Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2022-10-21 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-123490)
195 souris vont être utilisées dans des procédures menées sous anesthésie générale, les animaux étant tués avant tout réveil. Sous anesthésie, elles subissent un prélèvement de sang dans la veine cave, une mesure du temps de saignement à la queue, puis une lésion thrombotique de la carotide provoquée par un patch de perchlorure de fer, pour étudier l’effet de la carbamylation du collagène sur la thrombose. Le porteur indique que les animaux, anesthésiés puis mis à mort par dislocation cervicale, ne présenteraient aucune douleur. Il affirme qu’aucun modèle de substitution n’existe pour mesurer le temps de saignement, la thrombose étant un phénomène « complexe, multifactoriel, multicellulaire ».
Résumé produit par un modèle de langage à partir du seul texte du laboratoire, selon une méthode arrêtée par l’OXA. Publié sans relecture individuelle préalable, sous la responsabilité de l’association, et corrigé au fil des relectures.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
Décrire les objectifs du projet.
Note de l'OXA. Cette question est celle du formulaire européen de résumé non technique. Elle est posée au laboratoire qui demande l'autorisation, et sa réponse est écrite avant que la première procédure commence (arrêté du 1er février 2013, art. 5). Ces objectifs servent à justifier l'utilisation des animaux devant le comité d'éthique. Aucun document public ne dira ensuite s'ils ont été atteints : la directive permet aux États de faire mettre à jour le résumé avec les résultats de l'appréciation rétrospective (directive 2010/63/UE, art. 43), la base européenne prévoit de les recevoir, et aucune entrée française n'en porte (base ALURES).
Dans quel but fait-on ça ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Selon les données de l’Organisation Mondiale de la Santé, d’ici à 2030, une personne sur six dans le monde aura 60 ans ou plus. Cet allongement de la durée de vie engendre une explosion des maladies chroniques telles que les affections cardiovasculaires. Du point de vue biologique, le vieillissement est le produit de l’accumulation d’un vaste éventail de dommages moléculaires et cellulaires au fil du temps. Au niveau vasculaire, le vieillissement conduit à des modifications des constituants des vaisseaux, dont le collagène. Le collagène voit ses propriétés structurales et fonctionnelles altérées en partie à cause de modifications chimiques appelées réactions de carbamylation. Ces réactions de carbamylation sont également amplifiées lors de l’insuffisance rénale chronique, pathologie conduisant à des complications thrombotiques mais aussi hémorragiques. Ce projet a donc pour but d’étudier les effets de la carbamylation du collagène sur les fonctions des plaquettes sanguines dans l’hémostase et la thrombose artérielle dans un modèle murin.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Note de l'OXA. Le formulaire européen demande les bénéfices « susceptibles de découler » du projet. Il appelle donc une projection, et il l'obtient : ce que le laboratoire écrit ici est ce qu'il espère, avant d'avoir commencé. Deux chercheuses ont repris six corpus d'études précliniques déjà menées et pesé les dommages réellement infligés aux animaux contre les bénéfices cliniques réellement obtenus : moins de 7 % de ces études ressortaient défendables (Pound et Nicol, 2018).
Est-ce « inutile » ou « nécessaire » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Ce projet d’expérimentation animale permettra de déterminer quels sont les impacts de la carbamylation du collagène et/ou des plaquettes sur l’agrégation plaquettaire, l’hémostase et la thrombose artérielle grâce à l’utilisation de modèles animaux parfaitement maîtrisés par le laboratoire porteur du projet et ayant fait l’objet de validations antérieures par le comité d’éthique. En d’autres termes, les résultats de ce projet permettront de déterminer si la carbamylation du collagène, qui survient au cours du vieillissement physiologique et qui est amplifiée lors de l’IRC, constitue un facteur de risque d’évènements cardiovasculaires (thrombose, hémorragie) chez les patients insuffisants rénaux, dont le taux de mortalité dû aux maladies cardiovasculaires chez les personnes dialysées est de 10 à 30 fois plus élevé que dans la population générale. Il permettra également de déterminer si la carbamylation des plaquettes affecte leur capacité à agréger.
Nuisances prévues, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Note de l'OXA. La formule « en règle générale » autorise une réponse générale, et c'est l'un des points sur lesquels les examens de qualité trouvent ces documents défaillants. Un examen publié en 2018 a établi que les résumés allemands et britanniques décrivaient mal ce qui est fait aux animaux et ce que ceux-ci pourraient éprouver (Taylor et al., 2018). L'adoption d'un modèle commun européen a nettement amélioré le premier point, à peine le second (Taylor et al., 2024).
Le droit d'accès aux documents · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Pour la première procédure, les animaux, sous anesthésie générale, seront soumis à un prélèvement sanguin au niveau de la veine cave inférieure. Pour la deuxième procédure, les animaux, sous anesthésie générale, seront soumis à une mesure de temps de saignement mesuré au niveau de la queue. Pour la troisième procédure, les animaux, sous anesthésie générale, seront soumis à une lésion thrombotique par application d’un patch de perchlorure de fer au niveau de l’artère carotide afin de suivre la formation du thrombus en temps réel par vidéo-microscopie intra-vitale. Au préalable, une injection de rhodamine 6G sera réalisée afin de rendre les plaquettes des animaux fluroescentes.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Note de l'OXA. C'est l'endroit du document où les animaux devraient apparaître, et c'est celui qui résiste. Un nouvel examen, publié en 2024, a mesuré que cinq des six éléments attendus sur les dommages prévus progressaient depuis l'adoption d'un modèle commun européen. Les effets indésirables sont le sixième : 41 % des résumés allemands et 48 % des britanniques les décrivent complètement. Les auteurs relèvent aussi des effets présentés comme minimes sur des projets classés modérés ou sévères (Taylor et al., 2024). Ces mesures portent sur l'Allemagne et le Royaume-Uni. L'examen de 2018 classait la France parmi les pays les moins bons pour l'identification, l'accessibilité et la qualité de ses résumés, sans les noter rubrique par rubrique (Taylor et al., 2018). Les résumés français suivent aujourd'hui le modèle européen commun.
Les animaux souffrent-ils ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Pas de nuisances, effets indésirables, ou critère prévisible de douleur dans la mesure où les animaux seront sous anesthésie générale (100 mg/kg kétamine, 10 mg/kg xylazine) durant les manipulations, puis sacrifiés en fin de protocole (pas de réveil). Par ailleurs, le modèle basé sur l’ajout de cyanate de sodium (jusqu’à 15 mM) dans l’eau de boisson des souris a déjà été validé et utilisé précédemment dans d’autres projets de l’équipe. Les souris recevant ce traitement n’ont jamais montré quelconque signe de souffrance ou effet secondaire.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Note de l'OXA. Le formulaire demande de justifier ce sort, non de le décrire. L'analyse dommage-avantage que la directive impose au comité d'éthique porte sur « la souffrance, la douleur et l'angoisse » infligées aux animaux (directive 2010/63/UE, art. 38). Quand ce sort est la mise à mort, celle-ci ne figure donc pas parmi les dommages que le comité met en balance avec les bénéfices annoncés. L'OXA écrit « mise à mort » plutôt que « sacrifice », qui emprunte au registre du don consenti, ou « euthanasie », qui désigne une mort décidée dans l'intérêt de celui qui meurt.
Peut-on parler d'éthique en expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Pour chaque procédure, l’ensemble des animaux seront mis à mort par dislocation des vertèbres cervicales à la fin des expérimentations.
Application de la règle des "3R", selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
1. Remplacement
Note de l'OXA. La directive demande au résumé « une démonstration de la conformité » aux exigences de remplacement, de réduction et de raffinement (directive 2010/63/UE, art. 43). C'est donc le demandeur qui démontre sa propre conformité, dans le document même qui sollicite l'autorisation. Cette démonstration peut prendre la forme d'une affirmation qu'aucune méthode de substitution n'existe, que le document n'a pas à sourcer. Ces trois exigences sont par ailleurs subordonnées à l'objectif du projet : elles cherchent à remplacer les animaux dans un projet donné, elles n'interrogent pas ce projet.
Comment avancer vers la fin de l'expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Ce projet s’inscrit dans la continuité d’une étude réalisée ex vivo à partir de plaquettes humaines ayant montré que la carbamylation du collagène augmente l’adhésion des plaquettes en condition statique alors qu’elle la diminue fortement en condition dynamique de cisaillement artériel en lien avec une diminution de la capacité du collagène carbamylé à lier le facteur von Willebrand plasmatique. Ce projet vise donc à valider les effets de la carbamylation dans les processus d’hémostase et/ou de thrombose in vivo chez la souris. La formation de thrombose artérielle est un phénomène complexe, multifactoriel, multicellulaire, qui nécessite l’utilisation de modèles intégrés. Par ailleurs, aucun modèle de substitution n’existe pour mesurer l’effet d’une substance ou d’une alimentation (ici riche en cyanate de sodium) sur le prolongement du temps de saignement. Enfin, les récepteurs présents à la surface des plaquettes pouvant différer entre l’homme et la souris (exemple des récepteurs à la thrombine PAR1 et PAR4 exprimés chez l’homme et PAR3 et PAR4 exprimés chez la souris), il convient de débuter ce projet par des mesures d’agrégation plaquettaire avant de considérer les études de mesure du temps de saignement et de thrombose artérielle.
2. Réduction
Note de l'OXA. La réduction dont il est question ici porte sur le nombre d'animaux par groupe expérimental, calculé pour que l'analyse statistique tienne. Le total annoncé dans la fiche est une estimation portant sur une autorisation de cinq ans au maximum (code rural, art. R214-123) : il ne dit pas combien d'animaux seront effectivement utilisés, et il ne se rapporte pas à une année.
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
L’étude considérée dans son intégralité est susceptible de concerner un nombre maximal de 195 souris C57BL/6 mâles, répartis en trois groupes : souris alimentées pendant 12 semaines avec 1 mM NaCl (groupe 1, contrôle), souris alimentées pendant 12 semaines avec 1 mM NaCNO (groupe 2), souris alimentées pendant 8 semaines avec 1 mM NaCNO puis pendant 4 semaines avec 1 mM NaCl (groupe 3). L’arrêt de l’alimentation en cyanate de sodium pendant 4 semaines permet la clairance totale du cyanate et des produits de carbamylation plasmatiques. Ainsi, seules les protéines tissulaires, et notamment vasculaires, restent carbamylées. Dans un premier temps, un nombre limité de 4 souris par condition expérimentale sera considéré pour une étude préliminaire qui permettra de juger de la nécessité de poursuivre l’expérimentation. Cette étude servira également à déterminer le nombre d’animaux nécessaire pour obtenir un résultat statistiquement significatif avec un nombre maximal considéré de 10 à 15 souris par condition expérimentale. L’estimation du nombre d’animaux nécessaires sera réalisée grâce au logiciel G-power et l’analyse statistique de la significativité sera réalisée en utilisant le test U de Mann-Whitney dans sa configuration bidirectionnelle
3. Raffinement
Note de l'OXA. Le raffinement nomme une amélioration technique de la procédure, sans dire ce qu'elle change pour l'animal qui la subit. La réglementation impose d'atténuer la douleur, dans une limite qu'elle inscrit elle-même : « pour autant que cela soit compatible avec la finalité de la procédure expérimentale » (code rural, art. R214-109). Ce qui reste de souffrance après cette limite est autorisé. Le raffinement ne porte par ailleurs que sur la procédure : les souffrances de la captivité elle-même, confinement, bruit, lumière, manipulations d'entretien, ne relèvent d'aucun des trois R.
La réglementation est-elle « très stricte » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Préalablement à la mise en place des expérimentations, les animaux seront hébergés dans des cages de 30 cm x 40 cm à raison de 5 souris par cage au maximum. En cas d’affrontement entre les animaux, le nombre de souris par cage sera réduit en conséquence. L’eau et la nourriture seront mis à disposition ad libitum et la litière changée régulièrement. Afin de limiter le stress des animaux, les cages seront enrichies de divers équipements d’activité (tubes de jeu, niche, papier…). À leur arrivée dans l’animalerie et avant toute manipulation, les souris subiront une phase d’acclimatation aux conditions d’hébergement du laboratoire durant une période de 10 jours. Le suivi du protocole et de sa réalisation sera effectué par les responsables du projet en concertation avec la structure en charge du Bien-être animal et les animaux seront anesthésiés durant toute la durée de l’expérience (jusqu’à la mise à mort), de manière à n’induire aucune souffrance. Durant la phase d’anesthésie, si une détérioration irréversible de l’état de l’animal est observée (accélération anormale du rythme cardiaque ou suffocation ou hypothermie importante), alors l’animal sera immédiatement euthanasié.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Note de l'OXA. Le dossier d'autorisation demande de justifier l'origine des animaux, leur espèce, leur nombre estimé et leur stade de développement (arrêté du 1er février 2013, art. 5). La justification attendue est technique : elle porte sur l'adéquation de l'espèce à l'objectif poursuivi. Ce que l'appartenance à une espèce autorise à faire subir à un individu est une question morale, et le formulaire ne la pose pas. L'appartenance à une espèce, prise seule, ne fonde pourtant pas de différence de statut moral entre des individus également capables de souffrir.
Spécisme et expérimentation animale · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
L’espèce animale choisie est la souris (Mus musculus). Il s’agit du modèle de référence pour l’étude du temps de saignement et de la thrombose artérielle et l’évaluation des propriétés anti-thrombotiques de composés. Par ailleurs, l’animalerie est agréée pour l’espèce souris. Des souris mâles seront utilisées à l’âge de 8 semaines, ce qui correspond au stade adulte (avant 12 mois chez la souris).