Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 29/03/2023
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-864213)
78 960 lapins vont être utilisés, tous tués à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. Chaque animal reçoit deux injections d’une suspension de cellules pour l’immuniser, puis subit deux ponctions d’environ soixante millilitres de sang à l’artère de l’oreille à deux jours d’intervalle, avant une ponction cardiaque terminale qui le tue. Ce prélèvement en série produit un médicament anti-rejet de greffe commercialisé, que le porteur présente comme un « life saving drug ». Il affirme qu’aucune méthode ne permet de produire ce sérum in vitro et que le lapin est la seule espèce autorisée.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Le projet est la production d’un médicament à usage humain, la THYMOGLOBULINE, visant à lutter contre le risque de rejet de greffe et à améliorer la prise en charge des affections sanguines.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
La production d’un médicament humain, commercialisé dans plus de 80 pays à travers le monde et considéré comme un « life saving drug », c’est-à-dire un médicament vital pour de nombreux patients. Ce médicament est en effet un immunosuppresseur sélectif utilisé pour lutter contre les rejets de greffe chez l’Homme en période pré et post-opératoire, ainsi que pour traiter l’aplasie médullaire.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
La procédure se résume à une phase d’immunisation comprenant deux injections et une phase de prélèvement comprenant trois opérations. Les immunisations et les prélèvements à l’oreille sont réalisés sur animal vigile, seul le dernier prélèvement est effectué sous anesthésie générale. L’immunisation à J0 consiste en l’injection par voie sous-cutanée de suspension cellulaire avec du sérum physiologique utilisé comme adjuvant. Elle se fait au niveau de 4 points d’injection : 2 lombaires et 2 scapulaires (0,5 mL à chaque point d’injection). L’immunisation à J14 consiste en l’injection par voie intraveineuse au niveau de la veine marginale de l’oreille de 3 mL de suspension cellulaire avec du sérum physiologique utilisé comme adjuvant. Le premier prélèvement sanguin est réalisé 20 jours±1 après la première immunisation, et consiste en la ponction de 60mL de sang environ au niveau de l’artère médiane de l’oreille du lapin. Le second prélèvement, identique au premier, se fait deux jours plus tard sur l’autre oreille du lapin, soit à J22±1. Le dernier prélèvement est réalisé 2 à 4 jours après le second prélèvement à l’oreille (à J25±1). Il est réalisé en intracardiaque et prend fin à la mort de l’animal.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Le protocole comprend différentes étapes pouvant impacter les animaux inclus dans le projet ; tout d’abord une phase d’immunisation : injection d’une suspension de cellules thymocytaires par voie sous-cutanée puis intraveineuse sur animal vigile puis une phase de prélèvements : deux prélèvements successifs à l’artère médiane de l’oreille sur animal vigile et un prélèvement terminal en intracardiaque sous anesthésie générale.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les animaux élevés dans la procédure n°2 sont destinés à être inclus dans le protocole expérimental de la procédure n°1, et un petit nombre de lapins servira au renouvellement du cheptel de reproducteurs. Les animaux intégrés à la procédure n°1 sont mis à mort à la fin du protocole lors du prélèvement de sang terminal en intracardiaque sous anesthésie générale.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
A l’heure actuelle des connaissances scientifiques, il n’existe pas de modèle alternatif au lapin pour la production d’anticorps polyclonaux tels qu’inclus dans la composition du médicament final THYMOGLOBULINE. La diversité et la quantité d’anticorps produits par l’animal permettent une compatibilité sans équivalent avec un nombre très élevé de patients receveurs de greffes dans les différents pays du monde.
2. Réduction
La procédure expérimentale appliquée a été définie afin d’obtenir la plus grande quantité possible de sérum par animal utilisé (sérum contenant la concentration requise en anticorps polyclonaux). De plus, un travail de sélection génétique mené sur les animaux reproducteurs de l’élevage a permis d’optimiser la quantité totale de sérum prélevée sur chaque lapin en prélèvement intracardiaque, et d’améliorer la concentration en immunoglobulines du sérum produit. Il est donc possible de fabriquer une plus grande quantité de médicament avec un nombre équivalent d’animaux utilisés. Enfin, les lapins mâles et femelles sont utilisés dans le cadre du protocole, ce qui permet d’inclure dans la procédure tous les lapins élevés au sein de l’établissement.
3. Raffinement
Les lapins sont hébergés dans des cages conformes aux exigences de la règlementation et de respect du Bien-Etre Animal, ils disposent d’un enrichissement adapté (diffusion de radio, mise à disposition de bûchettes de bois à ronger). Le suivi quotidien des animaux est assuré par des personnes expérimentées et formées régulièrement. Une prise en compte et une évaluation de la souffrance animale en référence à une grille établie est réalisée chaque jour. La grille permet également de fixer les points limites et de cesser immédiatement l’expérimentation sur tout lapin présentant des signes de souffrance dépassée. Une prise en charge spécifique de la douleur par l’application d’un protocole d’anesthésie générale validé est appliquée lors du dernier prélèvement de sang. Enfin, l’utilisation de colle chirurgicale en remplacement de pansement papier lors de chaque injection intraveineuse ou prélèvement de sang assure un meilleur confort à l’animal.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
A l’heure actuelle des connaissances scientifiques, il n’existe aucune méthode alternative permettant de produire la THYMOGLOBULINE in vitro. De plus, le médicament est sous autorisation de mise sur le marché avec utilisation exclusive du lapin, espèce qui fait référence dans la production d’anticorps polyclonaux pour l’usage pharmaceutique. Les lapins ne sont inclus dans la procédure d’expérimentation animale qu’à partir de l’âge de 14 semaines et pour un poids minimum de 2,8Kg. C’est en effet à partir de cet âge que leur système immunitaire est capable de produire les anticorps nécessaires à la fabrication de la THYMOGLOBULINE, en quantité et concentration suffisantes. Les animaux sont également aptes à supporter les différentes phases de la procédure (prélèvements répétés notamment).