Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 10/08/2026
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-632193)
Pour savoir si les cellules de la niche intestinale commandent le dédoublement des cryptes de l’intestin, 162 souris vont être utilisées dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger, toutes tuées pour prélever leur tissu intestinal. Elles reçoivent une injection de tamoxifène sur animal vigile, une seule fois ou une fois par jour pendant trois jours consécutifs, entre le dixième et le quarantième jour après leur naissance, encore hébergées avec leur mère. L’injection supprime leurs cellules de Paneth, dont le porteur reconnaît que l’absence pourrait avoir des conséquences chez les souriceaux. Pour écarter ce risque, il s’appuie sur des observations non publiées de la collaboratrice qui lui a fourni la lignée.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
L??pith?lium intestinal se caract?rise par une intense capacit? de renouvellement et de r?g?n?ration assur?e par les cryptes qui abritent les cellules souches et sont donc riches en m?canismes de r?gulation et de contr?le. Lors de cette r?g?n?ration, le nombre de cryptes augmente par un processus appel? fission de crypte qui consiste en un d?doublement d?une crypte m?re en deux cryptes filles. De plus, le processus de fission de crypte est essentiel pour la croissance intestinale pendant la maturation postnatale. Malgr? son importance dans la formation et le maintien de l?intestin, ce processus reste aujourd?hui tr?s mal document?. La litt?rature montre que les cellules de la niche des cellules souches intestinales jouent un r?le pr?pond?rant au cours du processus de crypte fission. Le but de notre projet est de d?finir si et comment les cellules de la niche intestinale contr?le cette fission de crypte. Notre hypoth?se est que la m?canique des cellules souches est cruciale lors de la fission de cryptes.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
De r?centes ?tudes ont montr? qu?une perturbation de ce fonctionnement peut entrainer des fissions anormales et donner des cryptes corrompues impliqu?es dans la formation de micro-ad?nomes et d?ad?nomes dans le petit intestin et le c?lon. Notre ?quipe a notamment identifi? des fissions de cryptes anormales ? l?origine du d?veloppement de maladies intestinales infantiles rares. Ainsi, la fission de crypte est au c?ur de la physiopathologie intestinale humaine. Cependant, les m?canismes r?gissant la fission de crypte sont mal connus. Ainsi, notre ?quipe cherche ? caract?riser ce processus post-d?veloppemental en collaboration avec des cliniciens gastroent?rologues.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Une injection sur animal vigile (geste de 1 minute maximum) par jour. Seront test?s 2 types d’administration : soit une seule injection, soit une injection par jour pendant 3 jours cons?cutifs.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Du stress peut subvenir lors de la contention pour l?injection, ainsi qu?une douleur de faible intensit? lors de l?introduction de l?aiguille. Les lign?es de souris avec lesquelles nous travaillerons n’ont pas de ph?notype dommageable. Toutefois, l?ablation des cellules de Paneth pourrait avoir des cons?quences durant la p?riode postnatale, bien que les observations non publi?es de notre collaboratrice ayant fourni la lign?e murine, sugg?rent qu’un ph?nom?ne de compensation limite les r?percussions majeures sur l’hom?ostasie intestinale globale m?me chez les souriceaux. N?anmoins, afin de prendre en compte un ?ventuel impact transitoire sur la fonction de barri?re intestinale ou sur la physiologie digestive dans les jours suivant l’induction, nous int?grerons un suivi renforc? des animaux entre 5 et 20 jours post-injection tamoxif?ne. Ce suivi comprendra notamment l’?valuation quotidienne de l’?tat g?n?ral, de la croissance pond?rale, de l’aspect de l’abdomen, de l’activit? spontan?e, de la prise alimentaire (appr?ci?e indirectement chez les jeunes animaux par l’?tat g?n?ral et la croissance) ainsi que de la pr?sence ?ventuelle d’anomalies digestives. Lorsque cela sera possible en fonction de l’?ge des animaux et de la production de f?ces individualisables, l’aspect des selles (consistance, diarrh?e, souillure p?rianale) sera ?galement surveill?. Toute alt?ration persistante de ces param?tres entra?nera une ?valuation rapproch?e de l’animal et l’application des points limites d?finis dans le protocole. Ces mesures permettront de d?tecter pr?cocement toute cons?quence inattendue li?e ? la perte des cellules de Paneth durant cette fen?tre postnatale sensible.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Tous les animaux seront euthanasi?s ? la fin des proc?dures afin de pr?lever le tissu intestinal.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Une grande partie du projet est d?j? r?alis?e in vitro ? l?aide de cultures d?organo?des dans notre ?quipe ; des cultures d?organo?des intestinaux nous permettent d??tudier le m?canisme de fission des cryptes de fa?on globale. Cependant, pour ?valuer sp?cifiquement le r?le des cellules de la niche intestinale dans l?environnement complexe du tissu, nous devons utiliser des animaux. En effet, les m?thodes utilisant les cellules en culture ne peuvent pas remplacer la complexit? des interactions tissulaires dans un organe tel que l?intestin. Nos mod?les d?organo?des permettent de reconstituer les populations cellulaires du tissu intestinal afin de r?aliser des tests in vitro pour comprendre l?importance, le r?le des cellules de Paneth. Cependant leur utilisation pr?sente des limites, ils ne miment pas l?architecture et le fonctionnement du tissu ?pith?lial intestinal dans son entier, ainsi que ses interactions avec le m?senchyme sous-jacent. Afin d??tudier le ph?nom?ne de fission de crypte pendant le d?veloppement post-natal, nous avons besoin de suivre in vivo le tissu intestinal fonctionnel dans son entier dans son environnement.
2. Réduction
Nous nous effor?ons de limiter le nombre d?animaux par groupe en utilisant un maximum de donn?es pour chaque animal. Ainsi, pour chaque animal, sont pr?lev?s des ?chantillons pour l?histologie, l?immunohistologie et analyse en microscopie ? fluorescence confocale, et isolation de cryptes pour pr?paration de cultures d?organo?des. De plus, le nombre d’animaux a ?t? d?termin? ? partir d’une analyse de puissance statistique.
3. Raffinement
Les souris sont h?berg?es avec leur m?re, dans des zones satisfaisant leurs besoins physiologiques et leur apportant un maximum de bien-?tre. Les conditions de temp?rature, lumi?re, et humidit? sont contr?l?es. Les souris nouveaux-n?s et leur m?re sont ensemble isol?s dans une cage, et disposent de diff?rents enrichissements (coton, d?me et tubes en carton). Une d?sinfection syst?matique du site d?injection ? l??thanol sera r?alis?e sur chaque souris pour l?injection du tamoxif?ne. Les souris qui auront subi cette injection seront plac?es dans une zone de stabulation d?di?e, avec moins de bruit et de passages et seront observ?es quotidiennement par un animalier ou l?exp?rimentateur. Les personnes pratiquant les injections sont form?es et ont une expertise afin de maitriser le geste et r?duire le temps de contention et de ce fait r?duire le stress chez les souris. Enfin, des points limites ont ?t? mis en place et seront appliqu?s.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Chez la souris, l?organisation du tissu intestinal est similaire ? celle d?crite chez l?Homme et c?est un mod?le exp?rimental tr?s utilis? dans la litt?rature pour l??tude du d?veloppement et de la physiologie intestinale. Les animaux seront utilis?s au stade juv?nile entre les jours postnataux/ jeune adulte 10 (jour postnatal P10) et 40 (jour postnatal P40) car c?est dans cette fen?tre d?veloppementale que se r?alisent la grande majorit? des fissions de crypte. Nous utiliserons des animaux g?n?tiquement modifi?s pour pouvoir supprimer la pr?sence de cellules de la niche intestinale et permettre de d?terminer leur r?le sp?cifique ? l’aide de la microscopie lors du d?veloppement intestinal.