Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 30/05/2025
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-907596)
Suivre où se logent des agents de transfection synthétiques grâce à un ADN codant une protéine luminescente : 104 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue pour prélèvement de tissus, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. Le travail est présenté comme une étape vers le traitement de maladies génétiques comme la mucoviscidose, alors que la séquence injectée ne sert qu’à produire de la lumière. Chaque souris reçoit quatre injections, un prélèvement sanguin, trois pesées et quatre anesthésies, les seules atteintes décrites étant un stress de trente secondes et une douleur d’une quinzaine de secondes au point d’injection. Le porteur indique que le pouvoir transfectant de ces agents a déjà été vérifié sur plusieurs lignées cellulaires, et affirme que la biodistribution « nécessite le passage à un modèle souris ».
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Ce projet a pour but de développer et d’optimiser de nouveaux agents thérapeutiques pour des maladies génétiques comme la mucoviscidose. Ces agents non-viraux permettent le transport d’une séquence d’ADN de grande taille. Des tests in vitro d’efficacité et de toxicité de nos agents thérapeutiques ont été effectués sur des modèles cellulaires complexes et nous souhaitons maintenant tester leur efficacité et leur toxicité chez la souris. L’objectif de ce projet est de pouvoir évaluer la biodistribution de nos formulations pour en déterminer les organes cibles, pour ce faire, nous utiliserons une séquence d’ADN codant un gène permettant de générer de la lumière chez la souris.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Ce projet a pour but de déterminer la biodistribution et l’efficacité de transfection de nos nouveaux agents synthétiques grâce à l’introduction d’un gène de bioluminescence. Ce gène nous permet de suivre la diffusion de nos agents dans l’organisme de la souris et de valider le transfert de gènes. Les résultats obtenus nous permettront d’optimiser nos formulations actuelles afin d’obtenir les meilleurs résultats et d’en déterminer les organes cibles. De plus, ces tests nous permettrons de détecter d’éventuels effets toxiques jusqu’à 48h après injection par le dosage des enzymes du foie.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Chaque animal sera pesé 3 fois en vigile lors de la procédure (~30 secondes par pesée). Au total, chaque animal recevra : -1 injection sous anesthésie de nos agents de transfection (~30 secondes) -2 injections sous anesthésie de notre solution de marquage (~30 secondes) -1 injection de solution de réhydratation en vigile (~30 secondes) -1 prélèvement de sang en vigile (~1 minute) -1 injection d’anesthésie et d’antidouleur (~30 secondes).
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Un stress d’intensité légère peut être induit lors de la préhension des animaux pour la pesée par exemple (~30 secondes) et lors de l’induction de l’anesthésie (~1 minute). Les différentes injections peuvent engendrer aussi un stress ainsi qu’une légère douleur d’environ 15 secondes au niveau du site d’injection.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
A l’issue de la procédure, tous les animaux seront mis à mort afin de réaliser des prélèvements de tissus.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Des études préliminaires afin de déterminer le pouvoir transfectant de nos agents synthétiques ont préalablement été réalisées sur différentes lignées cellulaires. Cependant, la complexité du vivant et la biodistribution ne peuvent pas être obtenu in vitro et nécessitent le passage à un modèle souris.
2. Réduction
Le nombre d’animaux est réduit au maximum pour réaliser cette étude sans nuire aux objectifs initiaux et à l’obtention de tests statistiques robustes. Le nombre d’animaux par lot est un effectif nécessaire et suffisant, permettant d’utiliser des tests statistiques non paramétriques afin de pouvoir mettre en évidence, le cas échéant, des différences d’efficacité entre les agents de transfections utilisés.
3. Raffinement
Les animaux seront anesthésiés le temps de réaliser l’injection systémique ou d’acquérir l’image (soit environ 20 minutes) puis remis dans leur cage afin qu’ils puissent récupérer. Sur l’ensemble du projet, les animaux sont anesthésiés 4 fois. Les animaux seront surveillés tout le long de la procédure à l’aide d’une grille de soin adaptée. Durant la phase d’acclimatation, les souris seront habituées à la présence des manipulateurs pour diminuer les stress engendrés lors de la procédure. Des analgésies seront réalisés sur les animaux et ils seront suivis en appliquant des points limites strictes et spécifiques du projet.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Il s’agit d’une espèce de référence au sein du laboratoire pour ce type d’étude. Lors des études précédentes, ces dernières étaient agées de 7 semaines, afin de pouvoir comparer les études entre elles, nous préfeérons garder le même âge pour les animaux.