Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2022-04-06 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-052876)
1 092 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant des niveaux de souffrance légers à modérés. Un lupus leur est induit spontanément ou par injection de pristane, provoquant une maladie rénale chronique et des auto-anticorps pouvant conduire à la mort, avec des prélèvements sanguins réguliers, pour tester le rôle du gène TLR7 dans le biais féminin de la maladie. Le porteur indique surveiller la protéinurie et le poids afin de mettre à mort les souris avant qu’elles ne meurent de la glomérulopathie. Il affirme que le lupus ne peut être étudié in vitro et qu’un modèle intégré in vivo est le seul moyen d’établir le lien recherché.
Résumé produit par un modèle de langage à partir du seul texte du laboratoire, selon une méthode arrêtée par l’OXA. Publié sans relecture individuelle préalable, sous la responsabilité de l’association, et corrigé au fil des relectures.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
Décrire les objectifs du projet.
Note de l'OXA. Cette question est celle du formulaire européen de résumé non technique. Elle est posée au laboratoire qui demande l'autorisation, et sa réponse est écrite avant que la première procédure commence (arrêté du 1er février 2013, art. 5). Ces objectifs servent à justifier l'utilisation des animaux devant le comité d'éthique. Aucun document public ne dira ensuite s'ils ont été atteints : la directive permet aux États de faire mettre à jour le résumé avec les résultats de l'appréciation rétrospective (directive 2010/63/UE, art. 43), la base européenne prévoit de les recevoir, et aucune entrée française n'en porte (base ALURES).
Dans quel but fait-on ça ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Nous avons mis en évidence que le gène TLR7 échappe à l’inactivation du chromosome X dans les cellules immunitaires de femelles. Le dosage de ce gène joue un rôle majeur dans le déclenchement du lupus érythémateux systémique (LES) chez la souris. Cette maladie se caractérise par la production d’autoanticorps (anti-nucléaire, anti-ADN, anti-ARN, anti-Sm/RNP) et par des atteintes rénales dans les modèles les plus sévères (glomérulonéphrites avec protéinurie) qui peuvent conduire à la mort des animaux. Il existe un fort biais de sexe dans la susceptibilité au LES chez l’Homme et la souris, les femelles sont plus susceptibles. Etant donné que TLR7 est sur le chr X et qu’il échappe à l’inactivation de l’X, nous voulons tester le rôle de l’expression de TLR7 sur le chr X inactif dans la sévérité du LES chez les femelles dans un modèle de lupus spontanée chez les souris de fond génétique NZM Sle123 et dans un modèle de lupus induit par injection i.p. de pristane (2, 6, 10, and 14 tétraméthylpentadécane) chez les souris de fond génétique C57BL/6.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Note de l'OXA. Le formulaire européen demande les bénéfices « susceptibles de découler » du projet. Il appelle donc une projection, et il l'obtient : ce que le laboratoire écrit ici est ce qu'il espère, avant d'avoir commencé. Deux chercheuses ont repris six corpus d'études précliniques déjà menées et pesé les dommages réellement infligés aux animaux contre les bénéfices cliniques réellement obtenus : moins de 7 % de ces études ressortaient défendables (Pound et Nicol, 2018).
Est-ce « inutile » ou « nécessaire » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Les maladies autoimmunes comme le LES sont plus fréquentes chez les femmes comparées aux hommes (sex ratio 9 :1). L’hypothèse d’un rôle du dosage des gènes de l’X, en particulier TLR7, a été évoqué. Ce projet vise à démonter s’il existe un lien direct de causalité en échappement à l’inactivation de l’X du gène TLR7 et déclenchement du lupus in vivo chez la souris. Les bénéfices de ce projet sont considérables car il permettrait d’établir que la plus grande prédisposition des femmes aux LES serait d’origine génétique et serait lié à ce mécanisme. Cela pourrait conduire à de nouvelles stratégies thérapeutiques.
Nuisances prévues, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Note de l'OXA. La formule « en règle générale » autorise une réponse générale, et c'est l'un des points sur lesquels les examens de qualité trouvent ces documents défaillants. Un examen publié en 2018 a établi que les résumés allemands et britanniques décrivaient mal ce qui est fait aux animaux et ce que ceux-ci pourraient éprouver (Taylor et al., 2018). L'adoption d'un modèle commun européen a nettement amélioré le premier point, à peine le second (Taylor et al., 2024).
Le droit d'accès aux documents · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Des prélèvements sanguins sous-mandibulaire (200 µl, < 15% de la volémie) seront effectués tous les 2 mois pendant 3-7 mois de suivis. La durée de l'intervention est d'environ 1 minunte au maximum par souris. Les animaux recevront des injections IP (aiguille 27G) une seule fois en ce qui concerne les injections de pristane (0.5 ml), ou plusieurs fois (3 IP/semaine sur une semaine maximum par mois) en ce qui concerne la toxine DTX. Pour les injections IP, la durée d'intervention par souris est de 30 à 45 secondes environ.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Note de l'OXA. C'est l'endroit du document où les animaux devraient apparaître, et c'est celui qui résiste. Un nouvel examen, publié en 2024, a mesuré que cinq des six éléments attendus sur les dommages prévus progressaient depuis l'adoption d'un modèle commun européen. Les effets indésirables sont le sixième : 41 % des résumés allemands et 48 % des britanniques les décrivent complètement. Les auteurs relèvent aussi des effets présentés comme minimes sur des projets classés modérés ou sévères (Taylor et al., 2024). Ces mesures portent sur l'Allemagne et le Royaume-Uni. L'examen de 2018 classait la France parmi les pays les moins bons pour l'identification, l'accessibilité et la qualité de ses résumés, sans les noter rubrique par rubrique (Taylor et al., 2018). Les résumés français suivent aujourd'hui le modèle européen commun.
Les animaux souffrent-ils ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Dans le modèle de lupus spontané (NZM Sle123) les souris développent une maladie rénale chronique qui débutent à l’âge de 7 mois avec une protéinurie et conduit à une mortalité dès l’âge de 7-8 mois en fonction des animaleries. Des atteintes cutanées peuvent être également observées. Cette pathologie se caractérise par un dérèglement immunitaire, une signature IFN de type 1 et l’apparition d’autoanticorps anti-nucléaire, d’anti-dsDNA, anti-ssRNA et Sm/RNP, dès lâge de 3 mois. Les animaux seront principalement étudiés avant l’âge de 7 mois. Dans le modèle induit au pristane la maladie est moins sévère dans le fond C57BL/6 que nous allons utiliser. Il y a peu ou pas de mortalité et la production d’autoanticorps débute vers 5-6 mois et est associé à une glomérulopathie vers l’âge de 7 mois. Les animaux seront sacrifiés et analysés au plus tard vers 6-7 mois.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Note de l'OXA. Le formulaire demande de justifier ce sort, non de le décrire. L'analyse dommage-avantage que la directive impose au comité d'éthique porte sur « la souffrance, la douleur et l'angoisse » infligées aux animaux (directive 2010/63/UE, art. 38). Quand ce sort est la mise à mort, celle-ci ne figure donc pas parmi les dommages que le comité met en balance avec les bénéfices annoncés. L'OXA écrit « mise à mort » plutôt que « sacrifice », qui emprunte au registre du don consenti, ou « euthanasie », qui désigne une mort décidée dans l'intérêt de celui qui meurt.
Peut-on parler d'éthique en expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Les animaux seront euthanasiés à l’issue de l’expérimentation.
Application de la règle des "3R", selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
1. Remplacement
Note de l'OXA. La directive demande au résumé « une démonstration de la conformité » aux exigences de remplacement, de réduction et de raffinement (directive 2010/63/UE, art. 43). C'est donc le demandeur qui démontre sa propre conformité, dans le document même qui sollicite l'autorisation. Cette démonstration peut prendre la forme d'une affirmation qu'aucune méthode de substitution n'existe, que le document n'a pas à sourcer. Ces trois exigences sont par ailleurs subordonnées à l'objectif du projet : elles cherchent à remplacer les animaux dans un projet donné, elles n'interrogent pas ce projet.
Comment avancer vers la fin de l'expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Le lupus érythémateux systémique est une maladie auto-immune complexe qui ne peut pas être étudiée dans des modèles in vitro et nécessite des modèles intégrés in vivo. Les modèles de lupus que nous utiliserons dans ce projet sont considérés comme des modèles mimant tout ou partie de la pathologie humaine. Seule l’expérimentation animale permettra donc de répondre à la question scientifique posée et d’établir un lien de causalité entre l’échappement à l’ICX du gène TLR7 et le développement des paramètres cliniques et immunopathologiques de cette maladie.
2. Réduction
Note de l'OXA. La réduction dont il est question ici porte sur le nombre d'animaux par groupe expérimental, calculé pour que l'analyse statistique tienne. Le total annoncé dans la fiche est une estimation portant sur une autorisation de cinq ans au maximum (code rural, art. R214-123) : il ne dit pas combien d'animaux seront effectivement utilisés, et il ne se rapporte pas à une année.
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Afin de réduire le nombre d’expériences effectuées : 1. Nous utilisons un nombre d’animaux suffisant par expérience (n=8) afin d’obtenir des résultats statistiquement interprétables. Les expériences seront reproduites 3 fois. 2) Nous essayons d’effectuer le maximum d’analyse sur les mêmes animaux (analyse mutiparamètrique des cellules infiltrant plusieurs organes d’une même souris, analyse de la réponse immunitaire, des autoanticorps circulants, de la protéinurie, histologie du rein). Dans chaque procédure décrite ci-après, nous avons explicité les moyens mis en oeuvre pour évaluer la souffrance des animaux et le cas échéant la diminuer.
3. Raffinement
Note de l'OXA. Le raffinement nomme une amélioration technique de la procédure, sans dire ce qu'elle change pour l'animal qui la subit. La réglementation impose d'atténuer la douleur, dans une limite qu'elle inscrit elle-même : « pour autant que cela soit compatible avec la finalité de la procédure expérimentale » (code rural, art. R214-109). Ce qui reste de souffrance après cette limite est autorisé. Le raffinement ne porte par ailleurs que sur la procédure : les souffrances de la captivité elle-même, confinement, bruit, lumière, manipulations d'entretien, ne relèvent d'aucun des trois R.
La réglementation est-elle « très stricte » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Les souris sont hébergées (5 animaux par cage maximum) dans des cages à 20-24°C et 30-50% d’hygrométrie, en portoirs ventilés (dans des cages d’une superficie de 500cm2), avec une alternance jour/nuit de 12h/12h. La nourriture et l’eau de boisson sont fournies ad libitum. Le change de la litière est réalisé 1 fois par semaine. Les cages seront systématiquement enrichies (coton, igloo, tunnel) pour leur permettre de faire un nid. L’angoisse des animaux sera réduite par une période d’acclimatation à l’hébergement (1semaine) mais également par une habituation à la manipulation. Un protocole est mis en place avec la structure du bien-être animal (SBEA) pour prévenir toute douleur, souffrance ou angoisse de l’animal. De plus, les procédures et le suivi de l’animal seront effectués par des personnes compétentes et formées à l’expérimentation animale. Les animaux sont surveillés tous les jours par les zootechniciens du service, en accord avec la réglementation. Définition des points limites spécifiques aux modèles: les animaux seront euthanasiés quand ils présenteront des signes cliniques de glomérulopathie lupique (protéinurie, taux sériques d’autoanticorps élevés, perte de poids, animal prostré et poils hérissés). Les animaux seront suivis longitudinalement avec mesure de la protéinurie (test bandelette/ tous les 15 jours), et mesure des autoanticorps circulants (Anti-ADN, anti-ARN, anti-Sm/RNP) dans le sérum tous les mois. Ces mesures nous permettront d’identifier l’évolution de la sévérité de la maladie de manière à les euthanasier avant qu’ils ne décèdent.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Note de l'OXA. Le dossier d'autorisation demande de justifier l'origine des animaux, leur espèce, leur nombre estimé et leur stade de développement (arrêté du 1er février 2013, art. 5). La justification attendue est technique : elle porte sur l'adéquation de l'espèce à l'objectif poursuivi. Ce que l'appartenance à une espèce autorise à faire subir à un individu est une question morale, et le formulaire ne la pose pas. L'appartenance à une espèce, prise seule, ne fonde pourtant pas de différence de statut moral entre des individus également capables de souffrir.
Spécisme et expérimentation animale · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Les modèles expérimentaux de lupus systémique chez la souris sont bien documentés et validés. Nous utiliserons ici des souris de fond génétique C57BL/6 qui développent un syndrome lupique après injection ip de pristane ; et des souris NZM Sel1/2/3 (B6;NZM-Sle1NZM2410/Aeg Sle2NZM2410/Aeg Sle3NZM2410/Aeg/LmoJ) Jackson #7228 qui développent un lupus spontanné comme indiqué précédemment. Il n’existe pas d’autre moyen de mimer cette pathologie complexe. Dans chaque procédure nous avons expliqué les différents groupes d’animaux dont nous aurons besoin pour répondre aux questions scientifiques posées par le projet.