
Note de l'OXA. Le raffinement nomme une amélioration technique de la procédure, sans dire ce qu'elle change pour l'animal qui la subit. La réglementation impose d'atténuer la douleur, dans une limite qu'elle inscrit elle-même : « pour autant que cela soit compatible avec la finalité de la procédure expérimentale » (code rural, art. R214-109). Ce qui reste de souffrance après cette limite est autorisé. Le raffinement ne porte par ailleurs que sur la procédure : les souffrances de la captivité elle-même, confinement, bruit, lumière, manipulations d'entretien, ne relèvent d'aucun des trois R.
Une surveillance attentive des animaux est réalisée. Les animaux seront hébergés à plusieurs afin de maintenir leur socialisation et dans des cages enrichies. Les administrations par voie orale seront effectuées sur des animaux vigiles par du personnel expérimenté, à l’aide de sondes souples pour limiter les irritations. Les prélèvements de sang se font sous anesthésie générale. Les animaux seront observés attentivement en respectant les points limites. Ils seront euthanasiés en cas d’atteinte des points limites mis en place pour limiter la douleur, la souffrance et l’angoisse.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Note de l'OXA. Le dossier d'autorisation demande de justifier l'origine des animaux, leur espèce, leur nombre estimé et leur stade de développement (arrêté du 1er février 2013, art. 5). La justification attendue est technique : elle porte sur l'adéquation de l'espèce à l'objectif poursuivi. Ce que l'appartenance à une espèce autorise à faire subir à un individu est une question morale, et le formulaire ne la pose pas. L'appartenance à une espèce, prise seule, ne fonde pourtant pas de différence de statut moral entre des individus également capables de souffrir.
Après recherche bibliographique, le rat est apparu parmi les modèles animaux les plus fréquemment décrits, et les mieux appropriés pour ce projet. Les animaux utilisés sont des adultes conformément aux publications de référence.