Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 21/08/2025
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-651526)
Saignés à blanc sous anesthésie puis tués, 900 souris et 81 rats fournissent du sang et du plasma exempts de molécule active, destinés à calibrer des méthodes de dosage. 100 souris et 9 rats, placés jusqu’à 24 heures en cage individuelle pour un recueil d’urine et de fèces, sont gardés vivants et réutilisés, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger. Le porteur écrit qu’il est « indispensable » de disposer de cette matrice témoin et qu’aucune méthode alternative ne permet de la produire. Il précise qu’aucune approche statistique n’a été faite pour réduire le nombre d’animaux, le seul levier étant d’abaisser le seuil de quantification de la méthode analytique.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
L’objectif de ce projet est de fournir la matrice témoin (par exemple du sang, du serum, du plasma, urine , fécès) en utilisant les animaux contrôles et/ou les animaux de remplacement afin de permettre le dosage des échantillons. Si ces animaux ne sont pas suffisants pour recueillir les quantités nécessaires, exceptionnellement des animaux pourront être commandés dans ce but et devra être préalablement validé par la SBEA. Il est indispensable d’avoir à disposition de la matrice témoin, exempte de molécule active, pour pouvoir valider la méthode de dosage et valider les dosages.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Les matrices témoins permettent de réaliser une gamme ou des contrôles qualités pour quantifier la molécule dans le même type d’échantillon pour éviter un « effet matrice » (réponse de la molécule différente selon l’échantillon). Ainsi la moléculde d’intérêt se comporte de la même manière dans les échantillons qui servent à quantifier que dans ceux qui doivent être dosés. Cela valide le rendement d’extraction de la molécule d’intérêt et permet d’assurer l’exactitude de la méthode. Pour ce projet, il est envisagé d’utiliser environ 90 rats, 1000 souris sur 5 ans soit 18 rats et 200 souris par an. Cela représente environ 6 études rats et 20 études souris par an. C’est le nombre d’animaux minimal pour pourvoir fournir les quantités des différentes matrices témoins nécessaires.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Pour un prélèvement de sang: Les animaux seront soumis à une anesthésie générale (anesthésie gazeuse) et un prélèvement terminal sera réalisé. Les animaux seront euthanasiés à la suite du prélèvement. La durée du prélèvement sera de l’ordre de la minute. Ce prélèvement sanguin servira à fournir de la matrice témoin en plasma ou en sang. Pour générer de la matrice témoin de féces ou d’urine, la collection d’échantillons se fera de manière individuelle dans des hébergements dédiés, sans manipulation. Les échantillons d’urine et de fecès seront collectés sans aucune manipulation des animaux, en individuel dans une cage prévue pour une durée maximale de 24h.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Pour réaliser le prélèvement de sang terminal, le placement de l’animal dans la boite d’anesthésie peut engendrer du stress. Pour effectuer des recueils d’urine ou de fècès de façon individuelle, l’animal sera placé dans une cage de recueil prévu à cet effet. Il aura un contact visuel et olfactif avec ses congénères et la durée maximale inférieure à 24h. Cela peut également engendrer un stress pour l’animal.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les animaux ayant eu un prelèvement sanguin terminal seront tous mis à mort. Le prélèvement terminal correspond à un prélèvement sanguin trop important correspondant la l’exsanguination de l’animal. La survie des animaux et leur réutilisation n’est pas possible. Le prélèvement sanguin terminal sera réalisé selon les bonnes pratiques vétérinaires et la réglementation en vigueur. Les animaux ayant eu seulement un recueil d’urine et de fèces pourront être gardés en vie et être réutilisés dans un autre projet ou pour générer de la matrice témoin sang, plasma, serum.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Aucune méthode alternative ne permettant actuellement de générer de la matrice témoin, il est indispensable de recourir à l’animal. En effet la non utilisation de matrice témoin entraine un biais dans la méthode. Si l’échantillon qui permet la quantification est différent de celui à quantifier, la méthode n’est pas exacte.
2. Réduction
Pour ce projet, il est envisagé d’utiliser environ 90 rats et 1000 souris sur 5 ans soit 18 rats et 200 souris par an. C’est le nombre d’animaux minimal pour générer de la matrice témoin sur une durée de 5 ans. Aucune approche statistique n’a été faite pour réduire le nombre d’animaux dans ce projet. La seule méthode pour réduire ce nombre est de diminuer le seuil de quantification de la méthode analytique ce qui diminue les besoins en matrice et donc les besoins en animaux. Pour chaque demande, un formulaire justifiant les volumes et le nombre d’animaux nécessaire est demandé au Donneur d’Ordre.
3. Raffinement
Le prélèvement terminal et la mise à mort des animaux seront réalisés sous anesthésie générale en absence d’autres congénères. Les animaux sont placés dans le compartiment d’anesthésie un par un et le délai entre la mise dans le compartiment et le moment de l’endormissement de l’animal est inférieur à 2 minutes. La mise à mort des animaux se fait dans une autre salle pour éviter tout contact visuel ou olfactif chez les autres animaux en attente d’anesthésie, pouvant provoquer un stress pour eux. Pour les recueils d’urine ou de fécès, les animaux seront placés en cage de recueil individuellement mais auront toujours un contact visuel et olfactif entre eux. Une attention particulière sera portée à l’enrichissement du milieu. Les animaux hébergés en groupe auront, dans leurs hébergements, la présence d’enrichissements variés et renouvelés (buchettes et balles en bois, cachettes, tunnels …). Un visite des hébergements est réalisée à minima 1 fois par semaine par le vétérinaire responsable. Dans ce projet les points limites sont : – Animal présentant une perte de poids supérieur à 20 % par rapport à son poids basal; – Animal ayant un comportement inhabituel (prostré, poils ébouriffé, signes d’agressivités); – Animal présentant des fèces liquides, diarrhéiques. Si l’un des points limites est atteint, alors l’animal sera exclu du projet et sera pris en charge par le vétérinaire désigné. L’animal pourra être euthanasié, décision prise par le vétérinaire désigné, conformément aux bonnes pratiques vétérinaires.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Dans les études précliniques, le rat et la souris sont les espèces de référence pour les études réglementaires, il est très souvent nécessaire d’avoir de la matrice témoin (sang, serum, plasma, excretas). Ceci est indispensable pour pouvoir valider la méthode de dosage et valider les dosages. Jeunes adultes ayant un âge entre 7 et 12 semaines environ. Cela dépendra des objectifs de l’étude pour laquelle la ou les matrices témoins seront collectées.