Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 10/04/2024
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-673132)
2 800 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. L’équipe implante une tumeur sous la peau du flanc sur animal vigile, puis mesure cette tumeur deux à trois fois par semaine pendant qu’elle grossit, avec gêne à la mobilité, frottement, ulcération et nécrose possibles. Le porteur écrit qu’aucun dommage majeur n’est attendu, les produits testés étant déjà évalués chez l’être humain dans un essai clinique qu’il référence. Ces études servent à compléter des dossiers réglementaires auprès de l’ANSM et de la FDA, puis une demande d’autorisation de mise sur le marché.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Le Projet est une étude Préclinique de Pharmacologie expérimentale. Il a pour principal but de valider le mécanisme d’action de différents candidats Immunothérapeutiques via l’étude de l’activité antitumorale et de la réponse immunitaire induite sur souris porteuses de tumeurs. Nos candidats immunothérapeutiques seront administrés sous forme de cellules à récepteur antigénique chimérique (CAR), peptidique ou sous forme d’anticorps. Ces candidats seront spécifiques de différents antigènes de tumeurs déterminés par des études de recherche cognitive.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Ce projet de Pharmacologie s’inscrit dans une phase de développement préclinique de différents candidats immunothérapeutiques destinés à lutter contre les différentes formes de cancer chez l’Homme. Ces études, nous permettront la complétion de dossiers réglementaires pour obtenir l’accord de l’Agence Nationale de Sécurité du Médicament (ANSM (France) ou FDA (US)) pour évaluer l’efficacité de nos candidats immunothérapeutiques dans des phases cliniques sur des patients atteints de cancers. D’autre part elles seront constitutives d’une partie du dossier de demande d’autorisation de mise sur le marché (AMM). En effet, ces produits d’immunothérapie devront répondre à des normes internationales de qualité scientifique et clinique qui seront étroitement évaluées par les autorités de santé pour la délivrance de l’AMM.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Les animaux de ce projet seront soumis à une procédure comprenant l’identification (animaux vigiles, 1 fois, 1 minute/animal), des pesées (animaux vigiles, 2 à 3/semaine, 1 minute/animale), des traitements (animaux vigiles, en injection sous cutanée, intrapéritonéale ou intraveineux en fonction du produit testé et du schéma de traitement qui est à déterminer : dose unique ou dose répétée), d’implantation de tumeurs sous cutanées (animaux vigiles, 1 fois, 1 minute/animale) et de mesures tumorales (animaux vigiles, 2 à 3 fois/semaine, 1 minute/animale). Pour certaines études, un suivi de la réponse dans le sang pourra être envisagé. Pour cela un prélèvement de sang périphérique sera effectué à la veine retro-mandibulaire. En fonction de la cinétique, au maximum une fois par semaine en respectant les volumes autorisés : 0.5% du poids de l’animal pour un intervalle d’une semaine, 0.75% pour 2 semaines et 1% pour 3-4 semaines. Les animaux seront ensuite mis à mort pour le prélèvement de sang et organes en point finale pour les évaluations pharmacologiques ex vivo.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les agents thérapeutiques utilisés au cours de ce projet ayant déjà montré leur innocuité chez la souris sont en cours d’évaluation chez l’Homme (NCT05672459). De ce fait, aucun dommage majeur / effet indésirable lié au traitement n’est attendu dans le cadre de nos études. Cependant, une nuisance qui sera surveillée et contrôlée par le suivi et le respect des points limites, peux intervenir après injection de cellules tumorales et développement de la tumeur en sous cutanée sur le flanc de la souris (gêne à la mobilité lors du grossissement de la tumeur, frottement ulcération et nécrose). Il est important de noter que l’expérimentation animale sera utilisée de manière rationnelle et selon les réglementations en vigueur qui garantissent un traitement éthique de l’animal de laboratoire (application des 3R), avec pour objectif le raffinement, la réduction de l’utilisation de l’animal de laboratoire ou son remplacement par des modèles in vitro (ou autres) lorsque cela est possible.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
En fin d’étude les animaux seront mis à mort et certains organes (rate, poumons, foie, ganglions, sang, cerveau, tumeurs) seront prélevés pour des études de Pharmacocinétiques et de Pharmacodynamie.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Dans un premier temps, les différents candidats immunothérapeutiques feront l’objet d’une sélection et d’un développement préclinique in vitro, sur divers modèles cellulaires, afin de confirmer leur fonctionnalité. Par la suite, les modèles murins ayant leurs propres limitations pour les études de toxicologie sur des cibles humaines, des méthodes in vitro et/ou ex vivo seront mises en place avec l’utilisation notamment de culture 3D organoïdes, cellules primaires humaines ou banque de protéines d’expression sur modèles cellulaires.
2. Réduction
Chaque étude fera l’objet d’une rédaction de protocole expérimental, afin de garantir l’optimisation des expériences. L’optimisation du nombre d’animaux : entre 5 et 10 souris par groupe seront utilisées pour évaluer et interpréter l’efficacité antitumorale des différents candidats. La réduction des répétitions inutiles et optimisation du nombre d’animaux contrôles entre les différentes expériences réalisées dans les mêmes conditions. Les critères d’optimisation du nombre d’animaux contrôles vont dépendre du design de l’expérience (nombre de groupes expérimentaux) et des résultats des expériences précédentes / antérieures. La réduction du nombre d’animaux ne devra néanmoins pas se faire au dépend de la fiabilité des résultats. Lorsque cela est possible, et principalement pour les souris provenant de fournisseurs agréés, l’utilisation d’animaux homogènes (même sexe, même âge, même état sanitaire) sera privilégiée. Cette précaution sera prise afin de réduire autant que faire se peut la variabilité d’un individu à l’autre. Le nombre d’animaux utilisé dans les études a été déterminé pour permettre une étude statistique non paramétrique. Pour les études qui impliquent la comparaison de 2 groupes nous utiliserons un test de Mann-Whitney et pour les études impliquant des comparaison multi-groupes, nous utiliserons un test de Kruskal-Wallis avec correction de Dunn.
3. Raffinement
Utilisation des mesures de raffinement suivantes chaque fois que possible : – Procédures non invasives – Assurer les soins pré-, per- et postopératoires adéquats – Recours à l’anesthésie / analgésie – Application des points limites établis préalablement – Utilisation des procédures d’euthanasie appropriées – Utilisation de litière chirurgicale pour limiter les frottements/blessures/ulcérations de la tumeur lié à la litière – Utilisation de portoirs et cages ventilées – Enrichissement du milieu (maison, matériel de nidification) – Désinfection à l’aide de désinfectant iodé – Application d’Aluspray en aide à la cicatrisation
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Les différents candidats immunothérapeutiques seront d’abord évalués par des tests cellulaires in vitro pour confirmer leur fonctionnalité et leur innocuité. Néanmoins, il n’existe pas actuellement de tests de remplacement ou d’alternatives à l’utilisation d’animaux de laboratoire pour étudier la réponse immunitaire et l’efficacité antitumorale. Ces deux critères sont essentiels et critiques pour évaluer le potentiel thérapeutique réel des immunothérapies développées. Aujourd’hui, la souris est le principal modèle utilisé / étudié en recherches anticancéreuses et en immunologie. Pour notre projet, nous utiliserons des modèles de souris, dans lesquelles de nombreux modèles de tumeurs ont été isolés / développés et sont parfaitement caractérisés. Souris adultes entre 5 et 10 semaines : âge compatible avec le monitoring d’une réponse immunitaire et l’implantation de cellules tumorales en sous cutanées ou injection intraveineuse.