Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 06/04/2023
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-978073)
195 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. Elles reçoivent des injections quotidiennes d’un candidat médicament, puis sont soumises à des tests de mémoire dont un test d’évitement passif où un stimulus aversif est appliqué à leurs pattes, avant leur mise à mort pour analyser leur cerveau, afin de préciser l’action d’une molécule contre la maladie d’Alzheimer développée par une société. Le porteur situe les retombées avant un éventuel développement clinique. Il affirme que le modèle murin reste « indispensable » pour ces réponses comportementales.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Trouver un traitement contre la maladie d’Alzheimer est aujourd’hui une priorité, notamment parce que les médicaments disponibles s’avèrent d’effet limité et présentent de nombreux effets secondaires invalidants. Suite à au faible niveau de service rendu au patient, les 4 médicaments commercialisés dans la maladie d’Alzheimer ont fait l’objet d’un déremboursement par la sécurité sociale en France. Une société Montpelliéraine développe donc une nouvelle molécule, qui s’avère, dans les modèles animaux précliniques de la maladie, très efficace, plus anti-inflammatoire, sans effet secondaire sur la mémoire et de plus longue durée d’action que les médicaments actuels. Pour préciser la nature de son activité pharmacologique, deux expériences de comportement sont aujourd’hui nécessaires : l’une pour analyser ses effets directs sur la mémorisation, l’autre pour confirmer son action pharmacologique particulière sur un système neuronal particulier.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Le projet a pour but de préciser les effets pharmacologiques in vivo d’un candidat médicament et apporter des informations importantes avant le développement clinique de cette molécule de nouvelle génération potentiellement efficace pour modifier de façon durable le décours de la maladie, car neuroprotectrice.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Les animaux recevront une injection intrapéritonéale (moins d’une minute) des molécules à tester pendant 6 jours lors de l’expérience 1 et pendant de 1 à 12 jours pendant l’expérience 2. Suite au traitement les capacités de mémorisation des animaux seront testées, avec des tests comportementaux qui dure 15 secondes pour le test d’évitement et pour la préférence de place, deux fois 30 minutes pour le conditionnement et 10 minutes pour l’analyse.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les animaux utilisés dans ces deux expériences subiront deux types de stress modéré : une ou deux injections intrapéritonéales quotidiennes. Pour l’expérience 1 reposant sur un test d’évitement passif permettant d’évaluer la mémoire à long terme, un stimulus aversif sera administré au niveau des pattes de la souris. Les animaux ont la possibilité de remonter sur la plate-forme pour échapper au stimulus. . Pour l’expérience 2, les animaux sont placés dans une boite à 2 compartiments pendant une session de 30 minutes par jour durant la phase de conditionnement.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les animaux seront euthanasiés à la fin de la procédure et les cerveaux prélevés pour des analyses biochimiques ultérieures.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
La molécule est ici testée sur des réponses comportementales spécifiques (phases de mémorisation, dépendance d’état chimique pour le test de préférence de place) au moyen de tests standardisés et très prédictifs. Par exemple, l’ensemble des phases de la mémorisation (acquisition, consolidation, rappel, extinction, reactivation) sera examiné en une seule procédure comportementale au moyen du test d’évitement passif. Les gammes de doses testées seront réduites à 3-4 doses autour des effets anti-amnésiants déjà déterminés dans les études précédentes. L’utilisation du modèle murin reste par ailleurs indispensable car il permet de préciser des réponses comportementales très proches de celles observées chez l’homme.
2. Réduction
Les molécules sont administrées dans une gamme de doses réduite (généralement 0.3 – 1 – 3 mg/Kg en fonction des résultats antérieurs). Les animaux sont testés sur des tests comportementaux adaptés au paramètre à mesurer (mémoire à long terme non-spatiale pour l’évitement passif et dépendance d’état chimique pour le conditionnement préférentiel de place). Les analyses statistiques sont optimisées aux données générées de façon à limiter le nombre d’animaux par groupe (15 souris/groupe). Ce nombre de 15 souris par groupe a été déterminé de façon empirique mais a été depuis confirmé en analysant nos données antérieures à l’aide de logiciel statistiques.
3. Raffinement
Les animaux seront reçu une semaine avant le début de l’expérimentation et gardés en groupe de 8-10 individus par grande cage. Nous procéderons à l’enrichissement du milieu avec un accès à des maisons en cartons et des carrés de coton afin de créer un environnement sécurisant permettant la création d’un nid. L’état des animaux sera suivi régulièrement avec une surveillance journalière en suivant la courbe de poids des animaux. Après les tests comportementaux les animaux sont directement remis dans la cage d’origine à l’écart du test de comportement afin de retrouver leur environnement sécurisant. Les traitements pharmacologiques envisagés ont déjà été utilisés et ne sont pas à l’origine de douleur visible ou de détresse. Un examen quotidien sera fait et un formulaire de suivi du bien-être sera complété. Les animaux seront aussi manipulés tous les jours afin de créer une habituation diminuant ainsi le stress quotidien que peut représenter la présence de l’expérimentateur.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Le modèle souris est adapté aux protocoles comportementaux et utilisé dans les expériences antéreiures. Les doses et mode d’administration sont donc connus. Les animaux seront utilisés à l’âge adulte soit à partir de 6 semaines. C’est à cet âge que les effets de la molécules ont été caractérisé dans les phase antérieures du projet.