Approches thérapeutiques d’une double agression infectieuse séquentielle chez la souris

L’objectif global de ce projet de recherche est d’appréhender les conséquences et les mécanismes régulateurs des dysfonctions immunitaires induites par un sepsis sur les fonctions de défense pulmonaire. Le sepsis étant défini par une infection généralisée responsable de défaillances multi-organes, l’utilisation d’animaux vivants est nécessaire afin d’investiguer les conséquences de l’immunodépression induite par le sepsis sur une pneumonie bactérienne secondaire, et d’évaluer le potentiel immunomodulatuer de thérapies médicamenteuses ou cellulaires. Cependant, certaines expériences de modulation fonctionnelle peuvent être effectuées à l’aide de lignées cellulaires ou de cellules primaires manipulées ex vivo qui viennent compléter des résultats obtenus par l’expérimentation in vivo. Ainsi le T2AA a déjà fait l’objet d’évaluations fonctionnelles et mécanistiques in vitro sur des polynucléaires neutrophiles isolés.

La procédure 1 a pour but d’optimiser les conditions d’administration intra-pulmonaire des cellules souches et ainsi réduire le nombre d’animaux utilisés dans la procédure 2. Les efforts de réduction impliquent la calibration de la sévérité des modèles en fonction des objectifs poursuivis, l’utilisation d’animaux de lignée, d’âge et de poids similaires, obtenus chez le même fournisseur. Dans la mesure du possible, les prélèvements d’organes et les investigations sont regroupées de manière à réduire au maximum le nombre d’animaux utilisés. Une technique d’inoculation est utilisée pour induire une pneumonie, très fiable pour contrôler la dose de bactéries effectivement instillées en intra-pulmonaire, et de fait réduit la variabilité du modèle. Des tests statistiques adaptés ont été utilisés pour calculer au mieux le nombre d’animaux nécessaires, en prenant en compte la variabilité inhérente à ce type de modèle.

L’induction d’une péritonite, ainsi que la chirurgie contrôle seront réalisées sous anesthésie générale suivie d’une analgésie et d’une réhydratation systématiques biquotidienne pendant 72h. La technique d’instillation pour induire une pneumonie est réalisée par les voies naturelles sous une brève mais profonde anesthésie générale gazeuse. Les animaux seront soumis à une surveillance rapprochée avec établissement de points-limites justifiant la mise à mort anticipée de l’animal. La chirurgie se fera sous analgésie et sous anesthésie générale. Les animaux seront maintenus en milieu enrichi. En collaboration avec le vétérinaire, des points-limites stricts et spécifiques au projet ont été introduits. Ces points limites sont simples et reproductibles sous la forme de la perte de poids (>20%) et d’un score de douleur et d’inconfort adapté à ces actes expérimentaux. En cas de perte de poids intermédiaire (10 à 20% du poids initial) un diet gel sera mis à disposition sur le sol de la cage pour assurer une hydratation et prise alimentaire.