Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2023-09-12 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-464722)
1 440 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger. Des femelles gestantes reçoivent une injection dans l’abdomen, parfois précédée de deux gavages destinés à inactiver des gènes, puis sont tuées quatre heures plus tard pour disséquer les embryons et prélever leurs gonades, elles aussi mises à mort. L’objectif est de comprendre les mécanismes de la différenciation sexuelle des gonades chez l’embryon, une recherche fondamentale. Le porteur affirme qu’aucune culture in vitro ne reproduit ce processus de développement et présente la souris comme un modèle « essentiel ».
Résumé produit par un modèle de langage à partir du seul texte du laboratoire, selon une méthode arrêtée par l’OXA. Publié sans relecture individuelle préalable, sous la responsabilité de l’association, et corrigé au fil des relectures.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
Décrire les objectifs du projet.
Note de l'OXA. Cette question est celle du formulaire européen de résumé non technique. Elle est posée au laboratoire qui demande l'autorisation, et sa réponse est écrite avant que la première procédure commence (arrêté du 1er février 2013, art. 5). Ces objectifs servent à justifier l'utilisation des animaux devant le comité d'éthique. Aucun document public ne dira ensuite s'ils ont été atteints : la directive permet aux États de faire mettre à jour le résumé avec les résultats de l'appréciation rétrospective (directive 2010/63/UE, art. 43), la base européenne prévoit de les recevoir, et aucune entrée française n'en porte (base ALURES).
Dans quel but fait-on ça ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
A l’heure où les différences entre les sexes sont reconnues comme des facteurs majeurs dans l’incidence ou l’évolution de nombreuses pathologies, il est surprenant que nous ayons une connaissance très partielle des bases moléculaires et cellulaires de la différenciation sexuelle. Chez l’homme (et la souris) l’appareil génital comprend différents organes, dont les gonades qui sont les organes producteurs des cellules sexuelles ou gamètes. Les spermatozoides sont produits par le testicule chez l’ homme et les ovocytes sont produits par les ovaires chez la femme. Selon le sexe de l’embryon, différents gènes sont activés et vont permettre aux gonades de se développer en testicules chez le futur petit garçon ou en ovaires chez la petite fille, ce qui va initier tout le développement sexuel de l’individu. Des défauts dans la formation des gonades aboutissent à des anomalies du développement sexuel avec des symptômes allant de l’absence de gonades à une inversion de sexe. Les signaux contrôlant la formation et la prolifération des différents types cellulaires qui composent les gonades embryonnaires, ovaires et testicules, demeurent largement inconnus. Cette connaissance est un prérequis pour élucider les mécanismes de développement des gonades et donc pour mieux comprendre l’origine des anomalies du développement sexuel. Notre objectif est de comprendre les mécanismes qui contrôlent la formation des lignages cellulaires du testicule et de l’ovaire embryonnaire. Nous analyserons des lignées de souris porteuses de mutations dans des gènes impliqués dans la différenciation gonadique pour déterminer le statut de différenciation et l’état de prolifération des populations cellulaires gonadiques. Au-delà des nouvelles connaissances sur les mécanismes moléculaires de la différenciation sexuelle, nos travaux contribueront à clarifier l’étiologie de certaines anomalies du développement sexuel et à améliorer leur prise en charge.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Note de l'OXA. Le formulaire européen demande les bénéfices « susceptibles de découler » du projet. Il appelle donc une projection, et il l'obtient : ce que le laboratoire écrit ici est ce qu'il espère, avant d'avoir commencé. Deux chercheuses ont repris six corpus d'études précliniques déjà menées et pesé les dommages réellement infligés aux animaux contre les bénéfices cliniques réellement obtenus : moins de 7 % de ces études ressortaient défendables (Pound et Nicol, 2018).
Est-ce « inutile » ou « nécessaire » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
A l’heure actuelle, on constate que la plupart des maladies a une incidence et une sévérité qui dépend du sexe de l’individu. Le gène responsable du développement masculin a été découvert il y a plus de 30 ans (gène Sry) mais on ne connait toujours pas à l’heure actuelle, les premières étapes du développement ovarien. Étant donné notre ignorance de ces mécanismes, les cliniciens ont des difficultés à aider les familles dans leur choix pour ou contre une gonadectomie de leur enfant atteint d’anomalies du développement sexuel. Les gonadectomies sont recommandées dans les cas où l’anomalie du développement sexuel s’accompagne d’un risque accru de développer des tumeurs gonadiques. Comprendre les mécanismes de différenciation sexuelle et les pathologies associées représentera une aide inestimable pour soutenir les familles dans leur décision.
Nuisances prévues, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Note de l'OXA. La formule « en règle générale » autorise une réponse générale, et c'est l'un des points sur lesquels les examens de qualité trouvent ces documents défaillants. Un examen publié en 2018 a établi que les résumés allemands et britanniques décrivaient mal ce qui est fait aux animaux et ce que ceux-ci pourraient éprouver (Taylor et al., 2018). L'adoption d'un modèle commun européen a nettement amélioré le premier point, à peine le second (Taylor et al., 2024).
Le droit d'accès aux documents · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Des femelles gestantes seront injectées une seule fois dans la cavité abdominale avec un produit qui permet de suivre la prolifération cellulaire puis mises à mort 4 heures après l’injection pour disséquer les embryons et analyser leurs gonades. Dans d’autres cas les femelles seront d’abord soumises à l’administration d’un produit par gavage oral (pour inactiver des gènes spécifiquement dans les gonades embryonnaires) à deux reprises à 24 heures d’intervalle puis à l’injection du produit qui permet de suivre la prolifération cellulaire avant d’être mises à mort 4 heures après l’injection pour disséquer les embryons et analyser leurs gonades. Aussi bien l’injection que le gavage oral sont réalisées en 20 à 30 secondes maximum.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Note de l'OXA. C'est l'endroit du document où les animaux devraient apparaître, et c'est celui qui résiste. Un nouvel examen, publié en 2024, a mesuré que cinq des six éléments attendus sur les dommages prévus progressaient depuis l'adoption d'un modèle commun européen. Les effets indésirables sont le sixième : 41 % des résumés allemands et 48 % des britanniques les décrivent complètement. Les auteurs relèvent aussi des effets présentés comme minimes sur des projets classés modérés ou sévères (Taylor et al., 2024). Ces mesures portent sur l'Allemagne et le Royaume-Uni. L'examen de 2018 classait la France parmi les pays les moins bons pour l'identification, l'accessibilité et la qualité de ses résumés, sans les noter rubrique par rubrique (Taylor et al., 2018). Les résumés français suivent aujourd'hui le modèle européen commun.
Les animaux souffrent-ils ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Les injections dans la cavité abdominale sont utilisées en routine au laboratoire. La nuisance possible est une douleur légère et brève au site d’injection. Le gavage oral est utilisé en routine au laboratoire et nous possédons l’expertise requise pour cette expérimentation. Les doses de solution de gavage ont été déterminées pour n’induire aucun effet indésirable lié directement à l’ingestion. L’administration de produits par gavage a une durée totale de 20 à 30 secondes maximum. Dans de rares cas liés au manque d’expertise de l’expérimentateur, le gavage oral peut résulter en un étouffement dans les minutes suivant l’administration (2 minutes). Après une observation attentive de l’animal immédiatement après le gavage, tout signe de suffocation entraînera la mise à mort immédiate de l’animal par dislocation cervicale. A ce jour, nous n’avons jamais rencontré ce problème.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Note de l'OXA. Le formulaire demande de justifier ce sort, non de le décrire. L'analyse dommage-avantage que la directive impose au comité d'éthique porte sur « la souffrance, la douleur et l'angoisse » infligées aux animaux (directive 2010/63/UE, art. 38). Quand ce sort est la mise à mort, celle-ci ne figure donc pas parmi les dommages que le comité met en balance avec les bénéfices annoncés. L'OXA écrit « mise à mort » plutôt que « sacrifice », qui emprunte au registre du don consenti, ou « euthanasie », qui désigne une mort décidée dans l'intérêt de celui qui meurt.
Peut-on parler d'éthique en expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Toutes les femelles gestantes traitées seront mises à mort afin de prélever les embryons aux stades embryonnaires précoces nécessaires aux analyses. Tous les embryons prélevés seront mis à mort afin de procéder à la dissection de leurs gonades pour analyse.
Application de la règle des "3R", selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
1. Remplacement
Note de l'OXA. La directive demande au résumé « une démonstration de la conformité » aux exigences de remplacement, de réduction et de raffinement (directive 2010/63/UE, art. 43). C'est donc le demandeur qui démontre sa propre conformité, dans le document même qui sollicite l'autorisation. Cette démonstration peut prendre la forme d'une affirmation qu'aucune méthode de substitution n'existe, que le document n'a pas à sourcer. Ces trois exigences sont par ailleurs subordonnées à l'objectif du projet : elles cherchent à remplacer les animaux dans un projet donné, elles n'interrogent pas ce projet.
Comment avancer vers la fin de l'expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
La gonade est formée d’une diversité de cellules qui ont toutes un rôle essentiel pour le déterminisme sexuel. De plus la différenciation des gonades est un processus très dynamique. A l’heure actuelle, nous ne sommes pas capables de reproduire in vitro les conditions nécessaires à la formation des organes reproducteurs. Par conséquent, l’emploi d’un modèle animal comme la souris récapitulant fidèlement toutes les étapes complexes de ce processus de développement chez le mammifère est donc essentiel. Cependant si de nouvelles conditions de culture satisfaisantes sont développéess, nous les utiliserons dans la perspective de remplacer les souris par ces nouvelles technologies.
2. Réduction
Note de l'OXA. La réduction dont il est question ici porte sur le nombre d'animaux par groupe expérimental, calculé pour que l'analyse statistique tienne. Le total annoncé dans la fiche est une estimation portant sur une autorisation de cinq ans au maximum (code rural, art. R214-123) : il ne dit pas combien d'animaux seront effectivement utilisés, et il ne se rapporte pas à une année.
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Afin d’obtenir des résultats statistiquement significatifs nous avons besoin de 20 embryons par expérience (histologie et analyses quantitatives) et par génotype. Toutefois pour réduire le nombre de souris utilisées, nous analyserons les gonades par lots de trois réplicats pour l’histologie et cinq réplicats pour les analyses quantitatives. Si nous obtenons des résultats statistiquement significatifs, nous ne ferons pas les réplicats supplémentaires.
3. Raffinement
Note de l'OXA. Le raffinement nomme une amélioration technique de la procédure, sans dire ce qu'elle change pour l'animal qui la subit. La réglementation impose d'atténuer la douleur, dans une limite qu'elle inscrit elle-même : « pour autant que cela soit compatible avec la finalité de la procédure expérimentale » (code rural, art. R214-109). Ce qui reste de souffrance après cette limite est autorisé. Le raffinement ne porte par ailleurs que sur la procédure : les souffrances de la captivité elle-même, confinement, bruit, lumière, manipulations d'entretien, ne relèvent d'aucun des trois R.
La réglementation est-elle « très stricte » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
La qualité de la contention, l’usage d’un matériel autoclavable permettent d’assurer un gavage et une injection intra-péritonéale efficaces et rapides, limitant le stress et la douleur imposés à l’animal par la procédure. Le personnel a été formé pour cela. Les solutions à administrer sont maintenues à la température corporelle de 37°C pour éviter tout inconfort de la femelle. Ces mesures sont accompagnées de la mise en place d’un protocole d’observation permettant de déceler précocement tout inconfort des animaux durant les expériences et de proceder à la mise à mort en cas de comportement anormal. Les souris sont hébergées dans des cages contenant 2 à 3 congénères au total dans lesquelles sont placés systématiquement différents types d’enrichissements permettant à l’animal de se faire un nid à l’abri de la lumière (igloo en papier mâché, carrés de ouate ou de tissu compressé), et de ronger (baguettes de papier mâché, morceau de bois, coton). Enfin, nous utilisons un sytéme raffiné qui permet la mutation du gène d’intérêt uniquement dans la gonade embryonnaire et uniquement après administration du produit par gavage oral.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Note de l'OXA. Le dossier d'autorisation demande de justifier l'origine des animaux, leur espèce, leur nombre estimé et leur stade de développement (arrêté du 1er février 2013, art. 5). La justification attendue est technique : elle porte sur l'adéquation de l'espèce à l'objectif poursuivi. Ce que l'appartenance à une espèce autorise à faire subir à un individu est une question morale, et le formulaire ne la pose pas. L'appartenance à une espèce, prise seule, ne fonde pourtant pas de différence de statut moral entre des individus également capables de souffrir.
Spécisme et expérimentation animale · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Nous avons choisi la souris (Mus musculus) comme le modèle de choix, en raison de similarités génétiques et physiologiques avec l’homme, ainsi que la facilité avec laquelle son génome peut être manipulé et analysé. Nous avons tous les outils à notre disposition et déjà au point pour pouvoir étudier la fonction des gènes d’intérêt dans les gonades de souris. Les femelles gestantes seront mises à mort à différents moments de la gestation couvrant tout le développement des gonades embryonnaires: jour 10.5 (début de la différenciation gonadique), jour 11.5 (détermination du sexe gonadique et début de la différenciation des lignages cellulaires en fonction du sexe), jour 12.5 (début de la formation du testicule et de la différenciation des cellules mâles productrices de testostérone), jour 13.5 (initiation de la division des ovocytes chez la femelle), jour 14.5 (différenciation gonadique établie), jour 17.5 (fin de la différenciation gonadique embryonnaire).