Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2022-04-15 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-623918)
130 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance sévère. Des cellules de neuroblastome leur sont greffées sous la peau puis dans la glande surrénale par une chirurgie d’une heure, avant radiothérapie et administration de propranolol. Le porteur classe l’implantation orthotopique en gravité sévère et prévoit un hébergement isolé de cinq jours après la chirurgie. L’objectif est de tester un effet radiosensibilisant du propranolol, dans la perspective de traiter le neuroblastome de l’enfant.
Résumé produit par un modèle de langage à partir du seul texte du laboratoire, selon une méthode arrêtée par l’OXA. Publié sans relecture individuelle préalable, sous la responsabilité de l’association, et corrigé au fil des relectures.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
Décrire les objectifs du projet.
Note de l'OXA. Cette question est celle du formulaire européen de résumé non technique. Elle est posée au laboratoire qui demande l'autorisation, et sa réponse est écrite avant que la première procédure commence (arrêté du 1er février 2013, art. 5). Ces objectifs servent à justifier l'utilisation des animaux devant le comité d'éthique. Aucun document public ne dira ensuite s'ils ont été atteints : la directive permet aux États de faire mettre à jour le résumé avec les résultats de l'appréciation rétrospective (directive 2010/63/UE, art. 43), la base européenne prévoit de les recevoir, et aucune entrée française n'en porte (base ALURES).
Dans quel but fait-on ça ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Le propranolol a déjà été testé seul ou en association avec des chimiothérapies sur de nombreux cancers et a montré son efficacité sur des cultures cellulaires et in vivo (expérimentations sur rongeurs) sur les leucémies et différents carcinomes comme les mélanomes mais également chez l’Homme. L’utilisation de cette molécule est portée par l’effet bêtabloquants et l’inhibition de production des hormones de stress telles que les catécholamines et de leurs métabolites. L’efficacité du propranolol a été montrée sur 15 lignées de neuroblastomes (cancer du système nerveux) in vitro et in vivo. Plusieurs mécanismes d’action ont été décrits pour expliquer cette efficacité dont une action sur la mort cellulaire, une inhibition de la prolifération cellulaire, l’inhibition des métastases. Il a également été montré que le propanolol permettait d’obtenir une synergie d’action avec des chimiothérapies de référence telles que la vincristine et la doxorubicine. La radiothérapie est systématiquement utilisée chez les patients atteints de neuroblastome qui présentent des métastases mais son utilisation chez le jeune enfant est malheureusement régulièrement source de séquelles sur un organisme en croissance. Une radiosensibilisation par un médicament non toxique comme le propanolol permettrait potentiellement d’augmenter l’efficicacité de la radiothérapie sans augmenter les séquelles. L’objectif principal de ce projet est ainsi d’évaluer le potentiel radiosensibilisant du propanolol sur des lignées tumorales de neuroblastome après vérification de l’efficacité de l’association thérapeutique sur cultures cellulaires (réduction). Pour mener à bien cette étude 130 souris au total seront nécessaires. Dans un premier temps, 3 lignées tumorales de neuroblastome seront testées (32 souris par lignée, soit 96 souris au total) sur un modèle de greffe sous cutanée permettant de retenir la lignée tumorale la plus pertinente (celle dont les effets de l’administration du propanolol seront les plus marqués). Puis secondairement, l’efficacité du traitement au propanolol sera menée sur un modèle orthotopique (cellules injectées dans l’organe cible de la pathologie) sur 34 souris. Notre approche expérimentale permettra de réduire le nombre d’animaux utilisés en accord avec la règle des 3R.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Note de l'OXA. Le formulaire européen demande les bénéfices « susceptibles de découler » du projet. Il appelle donc une projection, et il l'obtient : ce que le laboratoire écrit ici est ce qu'il espère, avant d'avoir commencé. Deux chercheuses ont repris six corpus d'études précliniques déjà menées et pesé les dommages réellement infligés aux animaux contre les bénéfices cliniques réellement obtenus : moins de 7 % de ces études ressortaient défendables (Pound et Nicol, 2018).
Est-ce « inutile » ou « nécessaire » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Il a été montré que le propranolol permettait d’obtenir une synergie d’action avec des chimiothérapies telles que la vincristine et la doxorubicine, médicaments largement utilisés dans le traitement des cancers de l’enfant. Enfin, le propranolol étant hautement lipophile il passe la barrière hémato-encéphalique et permettrait de traiter des métastases ou des tumeurs primitives cérébrales. La radiothérapie est systématiquement utilisée chez les patients métastatiques associé à un mauvais pronostic. Son utilisation chez le jeune enfant peut être régulièrement source de séquelles sur un organisme en croissance. Une radiosensibilisation par un médicament non toxique comme le propranolol permettrait d’augmenter l’efficacité de la radiothérapie sans augmenter les séquelles. Cette radiosensibilisation interviendrait par un mécanisme d’interférence avec l’angiogenèse et la prolifération cellulaire, ainsi que par le potentiel blocage du cycle cellulaire dans une phase radiosensible.
Nuisances prévues, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Note de l'OXA. La formule « en règle générale » autorise une réponse générale, et c'est l'un des points sur lesquels les examens de qualité trouvent ces documents défaillants. Un examen publié en 2018 a établi que les résumés allemands et britanniques décrivaient mal ce qui est fait aux animaux et ce que ceux-ci pourraient éprouver (Taylor et al., 2018). L'adoption d'un modèle commun européen a nettement amélioré le premier point, à peine le second (Taylor et al., 2024).
Le droit d'accès aux documents · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Procédure 2 : Implantation orthotopique de cellules de neuroblastomes exprimant la luciférase (Lignées cellulaires Luc : SK-N-BE(2) c-Luc ou SH-EP-Luc ou SK-N-SH-Luc) au niveau de la glande surrénale nécessitant une procédure chirurgicale (J0 : induction tumorale) plus invasive. Une analgésie sera administrée ( combinaison buprenorphine/meloxicam à J0 avec réitération du meloxicam seul à à J1 et J2) afin de réduire au maximum la souffrance des animaux La chirurgie dure environ 1h (J0) et ne sera pas réitérée au cours de l’étude. A noter qu’une attention toute particulière sera portée aux animaux suite à cette procédure (soins post-opératoires et suivi quotidien)
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Note de l'OXA. C'est l'endroit du document où les animaux devraient apparaître, et c'est celui qui résiste. Un nouvel examen, publié en 2024, a mesuré que cinq des six éléments attendus sur les dommages prévus progressaient depuis l'adoption d'un modèle commun européen. Les effets indésirables sont le sixième : 41 % des résumés allemands et 48 % des britanniques les décrivent complètement. Les auteurs relèvent aussi des effets présentés comme minimes sur des projets classés modérés ou sévères (Taylor et al., 2024). Ces mesures portent sur l'Allemagne et le Royaume-Uni. L'examen de 2018 classait la France parmi les pays les moins bons pour l'identification, l'accessibilité et la qualité de ses résumés, sans les noter rubrique par rubrique (Taylor et al., 2018). Les résumés français suivent aujourd'hui le modèle européen commun.
Les animaux souffrent-ils ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
La procédure d’implantation des cellules tumorales en orthotopique dans le tissu des glandes surrénales est classée en gravité « sévère » mais l’utilisation d’analgésiques limitera la souffrance des animaux (cf procédure 2). Suite à cette chirurgie, l’hébergement sera en cage individuelle pendant 5 jours (le temps de la cicatrisation) après l’implantation des cellules (pour éviter que les animaux ne se rongent les fils) pouvant conduire à un stress des animaux (limitation des interactions sociales directes) mais cet effet sera limité par l’utilisation de cages transparentes.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Note de l'OXA. Le formulaire demande de justifier ce sort, non de le décrire. L'analyse dommage-avantage que la directive impose au comité d'éthique porte sur « la souffrance, la douleur et l'angoisse » infligées aux animaux (directive 2010/63/UE, art. 38). Quand ce sort est la mise à mort, celle-ci ne figure donc pas parmi les dommages que le comité met en balance avec les bénéfices annoncés. L'OXA écrit « mise à mort » plutôt que « sacrifice », qui emprunte au registre du don consenti, ou « euthanasie », qui désigne une mort décidée dans l'intérêt de celui qui meurt.
Peut-on parler d'éthique en expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
-Procédure 1 : implantation hétérotopique (sous-cutanée) de cellules de neuroblastomes (Lignées cellulaires : SK-N-BE(2) c, SH-EP, SK-N-SH) : animaux gardés en vie car induction tumorale est le point de départ de l’étude -Procédure 2 : implantation orthotopique de cellules de neuroblastomes exprimant la luciférase (Lignées cellulaires Luc : SK-N-BE(2) c-Luc ou SH-EP-Luc ou SK-N-SH-Luc) au niveau de la glande surrénale : animaux gardés en vie car induction tumorale est le point de départ de l’étude -Procédure 3 : administration intraveineuse du propanolol (qui sera combinée ou non à la radiothérapie) : animaux gardés en vie car stratégie thérapeutique testée est un point clé de l’étude -Procédure 4 : traitement par radiothérapie (qui sera combiné ou non à une administration de propanolol) : animaux gardés en vie car stratégie thérapeutique testée est un point clé de l’étude -Procédure 5 : Suivi de la croissance tumorale par imagerie par bioluminescence (modèle orthotopique) : animaux gardés en vie car suivi indispensable pour estimer l’efficacité des traitements et l’atteinte des points limites. A l’issue du projet, tous les animaux de l’étude seront mis à mort selon la méthode en vigueur décrite précédemment : aucune animal ne sera réutilisé, replacé ou adopté.
Application de la règle des "3R", selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
1. Remplacement
Note de l'OXA. La directive demande au résumé « une démonstration de la conformité » aux exigences de remplacement, de réduction et de raffinement (directive 2010/63/UE, art. 43). C'est donc le demandeur qui démontre sa propre conformité, dans le document même qui sollicite l'autorisation. Cette démonstration peut prendre la forme d'une affirmation qu'aucune méthode de substitution n'existe, que le document n'a pas à sourcer. Ces trois exigences sont par ailleurs subordonnées à l'objectif du projet : elles cherchent à remplacer les animaux dans un projet donné, elles n'interrogent pas ce projet.
Comment avancer vers la fin de l'expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Le remplacement des expérimentations animales par des méthodes alternatives n’est dans ce contexte clairement pas possible puisque le développement de neuroblastomes dépend de phénomènes biologiques complexes (influence du microenvironnement tumoral, différentiation de cellules nerveuses immatures de types fibroblastes, maturation de ces dernières, angiogenèse, processus inflammatoires…). De plus, le développement de ce type de tumeurs dépend entièrement du système nerveux sympathique. L’ensemble de ces facteurs complexes ne peut être appréhendé qu’in vivo sur un modèle animal.
2. Réduction
Note de l'OXA. La réduction dont il est question ici porte sur le nombre d'animaux par groupe expérimental, calculé pour que l'analyse statistique tienne. Le total annoncé dans la fiche est une estimation portant sur une autorisation de cinq ans au maximum (code rural, art. R214-123) : il ne dit pas combien d'animaux seront effectivement utilisés, et il ne se rapporte pas à une année.
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Dans le cadre de notre étude, 3 lignées tumorales sont étudiées pour le modèle hétérotopique (série 1). Cette étude préliminaire fait office de preuve de concept et permet de valider/invalider l’efficacité des traitements testés sur des modèles de première ligne (injection de cellules tumorales en sous-cutané). Il s’agira par la suite (série 2) de tester les composés sur un modèle orthotopique plus pertinent en ne gardant que la lignée dont les résultats auront été les plus prometteurs dans la série 1. Cette stratégie expérimentale permet d’éviter autant que possible d’utiliser des animaux dans des procédures de classe sévère (avec hirurgie opératoire) sans bénéfice évident et réduit le nombre d’animaux associés au modèle orthotopique. Une approche statistique (Mann-Whitney et Anova) sera menée afin d’évaluer l’efficacité des traitements.
3. Raffinement
Note de l'OXA. Le raffinement nomme une amélioration technique de la procédure, sans dire ce qu'elle change pour l'animal qui la subit. La réglementation impose d'atténuer la douleur, dans une limite qu'elle inscrit elle-même : « pour autant que cela soit compatible avec la finalité de la procédure expérimentale » (code rural, art. R214-109). Ce qui reste de souffrance après cette limite est autorisé. Le raffinement ne porte par ailleurs que sur la procédure : les souffrances de la captivité elle-même, confinement, bruit, lumière, manipulations d'entretien, ne relèvent d'aucun des trois R.
La réglementation est-elle « très stricte » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Une attention toute particulière sera portée aux animaux d’une part lors de la chirurgie orthotopique (série 2) d’implantation de la tumeur (anesthésie chimique, analgésie pré-opératoire avec réitération, maintien des conditions d’asepsie lors de la chirurgie, maintien de la température corporelle) mais également à travers des soins post-opératoires (désinfection et vérification de la bonne cicatrisation de la plaie). Une observation quotidienne des animaux sera menée (pesée, observation du comportement, vérification de l’alimentation et de l’hydratation) conjointement à un suivi par imagerie par bioluminescence permettant de s’assurer que la tumeur a un volume éthiquement acceptable. De la même façon, les animaux concernés par l’injection hétérotopique (série 1) (sous anesthésie chimique et désinfection de la région d’implantation) feront l’objet d’une attention toute particulière (observation quotidienne du comportement, pesée, vérification de l’alimentation et de l’hydratation).Le suivi longitudinal par mesure de la tumeur au pied à coulisse permettra de s’assurer que la tumeur a un volume éthiquement acceptable. L’atteinte d’un point limite décrit précédemment dans le descriptif des procédures conduira à la mise à mort de l’animal. Une attention toute particulière sera également portée lors du transport des animaux sur le site d’imagerie (série 2), notamment par le maintien d’une température optimale (par l’intermédiaire de bouillottes chauffantes placées sous les cages). Ce transport se fera toujours sous conditions éveillées. Les animaux bénéficieront en permanence d’un enrichissement sous forme de feuilles de sopalins et de bâtonnets en bois à ronger.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Note de l'OXA. Le dossier d'autorisation demande de justifier l'origine des animaux, leur espèce, leur nombre estimé et leur stade de développement (arrêté du 1er février 2013, art. 5). La justification attendue est technique : elle porte sur l'adéquation de l'espèce à l'objectif poursuivi. Ce que l'appartenance à une espèce autorise à faire subir à un individu est une question morale, et le formulaire ne la pose pas. L'appartenance à une espèce, prise seule, ne fonde pourtant pas de différence de statut moral entre des individus également capables de souffrir.
Spécisme et expérimentation animale · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Dans les études menées en oncologie, les modèles animaux utilisés sont majoritairement les modèles murins (souris et rats). Les souris constituent l’espèce de référence compte tenu de leur accessibilité et de leur facilité de manipulation. Les souris athymiques, présentant une lymphopénie T, sont classiquement utilisées dans le cas de greffes de cellules tumorales humaines du fait leur immunodéficience, il n’y a ainsi pas de rejet du greffon tumoral implanté. Des souris âgés de 6 semaines sont utilisées en référence aux données antérieures issues de la littérature.