Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 21/09/2023
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-980535)
410 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures menées pour partie sous anesthésie sans réveil et pour partie à un niveau de souffrance modéré. Elles reçoivent des injections de toxine diphtérique provoquant une chute des plaquettes et des saignements, puis certaines subissent une incision du foie déclenchant une hémorragie massive sous anesthésie profonde, pour mesurer le pouvoir hémostatique de concentrés de plaquettes. Le porteur décrit un modèle de choc hémorragique destiné à évaluer différentes préparations de plaquettes transfusées. Il affirme que l’efficacité de ces concentrés ne peut être évaluée qu' »in vivo » et non uniquement in vitro.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
La survenue d’un choc hémorragique provoquée par la perte massive et brutale de sang est une urgence vitale qui doit être prise en charge dans les plus brefs délais. La transfusion sanguine reste encore à ce jour le traitement principal dans la prise en charge d’un patient en choc hémorragique lié à une chirurgie ou à un traumatisme. Les caractéristiques intrinsèques des concentrés plaquettaires, telles que leur durée de conservation ou leurs préparations, sont autant de facteurs qui inflencent le rendement et l’efficacité de la transfusion. Nous proposons d’étudier les capacités hémostatiques (c’est à dire leur capacité à arrêter une hémorragie), des concentrés plaquettaires dans un modèle de choc hémorragique. Différents types de concentrés plaquettaires seront administrés et leur pouvoir hémostatique seront évalués.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Ce projet permet de mesurer l’éfficacité des différentes préparations de concentrés de plaquettes sanguines dans la prévention du choc hémorragique mortel. A ce jour chez l’homme, le temps entre le don de plaquettes par un donneur et la transfusion à un malade est au maximum de 7 jours. De plus elles ne peuvent pas être conservées à 4°C ce qui limiterait la prolifération bactérienne mais sont conservées à température ambiante. Ce délai très court et les conditions restreintes de conservation impactent la mise en œuvre de la transfusion qui doit être réalisée des la survenue du choc.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Des animaux vigiles subiront des injections en i.p. quotidiennement pendant 4 jours (durée de l’injection inf à 1 minute) Aucun prélèvement ne sera fait sur animal vigile. Des prélèvements sanguins de faible quantité seront faits à la queue (durée du prélèvement inf à une minute), Certains animaux seront profondément anesthésiées avant un prélèvement sanguin qui est unique car terminal (durée du prélèvement inférieur à 3 minutes). Les animaux seront profondément anesthésiés et seront transfusés avant de subir une incision calibrée au niveau du foie entrainant un saignement massif (durée de l’intervention : 20 minutes)
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les injections répétées de toxine diphtérique entraînent une thrombopénie profonde qui peut être associée à des saignements.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les animaux sont tous mis à mort à la fin de chaque procédure : la procédure décrivant le prélèvement sanguin pour préparer les plaquettes à transfuser est une procédure sans réveil (car prélèvement sanguin unique et terminal), la procédure décrivant le modèle hémorragique est faite également sur souris anesthésiée profondément et mise à mort à la fin de la procédure car la souris a subi un choc hémorragique.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
L’hémorragie met en jeu le vaisseau, les conditions hémodynamiques de la circulation sanguine et le sang. Ces conditions multifactorielles nécessitent l’évaluation de l’éfficacité des concentrés plaquettaires in vivo et ne peuvent pas être évaluées uniquement in vitro même si certains tests sur les fonctions plaquettaires peuvent être évalués in vitro au préalble afin de minimiser le nombre d’animaux.
2. Réduction
Afin de réduire le nombre de souris nécessaires au développement du modèle de choc hémorragique les conditions de la lésion hépatique seront établies sur des souris décédées. Les plaquettes transfusées sont fluorescentes afin de mettre à profit ces expériences pour la déterminer des mécanismes cellulaires mis en jeux dans l’arrêt du saignement. Pour les procédures le nombre d’animaux nécessaires par condition est établi à 10. Enfin, les résultats seront analysés grâce à des tests statistiques adaptés permettant d’évaluer le pouvoir de coagulation de concentrés de plaquette sanguines sur un modèle de choc hémorragique chez le souris.
3. Raffinement
Toutes les procédures sont réalisées sous anesthésie profonde sans réveil. Un soin particulier sera apporté afin de diminuer la douleur et le stress de tous les animaux utilisés dans ce projet : – Hébergement dans des cages munies de particules de bois et enrichie avec 3 carrés de cellulose + 3 bâtons de coton + de la frisure afin de permettre aux animaux de réaliser un nid conformément à leurs besoins comportementaux – Pendant toutes les expérimentations, les animaux sont surveillés par du personnel entrainé. Les points limites ont été établis afin de pouvoir soustraire l’animal à toute souffrance.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Nous avons choisi la souris car nous avons une bonne connaissance de la biologie des plaquettes de cet animal. Sa petite taille permet la transfusion d’une quantité modérée de plaquettes. De plus la disponibilité de nombreux modèles génétiquement modifiés permettra d’étendre ce projet vers la compréhension des mécanismes hémostatiques de la transfusion plaquettaire. La quantité de plaquettes sanguine des souris augmentent avec l’âge. Les animaux seront utilisés à l’âge adulte entre 7 et 20 semaines, période où la numération plaquettaire est stable.