Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 19/06/2024
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-817084)
Une souris qui perd 15 % de son poids, titube ou cesse de se toiletter deux jours d’affilée est retirée de l’étude et tuée par dislocation cervicale. 144 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. Chacune subit une chirurgie du crâne de quatre-vingt-dix minutes pour l’injection de vecteurs viraux dans deux populations de neurones, puis vit seule en cage pendant dix semaines et demie, avec six injections dans l’abdomen et deux semaines de mesure continue de sa prise alimentaire et de sa course. Le porteur compense cet isolement par sept carrés de cellulose et un morceau de bois, et renvoie les retombées à la compréhension de l’obésité et de l’anorexie chez l’être humain.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
L’objectif de ce projet est de comprendre comment les réseaux neuronaux participent à la balance énergétique et la motivation pour l’exercice. Pour cela, des souris transgéniques permettant de manipuler de façon concomitantes les deux sous-populations neuronales principales impliquées dans la motivation recevront des injections de vecteurs viraux permettant de manipuler spécifiquement l’activité de ces deux populations. Différents tests comportementaux permettront d’étudier la prise alimentaire exacte, la dépense énergétique et la motivation pour courir de chaque souris afin de mieux disséquer les mécanismes biologiques impliqués dans cette balance énergétique.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Cette étude permettra d’identifier les mécanismes sous-jacents aux régulation métaboliques et de l’activité physique, dimensions altérées en particulier dans les troubles du comportement alimentaire tels que l’obésité ou l’anorexie.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
– Procédure chirurgicale (environ 90 minutes x 1 fois/ animal) – Isolement (environ 10.5 semaines) – Injections intrapéritonéales (1 injection/ jour x 6 fois, environ 3 secondes par injection)-Tests comportementaux: étude de la prise alimentaire et de l’activité locomotrice (2 semaines au total, 24h/24) et étude de la motivation pour l’activité physique (2 semaines au total, 1h/jour)
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les différents tests utilisés dans ce projet nécessitent de pouvoir étudier la prise alimentaire individuelle des souris. Celles-ci seront donc hébergées de manière individuelle dès l’âge de 8 semaines et ce jusqu’à la fin des procédures. Cette absence d’interaction sociale peut être une source de stress pour les animaux. La chirurgie stéréotaxique pour l’injection bilatérale de virus peut entrainer des risques de douleurs post opératoires ou d’infections. Ces douleurs devraient s’estomper dans les jours suivant la chirurgie grâce au traitement analgésique mis en place. Enfin, les injections intrapéritonéales durant la période dans les cages métaboliques ou durant les tests de ratio progressifs peuvent également entrainer une douleur. Afin de diminuer la gêne engendrée par ces injections, le côté de l’animal qui sera injecté sera interverti chaque jour. Les traitements médicamenteux, les injections intrapéritonéales, et produits utilisés (et les doses) sont bien contrôlés en laboratoire et tolérés par les animaux.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Tous les animaux seront mis à mort pour procéder à des analyses histologiques.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Ce projet ne peut être réalisé sans l’utilisation de modèles animaux puisqu’il s’intéresse à des dimensions comportementales, non modélisables sur des modèles in vitro ou in silico. De plus l’utilisation d’invertébrés, serait incompatible avec l’étude de la motivation pour une récompense telle que l’activité physique.
2. Réduction
Tous les efforts seront faits pour réduire le nombre d’animaux utilisés. Le nombre d’animaux à inclure sera de 12/groupe. Ce n d’animaux/groupe a été fixé (i) en utilisant des calculs de puissance nous permettant d’obtenir une différence significative pour les différentes variables d’intérêt qui seront évaluées dans l’étude et de rejeter une hypothèse nulle, et (ii) en se référant à des publications du domaine (iii) en prenant en compte la variabilité que nous retrouvons habituellement dans le comportement d’intérêt. Nous utiliserons 2 cohortes d’animaux (n=12/groupe/cohorte) afin de valider la reproductibilité des résultats et en prenant en compte que certains animaux pourraient ne pas apprendre la tache comportementale opérante (pourcentage de succès de 50-60%). Nous avons regroupé dans la mesure du possible différents tests comportementaux sur les mêmes lots de souris, et avons conçus nos expériences de manière à obtenir un maximum d’informations à partir des mêmes animaux.
3. Raffinement
Comme prévue par la Directive 2010/63/CE, un enrichissement du milieu (7 carrés de cellulose) ainsi qu’un morceau de bois à ronger seront utilisés pour réduire les stress des animaux lié à l’isolement que ce soit dans les cages métaboliques ou dans les cages d’hébergement des souris. Les souris seront manipulées grâce à un tunnel en carton (présent dans leur cage d’hébergement) afin de les déplacer dans les cages métabolique ou dans les chambres opérantes. En ce qui concerne la période pré et post-opératoire, les animaux recevront un traitement analgésique et suite à la chirurgie stéréotaxique, chaque animal est suivi quotidiennement (poids, prise alimentaire, aspect général) et une étiquette est accrochée au dos de sa carte de cage individuelle pour le personnel animalier, avec l’ensemble des informations concernant son suivi post-opératoire sur une semaine (médication, poids corporel, aspect général). La récupération des animaux est normalement totale après 1 semaine. Pour le point limite, nous le définissons par un état anormal constaté sur deux jours consécutifs (perte de poids de 15%/jour, ataxie, hypolocomotion, pelage non soigné). Si ce point est atteint, nous préviendrons immédiatement la vétérinaire de l’établissement afin d’envisager la mise en place de soins personnalisés compatibles avec le maintien de l’animal dans l’étude (comme la poursuite du traitement analgésique). En cas d’échec ou si un point limite terminal est atteint, l’animal sera retiré de l’étude et mis à mort par dislocation cervicale afin de lui éviter toute souffrance que nous ne pourrions soulager.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Ce projet nécessite l’utilisation de modèles transgéniques disponibles uniquement dans des modèles souris et permet la reproductibilité et la comparaison avec les résultats obtenus dans le laboratoire auparavant et avec la communauté scientifique plus large. Des modèles animaux moins évolués (par exemple: ver C. elegans ou poisson zèbre) ne peuvent convenir pour l’étude d’une récompense naturelle comme l’activité physique. Les animaux seront utilisés à l’âge adulte (à partir de 8 semaines) qui se justifie par l’immaturité du système nerveux au cours de l’adolescence.