Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2024-04-29 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-181495)
Quarante-deux souris femelles adultes subissent des gavages dans l’estomac chaque semaine pendant un mois, sur animal vigile, et des prélèvements de sang hebdomadaires. Les souriceaux de 48 portées sont tatoués, reçoivent des gouttelettes de probiotiques dans la bouche chaque jour pendant dix à quatorze jours, puis sont prélevés régulièrement jusqu’à leur 140e jour de vie. 234 souris en tout, dans des procédures d’un niveau de souffrance léger à modéré. Le porteur range les mises à mort parmi des nuisances qu’il qualifie de limitées, aux côtés des pesées et des séparations mère-portée. Les mères sont tuées après le sevrage, leur microbiote n’étant plus comparable à cause de la coprophagie, et les souriceaux le sont pour accéder à leur contenu intestinal.
Résumé produit par un modèle de langage à partir du seul texte du laboratoire, selon une méthode arrêtée par l’OXA. Publié sans relecture individuelle préalable, sous la responsabilité de l’association, et corrigé au fil des relectures.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
Décrire les objectifs du projet.
Note de l'OXA. Cette question est celle du formulaire européen de résumé non technique. Elle est posée au laboratoire qui demande l'autorisation, et sa réponse est écrite avant que la première procédure commence (arrêté du 1er février 2013, art. 5). Ces objectifs servent à justifier l'utilisation des animaux devant le comité d'éthique. Aucun document public ne dira ensuite s'ils ont été atteints : la directive permet aux États de faire mettre à jour le résumé avec les résultats de l'appréciation rétrospective (directive 2010/63/UE, art. 43), la base européenne prévoit de les recevoir, et aucune entrée française n'en porte (base ALURES).
Dans quel but fait-on ça ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
La production par le foie d’oxyde de triméthylamine à partir du triméthylamine synthétisé par le microbiote intestinal est associée au développement de l’athérosclérose (AS), une maladie cardiovasculaire qui constitue la première cause de mortalité dans le monde. En vue de prévenir cette pathologie, ce projet a pour but d’établir si une modulation néonatale du microbiote visant à diminuer la production de ces composés contrecarrerait le développement de l’AS chez les souris. La période néonatale, au cours de laquelle le microbiote intestinal se constitue étant plus adaptée à sa modification, nous testerons, chez les souriceaux, l’efficacité de différents micro-organismes pour atténuer durablement les productions de ces composés tout au long de la vie de l’animal et réduire le développement de la plaque d’athérosclérose à l’âge adulte. Pour maximiser nos chances de succès, nous comparerons 2 périodes néonatales et procéderons en 3 étapes : 1) présélection, parmi les 6 microorganismes retenus après tests in vitro, de 2 souches de microorganismes capables de réduire in vivo, chez la souris adulte, les concentrations de ces composés; 2) sélection parmi ces 2 souches de celle qui sera la plus efficace chez les souriceaux, pour moduler la production de ces composés tout au long de la vie de l’animal, et 3) vérification, dans un modèle de souriceau spécifiquement dédié à l’étude de l’AS, de la capacité de la souche retenue à réduire le développement de la maladie.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Note de l'OXA. Le formulaire européen demande les bénéfices « susceptibles de découler » du projet. Il appelle donc une projection, et il l'obtient : ce que le laboratoire écrit ici est ce qu'il espère, avant d'avoir commencé. Deux chercheuses ont repris six corpus d'études précliniques déjà menées et pesé les dommages réellement infligés aux animaux contre les bénéfices cliniques réellement obtenus : moins de 7 % de ces études ressortaient défendables (Pound et Nicol, 2018).
Est-ce « inutile » ou « nécessaire » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Ce projet permettra d’argumenter le développement de suppléments ou de stratégies dédiés à la prévention de l’athérosclérose via la modulation du microbiote intestinal. En outre, si le modèle animal développé permet un réel contrôle des concentrations circulantes en oxyde de trimethylamine, il augmentera les possibilités d’élucidation des répercussions physiopathologiques de ce composé qui semblent aujourd’hui pertinentes dans de nombreuses pathologies outre les maladies cardiovasculaires.
Nuisances prévues, selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Note de l'OXA. La formule « en règle générale » autorise une réponse générale, et c'est l'un des points sur lesquels les examens de qualité trouvent ces documents défaillants. Un examen publié en 2018 a établi que les résumés allemands et britanniques décrivaient mal ce qui est fait aux animaux et ce que ceux-ci pourraient éprouver (Taylor et al., 2018). L'adoption d'un modèle commun européen a nettement amélioré le premier point, à peine le second (Taylor et al., 2024).
Le droit d'accès aux documents · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Les 42 souris femelles adultes utilisées dans la procédure 1 seront soumises pendant 4 semaines à des gavages intrastomaccaux hebdomadaires réalisés sur animaux vigiles (2mn /gavage) et à des prélevements sanguins hebdomadaires (5min/prélèvement). Les souriceaux des 36 portées utilisées dans la procédure 2 et les souriceaux des 12 portées utilisées dans la procédure 3 seront tatoués (1 min). Ils recevront (via le dépôt de goutelletes dans la bouche) les suspensions de microorganismes probiotiques quotidiennement (5min) pendant 10 à 14 jours (selon leur allotissement) et eront soumis de façon hebdomadaire jusqu’à leurs 60e jour de vie, puis de façon bimensuelle jusqu’à leur 140e jour de vie, à des prélèvements de selles et des prélèvements sanguins (5min au total).
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Note de l'OXA. C'est l'endroit du document où les animaux devraient apparaître, et c'est celui qui résiste. Un nouvel examen, publié en 2024, a mesuré que cinq des six éléments attendus sur les dommages prévus progressaient depuis l'adoption d'un modèle commun européen. Les effets indésirables sont le sixième : 41 % des résumés allemands et 48 % des britanniques les décrivent complètement. Les auteurs relèvent aussi des effets présentés comme minimes sur des projets classés modérés ou sévères (Taylor et al., 2024). Ces mesures portent sur l'Allemagne et le Royaume-Uni. L'examen de 2018 classait la France parmi les pays les moins bons pour l'identification, l'accessibilité et la qualité de ses résumés, sans les noter rubrique par rubrique (Taylor et al., 2018). Les résumés français suivent aujourd'hui le modèle européen commun.
Les animaux souffrent-ils ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Pour les souris incluses dans ce projet, les nuisances induites par la procédure seront limitées au stress généré par les séparations mères/portées ponctuelles (< 15min/j) et par la manipulation lors de leurs pesées (< 2min/j), supplémentations par gavage (souris adultes) ou « biberonnage » (souriceaux) (< 3min/j) et mises à mort. Le traitement antibiotique qui sera administré ne devrait entraîner aucun effet indésirable spécifique puisque déjà utilisé dans des travaux antérieurs chez la souris.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Note de l'OXA. Le formulaire demande de justifier ce sort, non de le décrire. L'analyse dommage-avantage que la directive impose au comité d'éthique porte sur « la souffrance, la douleur et l'angoisse » infligées aux animaux (directive 2010/63/UE, art. 38). Quand ce sort est la mise à mort, celle-ci ne figure donc pas parmi les dommages que le comité met en balance avec les bénéfices annoncés. L'OXA écrit « mise à mort » plutôt que « sacrifice », qui emprunte au registre du don consenti, ou « euthanasie », qui désigne une mort décidée dans l'intérêt de celui qui meurt.
Peut-on parler d'éthique en expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Compte tenu de l’influence connue du nombre de gestations vécues sur la physiologie et le comportement maternel et surtout du fait de la coprophagie qui peut induire une colonisation des souris allaitantes par les microorganismes administrés aux descendants, induisant ainsi une non comparabilité des microbiotes chez les mères en fin de 1ère lactation, les souris utilisées pour générer les portées pour les procédures 2 et 3 ne peuvent pas être réutilisées dans nos expérimentations animales et seront mises à mort une fois leurs souriceaux sevrés. De même, du fait de l’influence établie du microbiote intestinal sur la physiologie de l’hôte, les supplémentations en probiotiques appliquées empêchent toute réutilisation ultérieures des souriceaux, même une fois devenus adultes . En outre, la focalisation sur la période néonatale, période au cours de laquelle la récolte de selles est quasiment impossible , requiert un accès direct aux contenus intestinaux, ce qui rend la mise à mort inévitable. Il est à souligner que pour les procédures 2 et 3 dans lesquelles l’individu statistique indépendant correspond à la portée, l’utilisation à deux stades de développement des 144 et 48 (respectivement) souriceaux mâles et femelles valorisera au mieux les animaux obtenus à la mise bas.
Application de la règle des "3R", selon le laboratoire
Réponses rédigées par le laboratoire demandeur, à des fins de communication. Elles ne sont ni sourcées ni relues par des pairs.
1. Remplacement
Note de l'OXA. La directive demande au résumé « une démonstration de la conformité » aux exigences de remplacement, de réduction et de raffinement (directive 2010/63/UE, art. 43). C'est donc le demandeur qui démontre sa propre conformité, dans le document même qui sollicite l'autorisation. Cette démonstration peut prendre la forme d'une affirmation qu'aucune méthode de substitution n'existe, que le document n'a pas à sourcer. Ces trois exigences sont par ailleurs subordonnées à l'objectif du projet : elles cherchent à remplacer les animaux dans un projet donné, elles n'interrogent pas ce projet.
Comment avancer vers la fin de l'expérimentation animale ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Aucun des modèles in vitro existant ne permet de rendre compte de la complexité des mécanismes physiologiques microbiens, hépatiques et immunitaires mis en jeu dans la formation de la plaque d’athérosclérose. Pour d’atteindre les objectifs de ce projet, l’étude in vivo est donc irremplaçable.
2. Réduction
Note de l'OXA. La réduction dont il est question ici porte sur le nombre d'animaux par groupe expérimental, calculé pour que l'analyse statistique tienne. Le total annoncé dans la fiche est une estimation portant sur une autorisation de cinq ans au maximum (code rural, art. R214-123) : il ne dit pas combien d'animaux seront effectivement utilisés, et il ne se rapporte pas à une année.
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Le nombre d’animaux est calculé en tenant compte du principe de réduction, des nombres d’individus statistiques nécessaires ainsi que des risques de non fécondation des souris ou d’obtention de portées naturelles de taille insuffisante. Le nombre d’individus statistiques (n=6) a été déterminé par calcul d’effectif à partir de données issues de souris adultes. La procédure n°1 repose sur le traitement de souris adultes, chacune constituant un individu statistique. De ce fait, 42 souris âgées de 6 à 8 semaines seront commandées afin de permettre la comparaison de groupes de 6 individus supplémentés avec 6 souches de microorganismes différentes en référence à un groupe non supplémenté. La procédure n°2 concerne des souriceaux allaités, l’individu statistique indépendant correspond donc à la portée. Ainsi, 38 souris saillies de l’avant-veille seront commandées afin de garantir l’obtention de 36 portées de 4 souriceaux (2 mâles et 2 femelles) qui seront réparties, pour chaque période néonatale testée, entre les 2 groupes expérimentaux et le groupe contrôle. L’utilisation à 2 stades de développement (1 souriceau de chaque sexe pour chaque portée en fin de supplémentation et au 60e jour de vie) des 144 souriceaux mâles et femelles issus de ces portées valorisera l’ensemble des animaux conservés à la mise bas. La procédure n°3 concerne également des souriceaux allaités, l’individu statistique indépendant correspond à nouveau à la portée. Dans ce cas, les souris prédisposées à l’atherosclerose n’etant pas commercialisées gestantes, nous accouplerons des souris mâles (4) et femelles (12) adultes, âgées de 8 semaines afin d‘obtenir 12 portées de 4 souriceaux (2 mâles et 2 femelles) qui seront réparties entre le groupe expérimental et le groupe contrôle. Vingt-quatre des 48 souriceaux seront mis à mort à l’issue des supplémentations et les 24 autres à la 25e semaine de vie.
3. Raffinement
Note de l'OXA. Le raffinement nomme une amélioration technique de la procédure, sans dire ce qu'elle change pour l'animal qui la subit. La réglementation impose d'atténuer la douleur, dans une limite qu'elle inscrit elle-même : « pour autant que cela soit compatible avec la finalité de la procédure expérimentale » (code rural, art. R214-109). Ce qui reste de souffrance après cette limite est autorisé. Le raffinement ne porte par ailleurs que sur la procédure : les souffrances de la captivité elle-même, confinement, bruit, lumière, manipulations d'entretien, ne relèvent d'aucun des trois R.
La réglementation est-elle « très stricte » ? · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
Le stress généré par chacune des procédures – en particulier par les gavages intra-stomacaux et par la manipulation et le « biberonnage » des portées- sera limité du fait de leur mise en oeuvre, rapide mais sans brusquerie, par un personnel compétent et entraîné, dans le respect de la charte nationale sur l’éthique de l’expérimentation animale et des recommandations relatives aux volumes administrable par voie orale. En outre, l’usage de tapis chauffants sur lequels les portées séparées de leurs mères seront placées, l’enrichissement des cages à l’aide de frisottis pour le nid et de tunnels et l’hébergement par 3 pendant les périodes hors reproduction contribueront à minimiser le stress des mères et des souriceaux. L’absence de nuisance durable sur le bien-être animal sera néanmoins vérifiée par observation des animaux lors des visites qui seront effectuées quotidiennement, y compris le week-end. L’évaluation de l’état des animaux conditionnera les éventuelles décisions d’administration d’analgésique dans le cas d’observation de signes attestant d’une souffrance (dos vouté, ventre rétracté, facies contracté, agressivité, vocalisation).
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Note de l'OXA. Le dossier d'autorisation demande de justifier l'origine des animaux, leur espèce, leur nombre estimé et leur stade de développement (arrêté du 1er février 2013, art. 5). La justification attendue est technique : elle porte sur l'adéquation de l'espèce à l'objectif poursuivi. Ce que l'appartenance à une espèce autorise à faire subir à un individu est une question morale, et le formulaire ne la pose pas. L'appartenance à une espèce, prise seule, ne fonde pourtant pas de différence de statut moral entre des individus également capables de souffrir.
Spécisme et expérimentation animale · Comment lire un résumé non technique
Texte du laboratoire demandeur, reproduit tel quel
La souris est choisie comme modèle d’étude car cette espèce animale est très utilisée pour l’étude des maladies cardiovasculaires. Ce modèle présente en outre l’intérêt d’être omnivore, de présenter un développement rapide adapté aux études de répercussions à long terme de traitements néonataux, et d’héberger un microbiote intestinal qui s’établit au cours des premières semaines de vie. De plus nos travaux antérieurs nous ont permis aux personnels impliqués dans ce projet d’acquérir une bonne maitrise de ce modèle. L’utilisation de souriceaux allaités dans 2 des 3 procédures permet à la fois de maximiser nos chances de moduler le microbiote intestinal qui s’assemble à cet âge et de mimer la situation humaine puisque le risque de développer l’athérosclérose à l’âge adulte apparaît en partie programmé au début de la vie.