Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2022-04-29 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-634992)
Âgés de six semaines, 180 rats Sprague-Dawley reçoivent pendant 30 à 90 jours une alimentation standard ou riche en graisses, avec un gavage un jour sur deux en semaine, d’huile seule ou d’un mélange d’hydrocarbures aromatiques polycycliques à 80 ou 800 µg/kg. 84 sont exploités dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré, 96 un niveau sévère. Ils subissent des prises de sang, des prélèvements de poils et des passages de 24 heures, isolés, en cage à métabolisme, puis 96 rats passent entre J60 et J90 des tests d’anxiété et de cognition non nommés, 24 heures sur roue d’activité et le test de Porsolt. 36 autres subissent trois tests de tolérance au glucose de 180 minutes et une heure de contention pour mesurer leur réponse au stress, épreuves que le porteur associe à des prises de sang à la queue et à une sonde rectale à demeure, alors qu’il décrit le test au glucose comme une « procédure facile à mettre en œuvre et peu contraignante pour l’animal ». Les rats sont tués à J60 ou à J90, 24 heures après leur dernière épreuve, pour prélever leurs tissus.
Résumé produit par un modèle de langage à partir du seul texte du laboratoire, selon une méthode arrêtée par l’OXA. Publié sans relecture individuelle préalable, sous la responsabilité de l’association, et corrigé au fil des relectures.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
Décrire les objectifs du projet.
Note de l'OXA. Cette question est celle du formulaire européen de résumé non technique. Elle est posée au laboratoire qui demande l'autorisation, et sa réponse est écrite avant que la première procédure commence (arrêté du 1er février 2013, art. 5). Ces objectifs servent à justifier l'utilisation des animaux devant le comité d'éthique. Aucun document public ne dira ensuite s'ils ont été atteints : la directive permet aux États de faire mettre à jour le résumé avec les résultats de l'appréciation rétrospective (directive 2010/63/UE, art. 43), la base européenne prévoit de les recevoir, et aucune entrée française n'en porte (base ALURES).
Dans quel but fait-on ça ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
La stéatohépatite non alcoolique est une maladie chronique qui concernerait plus de 200 000 personnes en France chaque année. Elle correspond à une accumulation de graisses dans le foie sous forme de gouttelettes lipidiques dans les hépatocytes (stéatose) associée à une inflammation de l’organe (hépatite). En dehors des altérations purement hépatiques, ces stéatoses peuvent aussi être reliées à des troubles fonctionnels cérébraux (anxiété, stress et dépression). Des études ont conduit à évaluer l’exposition aux polluants environnementaux comme facteur favorisant la progression de la stéatose vers la stéatohépatite, forme sévère de la maladie. Les études d’exposition ont montré que les Hydrocarbures Aromatiques Polycycliques sont les polluants prédominants en secteur résidentiel, ce qui rend leur exposition presque inévitable pour l’homme. L’alimentation est la principale source d’exposition en hydrocarbures aromatiques polycycliques. En raison de leur forte rémanence et de leur propriété lipophile, les hydrocarbures aromatiques polycycliques s’accumulent dans le foie et le cerveau, lieux principaux de métabolisation, avec pour conséquence de pouvoir entraîner des lésions hépatiques et des altérations cérébrales (troubles de l’anxiété liés à des altérations de la fonctionnalité cérébrale localisées dans des aires impliquées dans la régulation de ces comportements ainsi que des atteintes cognitives. L’exposition aux hydrocarbures aromatiques polycycliques modifie également la quantité et les caractéristiques des vésicules extracellulaires (nanovésicules entourées par une membrane) physiologiquement libérées par des cellules au sein de tout type d’organes. Des travaux ont mis en exergue la capacité des hydrocarbures aromatiques polycycliques à déclencher la libération de vésicules extracellulaires modifiées provenant d’hépatocytes qui, une fois absorbées par d’autres hépatocytes sains, peuvent entraîner la mort de ces derniers. Dans le cadre de ce projet, nous évaluerons : 1) les effets hépatotoxiques et neurotoxiques induits par une exposition répétée à un mélange d’hydrocarbures aromatiques polycycliques dans un contexte de NASH ou non chez le rat adulte, et 2) Les modifications en terme de niveau de production et caractéristiques des vésicules extracellulaires libérées par le foie et le cerveau et isolées du plasma et des urines de ces mêmes animaux.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Note de l'OXA. Le formulaire européen demande les bénéfices « susceptibles de découler » du projet. Il appelle donc une projection, et il l'obtient : ce que le laboratoire écrit ici est ce qu'il espère, avant d'avoir commencé. Deux chercheuses ont repris six corpus d'études précliniques déjà menées et pesé les dommages réellement infligés aux animaux contre les bénéfices cliniques réellement obtenus : moins de 7 % de ces études ressortaient défendables (Pound et Nicol, 2018).
Est-ce « inutile » ou « nécessaire » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Nous espérons ainsi identifier de nouveaux biomarqueurs d’exposition et/ou d’effets des hydrocarbures aromatiques polycycliques et de nouvelles cibles thérapeutiques en décryptant le rôle des vésicules extracellulaires dans la physiopathologie de la stéatohépatite et le lien avec de possibles atteintes cérébrales. Cette étude devrait nous permettre : 1) d’évaluer les effets d’une exposition aux hydrocarbures aromatiques polycycliques dans un contexte enrichi en lipide ou pas, sur le niveau de production et les caractéristiques des vésicules extracellulaires et l’impact de ces changements sur les pathologies hépatiques et cérébrales, 2) de comprendre si les vésicules extracellulaires libérées par les cellules hépatiques et de la microglie, suite à l’exposition aux hydrocarbures aromatiques polycycliques peuvent être des vecteurs de toxicité pour les cellules réceptrices, 3) de déterminer la fiabilité de la caractérisation ces vésicules extracellulaires en tant que biomarqueurs d’exposition et/ou de toxicité précoces, modèle facilement transposable chez l’humain, 4) d’évaluer l’interaction avec un stress de nature différente et d’identifier des comorbidités (la libération de vésicules extracellulaires et l’inflammation dues à une surcharge en acides gras libres au niveau plasmatique pouvant être considérée comme un stress supplémentaire venant s’ajouter à l’exposition aux hydrocarbures aromatiques polycycliques).
Nuisances prévues, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Note de l'OXA. La formule « en règle générale » autorise une réponse générale, et c'est l'un des points sur lesquels les examens de qualité trouvent ces documents défaillants. Un examen publié en 2018 a établi que les résumés allemands et britanniques décrivaient mal ce qui est fait aux animaux et ce que ceux-ci pourraient éprouver (Taylor et al., 2018). L'adoption d'un modèle commun européen a nettement amélioré le premier point, à peine le second (Taylor et al., 2024).
Le droit d'accès aux documents · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Ce projet inclura 3 lots regroupant 6 groupes d’animaux : 3 groupes nourris avec la nourriture standard de l’animalerie et 3 groupes alimentés avec un régime riche en lipides. Dans chaque bras, un groupe sera utilisé comme contrôle en étant administré avec l’huile végétale (huile isio 4, Lessieur, exempt d’hydrocarbures aromatiques polycycliques) analysée comme servant de véhicule pour la solution d’hydrocarbures aromatiques polycycliques, les 2 autres lots recevant la solution d’hydrocarbures aromatiques polycycliques à 2 doses différentes (80 ou 800 µg/kg de poids corporel). Les animaux seront nourris avec l’une ou l’autre nourriture pendant 30, 60 ou 90 jours et recevront de façon simultanée une administration de la solution d’hydrocarbures aromatiques polycycliques ou d’huile à raison d’une administrations par gavage (une minute par animal) quotidienne un jour sur deux au cours de la semaine (n’est pas prévu d’administration le week-end). Les animaux du lot 1 d’un total de 48 rats (n=8 par groupe) se verront prélever des poils, du sang (à J0, J28 et J58) et de l’urine (à J30 et J60, cage à métabolisme pendant 24h) pour une mise à mort à J60. Les animaux du lot 2 d’un total de 96 rats (n=16 par groupe) se verront prélever des poils, du sang (à J0 et J88) et de l’urine (à J90, cage à métabolisme pendant 24h) pour une mise à mort à J90. De plus, ce lot servira à explorer les performances comportementales au plan de l’anxiété (mesurée pendant 5 minutes), de l’activité (mesurée pendant 24h), des performances cognitives (mesurée pendant 2 séances de 10 minutes chacunes) et de la résignation (mesurée pendant 5 minutes) entre J60 et J90. Enfin, Les animaux du lot 3 d’un total de 36 rats (n=6 par groupe) se verront prélever des poils, du sang (à J0 et J88) et de l’urine (à J90, cage à métabolisme pendant 24h) pour une mise à mort à J90. Ce lot sera dédié à l’étude de la réactivité à un stress psychologique (exposition à un stress pendant une heure) et la tolérance au glucose. Ces 6 animaux seront réutilisés au 3 stades (J30, J60 et J90) pour pouvoir suivre chez les mêmes individus l’évolution de la tolérance au glucose (test d’une durée de 180 minutes) en lien avec le développement de la stéatose puis la stéatohépatite. Une fois les mises à mort effectuées, les tissus d’intérêts seront prélevés pour analyses.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Note de l'OXA. C'est l'endroit du document où les animaux devraient apparaître, et c'est celui qui résiste. Un nouvel examen, publié en 2024, a mesuré que cinq des six éléments attendus sur les dommages prévus progressaient depuis l'adoption d'un modèle commun européen. Les effets indésirables sont le sixième : 41 % des résumés allemands et 48 % des britanniques les décrivent complètement. Les auteurs relèvent aussi des effets présentés comme minimes sur des projets classés modérés ou sévères (Taylor et al., 2024). Ces mesures portent sur l'Allemagne et le Royaume-Uni. L'examen de 2018 classait la France parmi les pays les moins bons pour l'identification, l'accessibilité et la qualité de ses résumés, sans les noter rubrique par rubrique (Taylor et al., 2018). Les résumés français suivent aujourd'hui le modèle européen commun.
Les animaux souffrent-ils ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Les nuisances/effets indésirables identifiés attendus tout au long du projet que suivront les animaux sont les suivants : stress lié à l’administration par gavage des hydrocarbures aromatiques polycycliques, l’inconfort qui pourrait etre lié à la prise de poids du fait des régimes alimentaires qui seront utilisés, le stress généré par le passage en cage à métabolisme pour une durée de 24h pendant laquelle l’animal sera isolé, l’isolement de l’animal lors de son passage pendant 24h dans le test d’actvité avec une roue d’activité, le stress/mal-être généré par le passage dans le test de Porsolt, le stress voire douleur liés à l’épreuve de réponse au stress et le test de tolérance au glucose (stress lié à la contention, aux prises de sang à la veine de la queue, pose et maintien de sonde rectale à demeure pour prise de température).
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Note de l'OXA. Le formulaire demande de justifier ce sort, non de le décrire. L'analyse dommage-avantage que la directive impose au comité d'éthique porte sur « la souffrance, la douleur et l'angoisse » infligées aux animaux (directive 2010/63/UE, art. 38). Quand ce sort est la mise à mort, celle-ci ne figure donc pas parmi les dommages que le comité met en balance avec les bénéfices annoncés. L'OXA écrit « mise à mort » plutôt que « sacrifice », qui emprunte au registre du don consenti, ou « euthanasie », qui désigne une mort décidée dans l'intérêt de celui qui meurt.
Peut-on parler d'éthique en expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
La mise à mort des animaux se fera 24h après le prélèvement des urines en cage à métabolisme pour 48 rats à J60 et 96 rats à J90 après passage dans les tests de comportement. La mise à mort des 36 derniers animaux se fera 24h après l’étude de la réactivité au stress induite par une contention à J90. Après chaque mise à mort, les tissus d’intérêts à l’étude seront prélevés pour des analyses ultérieures.
Application de la règle des "3R", selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
1. Remplacement
Note de l'OXA. La directive demande au résumé « une démonstration de la conformité » aux exigences de remplacement, de réduction et de raffinement (directive 2010/63/UE, art. 43). C'est donc le demandeur qui démontre sa propre conformité, dans le document même qui sollicite l'autorisation. Cette démonstration peut prendre la forme d'une affirmation qu'aucune méthode de substitution n'existe, que le document n'a pas à sourcer. Ces trois exigences sont par ailleurs subordonnées à l'objectif du projet : elles cherchent à remplacer les animaux dans un projet donné, elles n'interrogent pas ce projet.
Comment avancer vers la fin de l'expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
L’objectif du projet étant d’étudier le rôle des vésicules extracellulaires produites au niveau du foie dans un contexte d’exposition à un régime enrichi en lipides ou pas, associé à une exposition répétée longue aux hydrocarbures aromatiques polycycliques dans le dialogue entre le foie et le système nerveux, il n’est pas possible de procéder au remplacement des animaux par un système alternatif. Aucun système alternatif ne permet de simuler le niveau de complexité de l’organisme entier nécessaire pour répondre aux objectifs du projet.
2. Réduction
Note de l'OXA. La réduction dont il est question ici porte sur le nombre d'animaux par groupe expérimental, calculé pour que l'analyse statistique tienne. Le total annoncé dans la fiche est une estimation portant sur une autorisation de cinq ans au maximum (code rural, art. R214-123) : il ne dit pas combien d'animaux seront effectivement utilisés, et il ne se rapporte pas à une année.
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Le nombre total d’animaux est le nombre estimé juste et nécessaire pour pouvoir atteindre les objectifs du projet dans des conditions de réalisation acceptables garantissant ainsi le bon déroulement de l’expérimentation, la prise en charge adaptée des animaux de façon à garantir au mieux leur bien-être et une exploitation statistique satisfaisante des résultats. Le nombre de 180 animaux prévu a été déterminé pour un calcul de puissance statistique de 80%, des effectifs égaux dans les 6 groupes expérimentaux (n=30/groupes) et la variation estimée la plus sensible dans l’ensemble des mesures effectuées. Par ailleurs ce nombre de 180 animaux est réparti en 3 lots de respectivement, 48, 96, et 36 rats destinés à des mesures à un stade déterminé pour chaque lot plutôt que d’avoir un seul lot nécessitant de répéter à chaque stade d’investigation un nombre conséquent de procédures contraignantes avec pour conséquence un risque en terme de mal-être des animaux tout au long de l’expérimentation et une prise en charge inadaptée compte-tenu d’un volume de travail trop important.
3. Raffinement
Note de l'OXA. Le raffinement nomme une amélioration technique de la procédure, sans dire ce qu'elle change pour l'animal qui la subit. La réglementation impose d'atténuer la douleur, dans une limite qu'elle inscrit elle-même : « pour autant que cela soit compatible avec la finalité de la procédure expérimentale » (code rural, art. R214-109). Ce qui reste de souffrance après cette limite est autorisé. Le raffinement ne porte par ailleurs que sur la procédure : les souffrances de la captivité elle-même, confinement, bruit, lumière, manipulations d'entretien, ne relèvent d'aucun des trois R.
La réglementation est-elle « très stricte » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Le raffinement dans cette expérimentation tient dans la répartition des animaux en 3 lots distincts, destinés aux investigations prévues à un ou deux des 3 stades d’étude au cours de l’expérimentation (J30, J60 et J90). Il a été choisi de raffiner de la sorte l’expérimentation au détriment de la réduction du nombre total d’animaux pour garantir au mieux le déroulement de l’expérimentation et la prise en charge des animaux en matière de bien-être. Seuls les animaux destinés à l’étude de la réactivité au stress à J90 seront également sollicités à J30 et J60 pour la réalisation d’une épreuve de tolérance au glucose, procédure facile à mettre en œuvre et peu contraignante pour l’animal. Cette dernière sera réalisée de manière à suivre simultanément les niveaux de glucose et de corticostérone circulant, les hydrocarbures aromatiques polycycliques ayant un impact connu sur l’axe hypothalomo-hypophyso-surrénalien. Par ailleurs, les animaux qui seront achetés pour ce projet seront maintenus et élevés selon les conditions d’élevage habituelles en accord avec les contraintes fixées par la réglementation (installations agréées, conditions de température, d’hygrométrie et de lumière contrôlées, (22°C+/- 2°C, 55%+/-10%, cycle lumineux 12h:12h, allumage à 20h, eau et nourriture disponibles à volonté). Les animaux seront placés à 2 par cage selon les dispositions réglementaires en termes de rapport surface (900 cm2 et une hauteur de 18 cm minimum) / nombre d’animaux dans des portoirs ventilés avec une feuille de papier absorbant comme dispositif d’enrichissement. Leur comportement sera surveillé afin de s’assurer de l’absence de mal-être ou de comportement agressif entre les animaux. La croissance des animaux soumis au régime riche en lipide sera évaluée régulièrement de manière à pouvoir maintenir les animaux par 2 dans des cages de plus grande taille afin d’éviter l’isolement de ces derniers et l’impact qu’il pourrait avoir sur leurs performances comportementales et leur bien- être. La prise de poids des animaux traités au régime riche en lipide ne devrait pas excéder 10 à 12% comparativement au contrôle. En ce qui concerne les prélèvements vigiles à la veine caudale, la douleur sera contrée par badigeon à la lidocaïne. L’éventuel mal être lié à l’isolement en cage à métabolisme sera réduit en plaçant les cages les unes à côté des autres de manière à permettre une communication entre les animaux et sur une période limitée à 24 h et une seule fois.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Note de l'OXA. Le dossier d'autorisation demande de justifier l'origine des animaux, leur espèce, leur nombre estimé et leur stade de développement (arrêté du 1er février 2013, art. 5). La justification attendue est technique : elle porte sur l'adéquation de l'espèce à l'objectif poursuivi. Ce que l'appartenance à une espèce autorise à faire subir à un individu est une question morale, et le formulaire ne la pose pas. L'appartenance à une espèce, prise seule, ne fonde pourtant pas de différence de statut moral entre des individus également capables de souffrir.
Spécisme et expérimentation animale · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Le projet de recherche nécessite le recours à des analyses physiologiques, cellulaires, biochimiques et moléculaires en lien avec des régimes nutritionnels spécifiques induisant une stéatose hépatique non alcoolique. Les rats Sprague- Dawley sont utilisés pour la recherche sur la physiologie et le métabolisme. De plus, il a été montré dans la littérature que les rats Sprague-Dawley constitue un meilleur modèle d’étude d’induction de stéatose hépatique non alcoolique par voie orale que la souche Wistar. Les animaux entreront dans l’étude à l’âge de 6 semaines et seront acclimatés à leur nouvel environnement pendant 8 à 10 jours. A ce stade ils auront atteint leur maturité sexuelle et sont donc considérés comme jeune adulte, ce qui est représentatif du profil de la population touchée.