Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 06/06/2025
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-884474)
6 354 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger à modéré. Les unes reçoivent une perfusion de fixateur dans le cœur sous anesthésie, les autres subissent une heure de chirurgie cérébrale pour l’implantation d’un détecteur d’activité neuronale, une ponction cardiaque ou des privations de boisson. L’objet du travail est le rôle d’une protéine des astrocytes dans la libération de l’ocytocine et de la vasopressine. Le porteur écrit que les tests comportementaux n’induisent pas de nuisance tout en comptant parmi eux la privation d’eau, et justifie l’effectif de 6 354 animaux par sa seule expérience du domaine.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Les interactions entre neurones et astrocytes sont essentielles aux activités cérébrales, en particulier dans les régions telles que l’hypothalamus, fortement liées au flux sanguin et régulant des fonctions physiologiques vitales. Les astrocytes contactent à la fois les vaisseaux et les neurones, pour détecter et intégrer les changements sanguins et des activités neuronales. En réponse, les astrocytes modulent les neurones adjacents. Cependant, les bases moléculaires qui sous-tendent cette régulation restent obscures. Une protéine fortement exprimée dans les astrocytes est peu explorée et nous émettons l’hypothèse que cette protéine participe à la régulation qui contrôlent l’activité des neurones secrétant l’ocytocine et la vasopressine. Ces dernières sont notamment essentielles à la régulation de fonctions vitales telles que le contrôle de la balance hydrique et la lactation. Nous proposons donc d’étudier si les mécanismes moléculaires qui participent au contrôle ces fonctions. Dans ce projet, nous analyserons les conséquences de la délétion de cette protéine sur : (1) La morphologie des astrocytes, l’activité des astrocytes et l’impact sur l’activité des neurones à ocytocine et à vasopressine. (2) La sécrétion d’ocytocine et de vasopressine au niveau de l’hypothalamus. (3) Le comportement maternel et le contrôle de la balance hydrominérale.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Le projet permettra de comprendre par quels mécanismes l’ocytocine et la vasopressine sont libérées par l’hypothalamus et l’hypophyse. Comprendre comment ces hormones sont sécrétées permettra de développer de de nouvelles approches pour stimuler la sécrétion endogène de ces hormones dont nous savons qu’elles sont altérées dans certaines pathologies neurodévelopementales.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Une perfusion intracardiaque sous anesthésie sera réalisée sur les animaux pour un prélèvement du cerveau afin de réaliser une étude d’immunomarquage sur le cerveau ainsi fixé. La durée de cette procédure est de 30 minutes. Des souris seront sujettes à une intervention chirurgicale sous anesthésie pour analyser les variations cérébrales d’ocytocine et de vasopressine. La durée de cette procédure est d’une heure. Des souris seront également sujettes à une intervention chirurgicale d’une durée d’une heure visant à l’implantation d’un détecteur d’activité neuronale. Finalement, des animaux subiront une ponction cardiaque sous anesthésie afin de pouvoir mesurer l’ocytocine et la vasopressine plasmatique. Certain animaux subiront des tests comportementaux de modulation de la prise de boisson par courte privation et des tests d’évaluation du comportement maternel.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
La contention ainsi que l’injection d’analgésique et d’anesthésique peuvent engendrer un stress chez l’animal. Certains animaux seront soumis à une chirurgie sous-anesthésie avec réveil qui peut engendrer une douleur post-opératoire modérée de quelques heures. Les animaux impliqués dans les tests d’évaluations comportementales (prise de boisson, comportement maternel) sont dans des situations soit non anxiogènes ou très peu, n’impliquant pas de stress ou inconfort majeur, cependant, les animaux seront surveillés quotidiennement. Les animaux subiront des test comportementaux qui n’induisent pas de nuisance pour l’animal. La perfusion et la ponction cardiaque sont effectués sous anesthésie profonde et terminale de l’animal, sans réveil.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
A l’issue de chaque procédure les animaux sont mis à mort pour l’analyses de paramètres physiologiques ex vivo.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Le but du projet est de comprendre le rôle d’une protéine exprimée dans les astrocytes. Cette protéine interviendrait dans les interactions entre les neurones et les astrocytes pour la régulation de la sécrétion de l’ocytocine et de la vasopressine qui regissent de nombreuses fonctions physiologiques et comportementales. Dans ce contexte il est necessaire d’utiliser des animaux et un tissu nerveux intact afin de comprendre les mécanismes qui régulent les fonctions physiologiques et comportementales liés à ces neuropeptides hypothalamiques. Effectuer cette étude sur un système in vitro aboutirait à une étude de processus non-physiologiques et ne serait donc pas pertinent
2. Réduction
Pour réduire autant que possible le nombre d’animaux nécessaires, nous utilisons le nombre de souris total strictement nécessaire pour chacune des stratégies. Ceci correspond à notre expérience dans le domaine pour assurer la validité statistique des résultats.
3. Raffinement
Pour toute chirurgie, les animaux recevront les doses nécessaires d’anesthésiques, analgésiques et antalgiques en pré- et postopératoire. Les jours suivant l’opération chirurgicale, les animaux seront surveillés et pesés tous les jours par l’expérimentateur et/ou les animaliers (avec une fiche post-opératoire pour chaque animal), et recevront si besoin un analgésique par voie orale ou en injection sous-cutanée. Une grille de score pour évaluer le bien être des souris sera utilisée. Pendant la période de repos, aucune manipulation expérimentale n’est entreprise.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
La souris est un petit mammifère dont le système nerveux central présente de nombreuses analogies avec les mammifères supérieur (dont l’humain). La grande maitrise des méthodes d’élevages, des conditions de bien-être animal et la haute standadisation des lignées en fait un organisme de choix pour une étude physiologique des interactions neurogliales. De plus, la modification génétique indispensable à la réalisation de ce projet est seulement disponible chez la souris (délétion des protéines lysosomales). Les souris seront utilisées à l’âge adulte à partir de 2 mois. A ce stade les animaux ont un cerveau qui a fini son développement et les animaux présentent un comportement d’adulte. D’autre part utiliser des souris à partir de cet âge de 2 mois, permet également de pouvoir comparer nos résultats avec la tranche d’âge pour laquelle la plupart des expériences précédentes ont été conduites.