Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2024-02-26 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-314179)
Pour savoir si une protéine visée par des traitements anticancéreux modifie la migration des cellules immunitaires, 496 souris sont utilisées dans des procédures d’un niveau de souffrance léger à modéré. 400 d’entre elles subissent un prélèvement de la queue sous anesthésie pour le génotypage, 96 reçoivent une peinture fluorescente à l’aine et 96 une injection dans le coussinet plantaire avant la mise à mort et le prélèvement des ganglions. Le porteur précise que les animaux maintenus en élevage échappent à cette mise à mort, les autres étant tués à la fin des trois procédures. Il indique n’attendre aucun effet indésirable de la délétion génétique, reconnaît que manipulations et pesées sont des sources d’angoisse, et qualifie le modèle murin d' »incontournable ».
Résumé produit par un modèle de langage à partir du seul texte du laboratoire, selon une méthode arrêtée par l’OXA. Publié sans relecture individuelle préalable, sous la responsabilité de l’association, et corrigé au fil des relectures.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
Décrire les objectifs du projet.
Note de l'OXA. Cette question est celle du formulaire européen de résumé non technique. Elle est posée au laboratoire qui demande l'autorisation, et sa réponse est écrite avant que la première procédure commence (arrêté du 1er février 2013, art. 5). Ces objectifs servent à justifier l'utilisation des animaux devant le comité d'éthique. Aucun document public ne dira ensuite s'ils ont été atteints : la directive permet aux États de faire mettre à jour le résumé avec les résultats de l'appréciation rétrospective (directive 2010/63/UE, art. 43), la base européenne prévoit de les recevoir, et aucune entrée française n'en porte (base ALURES).
Dans quel but fait-on ça ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Ce projet vise à déterminer le rôle d’une protéine cible des cellules cancéreuse, PTK7 chez les cellules immunitaires en utilisant un modèle de souris in vivo. Cette protéine a largement été étudiée chez l’homme dans les tissus normaux et cancéreux. Elle est importante pour le développement embryonnaire ainsi que pour le maintien de l’homéostasie des adultes. Sa présence, augmentée dans les cancers est de mauvais pronostic, ce qui fait de PTK7 une cible thérapeutique dans plusieurs essais cliniques. Récemment, PTK7 a été observé dans certaines cellules du système immunitaire : les cellules dendritiques. Cependant, le rôle de cette protéine dans ces cellules et l’impact que pourrait générer les thérapies visant PTK7 dans les cancers reste inconnu. Afin d’étudier ce rôle et dans l’impossibilité d’accéder à des échantillons issus de prélèvements invasifs chez l’homme, l’utilisation d’un modèle animal est cruciale pour répondre à nos questions scientifiques. Nous allons développer un modèle unique de souris dans lequel la protéine PTK7 est éliminée des cellules dendritiques. Nous allons plus spécifiquement étudier l’impact de la perte de PTK7 dans la migration de ces cellules, la migration étant essentielle pour déclencher une réponse immunitaire anti-cancéreuse.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Note de l'OXA. Le formulaire européen demande les bénéfices « susceptibles de découler » du projet. Il appelle donc une projection, et il l'obtient : ce que le laboratoire écrit ici est ce qu'il espère, avant d'avoir commencé. Deux chercheuses ont repris six corpus d'études précliniques déjà menées et pesé les dommages réellement infligés aux animaux contre les bénéfices cliniques réellement obtenus : moins de 7 % de ces études ressortaient défendables (Pound et Nicol, 2018).
Est-ce « inutile » ou « nécessaire » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Cette étude nous permettra d’établir pour la première fois si la perte de la protéine PTK7 à la surface des cellules dendritiques altère leurs capacités migratoires in vivo et ainsi de mieux comprendre la biologie de ces cellules et l’impact que les thérapies ciblant PTK7 pourrait avoir dans la réponse anti-cancéreuse. Elle pourrait permettre d’anticiper d’éventuels effets secondaires des thérapies ciblant PTK7 dans le cancer.
Nuisances prévues, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Note de l'OXA. La formule « en règle générale » autorise une réponse générale, et c'est l'un des points sur lesquels les examens de qualité trouvent ces documents défaillants. Un examen publié en 2018 a établi que les résumés allemands et britanniques décrivaient mal ce qui est fait aux animaux et ce que ceux-ci pourraient éprouver (Taylor et al., 2018). L'adoption d'un modèle commun européen a nettement amélioré le premier point, à peine le second (Taylor et al., 2024).
Le droit d'accès aux documents · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Les animaux en élevage seront soumis, sous anesthésie gazeuse, au prélèvement d’une biopsie caudale afin de réaliser le génotypage, cela concernera 400 animaux. Dans les expériences de migration des cellules dendritiques, une solution de peinture fluorescente sera appliquée au niveau de l’aine des souris sous anesthésie gazeuse, elles seront ensuite surveillées quotidiennement jusqu’aux prélèvements des ganglions et de la peau après mise à mort par les procédures règlementaires, cela concernera 96 animaux issus de l’élevage. Dans les expériences de migration par compétition, un mélange de cellules dendritiques dans un volume faible sera injecté dans le coussinet plantaire d’une seule patte arrière des souris sous anesthésie gazeuse suivie d’une analgésie préventive, elles seront ensuite surveillées 2 et 4 heures après l’injection jusqu’aux prélèvements des ganglions après mise à mort par les procédures règlementaires 14 heures après. Cela concernera 96 animaux. Les différentes interventions ne sont pas invasives et dureront chacune 1 à 2 minutes.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Note de l'OXA. C'est l'endroit du document où les animaux devraient apparaître, et c'est celui qui résiste. Un nouvel examen, publié en 2024, a mesuré que cinq des six éléments attendus sur les dommages prévus progressaient depuis l'adoption d'un modèle commun européen. Les effets indésirables sont le sixième : 41 % des résumés allemands et 48 % des britanniques les décrivent complètement. Les auteurs relèvent aussi des effets présentés comme minimes sur des projets classés modérés ou sévères (Taylor et al., 2024). Ces mesures portent sur l'Allemagne et le Royaume-Uni. L'examen de 2018 classait la France parmi les pays les moins bons pour l'identification, l'accessibilité et la qualité de ses résumés, sans les noter rubrique par rubrique (Taylor et al., 2018). Les résumés français suivent aujourd'hui le modèle européen commun.
Les animaux souffrent-ils ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Les souris qui vont être utilisées dans ce projet portent une délétion du gène PTK7 restreinte à une sous population de cellules immunitaires. Nous n’attendons pas de phénotype avec des effets indésirables chez les animaux issus de ces croisements. L’anesthésie, le prélèvement pour génotypage et les administrations de réactifs constitueront une nuisance pour les animaux. De même, les manipulations et pesées seront des sources d’angoisse.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Note de l'OXA. Le formulaire demande de justifier ce sort, non de le décrire. L'analyse dommage-avantage que la directive impose au comité d'éthique porte sur « la souffrance, la douleur et l'angoisse » infligées aux animaux (directive 2010/63/UE, art. 38). Quand ce sort est la mise à mort, celle-ci ne figure donc pas parmi les dommages que le comité met en balance avec les bénéfices annoncés. L'OXA écrit « mise à mort » plutôt que « sacrifice », qui emprunte au registre du don consenti, ou « euthanasie », qui désigne une mort décidée dans l'intérêt de celui qui meurt.
Peut-on parler d'éthique en expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Tous les animaux seront mis à mort à la fin des 3 procédures pour prélèvement à l’exception des animaux en élevage.
Application de la règle des "3R", selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
1. Remplacement
Note de l'OXA. La directive demande au résumé « une démonstration de la conformité » aux exigences de remplacement, de réduction et de raffinement (directive 2010/63/UE, art. 43). C'est donc le demandeur qui démontre sa propre conformité, dans le document même qui sollicite l'autorisation. Cette démonstration peut prendre la forme d'une affirmation qu'aucune méthode de substitution n'existe, que le document n'a pas à sourcer. Ces trois exigences sont par ailleurs subordonnées à l'objectif du projet : elles cherchent à remplacer les animaux dans un projet donné, elles n'interrogent pas ce projet.
Comment avancer vers la fin de l'expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Ce projet vise à évaluer l’impact de la protéine PTK7 dans la migration de cellules immunitaires in vivo, ce qui n’est pas faisable chez l’Homme. Les techniques de migration in vitro existent mais elles ne remplacent pas le contexte physiologique c’est-à-dire la migration des cellules immunitaires à travers les vaisseaux lymphatiques. Par sa similarité avec le système immunitaire humain et sa manipulation génétique, l’utilisation du modèle murin reste incontournable.
2. Réduction
Note de l'OXA. La réduction dont il est question ici porte sur le nombre d'animaux par groupe expérimental, calculé pour que l'analyse statistique tienne. Le total annoncé dans la fiche est une estimation portant sur une autorisation de cinq ans au maximum (code rural, art. R214-123) : il ne dit pas combien d'animaux seront effectivement utilisés, et il ne se rapporte pas à une année.
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Afin d’éviter l’utilisation d’un grand nombre de souris, nous avons mis en place un modèle in vitro de culture de cellules dendritiques dérivées de moelle osseuse. Ce modèle a l’avantage de générer des millions de cellules dendritiques à partir d’une seule souris contrairement au modèle ex vivo où nous en obtenons 100 fois moins. Nous avons confirmé que la protéine PTK7 est bien exprimée par les cellules dendritiques issues de ces cultures, nous pourrons donc les utiliser et ainsi réduire l’utilisation de cellules isolées ex vivo provenant des souris.
3. Raffinement
Note de l'OXA. Le raffinement nomme une amélioration technique de la procédure, sans dire ce qu'elle change pour l'animal qui la subit. La réglementation impose d'atténuer la douleur, dans une limite qu'elle inscrit elle-même : « pour autant que cela soit compatible avec la finalité de la procédure expérimentale » (code rural, art. R214-109). Ce qui reste de souffrance après cette limite est autorisé. Le raffinement ne porte par ailleurs que sur la procédure : les souffrances de la captivité elle-même, confinement, bruit, lumière, manipulations d'entretien, ne relèvent d'aucun des trois R.
La réglementation est-elle « très stricte » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Afin d’améliorer le cadre de vie des animaux, les besoins physiologiques seront respectés (nourriture et eau ad libitum). Les animaux seront hébergés dans des salles dont les paramètres d’ambiance sont contrôlés (température : 20-22°C ; renouvellement d’air : 15 volumes/heure ; éclairage artificiel : 12h jour / 12h nuit). Nous optimiserons les conditions d’hébergement des animaux par la présence d’enrichissement dans les cages (copeaux de bois compactés, lanières de papier et/ou coton) et par leur maintien en groupes de 3 à 5 afin d’éviter le stress de l’isolement. Les procédures expérimentales d’induction de l’inflammation et d’injection sous-cutanée dans les coussinets seront réalisées sous anesthésie, une analgésie et un suivi seront mis en place. Les animaux feront l’objet d’une surveillance quotidienne par du personnel compétent afin de détecter précocement toute altération du bien-être animal. L’apparition de signes d’inconfort ou d’éventuelle souffrance nous conduira à choisir l’action appropriée à mener en fonction d’une grille de score du bien-être.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Note de l'OXA. Le dossier d'autorisation demande de justifier l'origine des animaux, leur espèce, leur nombre estimé et leur stade de développement (arrêté du 1er février 2013, art. 5). La justification attendue est technique : elle porte sur l'adéquation de l'espèce à l'objectif poursuivi. Ce que l'appartenance à une espèce autorise à faire subir à un individu est une question morale, et le formulaire ne la pose pas. L'appartenance à une espèce, prise seule, ne fonde pourtant pas de différence de statut moral entre des individus également capables de souffrir.
Spécisme et expérimentation animale · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
La protéine tyrosine kinase PTK7 et son rôle dans le développement embryonnaire et dans les cancers (sein, colon et poumon) ont été largement étudiés chez les cellules normales et cancéreuses. PTK7 a été observé dans les cellules dendritiques présentatrices d’antigènes du système immunitaire mais son rôle reste complétement inconnu. Le modèle de souris déficientes en PTK7 et conditionné aux cellules dendritiques nous permettra d’étudier in vivo l’impact de la perte de PTK7 dans la migration, une des fonctions principales de ces cellules. Le système immunitaire est présent uniquement chez les vertébrés et en particulier, les cellules dendritiques humaines et murines sont équivalentes. La taille, la rapidité du cycle de reproduction et la génétique font aussi que la souris est l’espèce la plus appropriée pour notre étude. Les animaux utilisés dans ce projet seront des animaux de la naissance à l’âge adulte pour l’évaluation et le maintien de la lignée puis à l’âge adulte (8-12 semaines) car le système immunitaire est mature à cet âge.