Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 20/03/2024
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-940206)
720 souris vont être utilisées, toutes tuées pour prélever leurs tissus, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger. Privées de nourriture la nuit précédente, elles sont gavées puis subissent trois prélèvements sanguins par voie submandibulaire et rétro-orbitaire, sous anesthésie au sévoflurane. Le porteur énumère six sources de stress, dont l’odeur du sang, et conclut qu’il s’agit de « gestes nécessaires pour l’expérimentation ». L’effectif tient à une arithmétique simple, soixante conditions à tester et six individus par sexe, que le RNT ne rapporte à aucune contrainte extérieure.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Le but de cette recherche est : 1- D’évaluer si d’autres transporteurs membranaires intestinaux que ceux déjà identifiés pourraient être impliqués dans le transport des vitamines liposolubles. Nous travaillerons plus particulièrement sur les protéines qui pourraient effluer les micronutriments lipidiques néo-absorbés de l’entérocyte vers la lumière intestinale. Nous utiliserons des inhibiteurs pharmacologiques spécifiques aux transporteurs cibles et des modèles de souris adaptés. 2- D’étudier l’effet de certains composés dit « antinutritionnels » naturellement présents dans l’alimentation (fibres, phytate, saponine et tannins) sur la biodisponibilité des micronutriments liposolubles.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Ce projet permettra d’enrichir les connaissances quant aux mécanismes d’absorption et aux interactions qui interviennent lors de l’ingestion des vitamines et micronutriments liposolubles. Etudier les interactions avec les composés antinutritionnels présents dans notre alimentation permettra de proposer de nouvelles approches pour concilier un régime plus végétalisé avec une absorption optimale en vitamines et caroténoïdes, ce qui est nécessaire pour le maintien de l’organisme en bonne santé.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Les animaux seront soumis à 3 prélèvements sanguins. La durée de chaque prélèvement sanguin est estimée à 5 minutes. Le gavage sera réalisé sur les animaux vigiles. La procédure de gavage est estimée à 2 minutes hors préparation de la seringue.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les nuisances attendues sur les animaux seront : 1) Stress lié à la manipulation pendant la pesée et changements de litière ; 2) Stress lié à la privation de nourriture pendant la nuit avant le gavage ; 3) Stress pendant le gavage ; 4) Stress lié à l’anesthésie avec sévoflurane ; 5) Stress pendant les 3 prélèvements sanguins submandibulaires et rétro-orbitaux ; 6) Stress lié à la perte de sang/ odeur du sang. Malheureusement il s’agit de gestes nécessaires pour l’expérimentation. Des effets sur la santé des animaux des inhibiteurs ou des antinutritionnels tels qu’ils seront administrés n’ont jamais été rapportés dans la littérature. Par ailleurs, la dose de composés antinutritionnels utilisés lors de ce projet sera celle d’un régime alimentaire : à ces doses, ces composés ne présentent pas d’effets indésirables sur la santé suite à une ingestion unique.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les animaux de cette procédure seront mis à mort afin de prélever les tissus d’intérêt qui seront ensuite étudiés (dosages en micronutriments).
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Les modèles in vitro (culture cellulaire, chambre d’Ussing) ne reproduisent pas la complexité biologique du tube digestif (mucus, mouvement, échange entre organes, présence d’un microbiote). Cependant, l’étude des différentes conditions (transporteurs et composés antinutritionnels) sera faite en fonction des résultats préliminaires obtenus sur une lignée cellulaire humaine qui permet de réaliser un screening de nos conditions.
2. Réduction
Ce projet est constitué de 60 conditions au maximum. Pour chacune de ces conditions, et compte tenu de la variabilité interindividuelle existant chez la souris et de la difficulté de la mise en place du protocole, des groupes de 6 individus par sexe sont nécessaires pour assurer la validité statistique du phénomène observé. Un nombre plus restreint d’animaux ne permettrait pas une finesse suffisante des résultats pour répondre à nos objectifs de recherche.
3. Raffinement
Les animaux seront hébergés en cage de 2-4, et l’environnement sera enrichi par la présence d’un igloo en plastique et de matériel de nidification (bandelettes de papier kraft). Le début des expérimentations aura lieu après 7 jours d’adaptation dans l’animalerie. L’enrichissement sera actualisé toutes les semaines afin d’apporter de la nouveauté aux souris (igloos, tubes plastiques, papier kraft, cellulose, bois, foin). Des conflits entre animaux au sein d’une même cage pourraient se produire et engendrer des blessures. Dans ce cas, l’animal blessé sera soigné et placé dans une cage individuelle permettant de garder des contacts visuels, olfactifs et auditifs avec ses congénères jusqu’à la fin du protocole. Les animaux auront accès ad libitum à la nourriture jusqu’au jour avant l’expérimentation et à l’eau jusqu’à la fin de l’expérimentation. Les souris seront observées 15 minutes après les procédures de gavage et prélèvements sanguins pour détecter des signes de douleur ou de détresse. L’apparence, l’abreuvement et alimentation ainsi que le comportement seront évalués grâce à une grille d’évaluation du bien-être adaptée au projet pendant la procédure et pendant la période d’adaptation. Toutes les procédures invasives (prélèvements sanguins rétro-orbitaux, prélèvement sanguin intracardiaque, dislocation cervicale) seront réalisées sous anesthésie générale (8% sévoflurane et débit d’oxygène = 1L/min, 5 min).
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Les expériences de biodisponibilité des micronutriments sont le plus souvent réalisées chez la souris, dont le système de digestion et d’absorption des micronutriments liposolubles est anatomiquement proche de celui de l’Homme. Les souris constituent un modèle in vivo de référence pour l’étude de l’absorption des vitamines. Les souris seront âgées de 6 à 16 semaines. Ces animaux correspondent donc à de jeunes adultes. Nous évitons à ce stade de développement l’ajout de paramètres confondants tels que le vieillissement. Les animaux seront utilisés avant 16 semaines et aucun phénotype utilisé n’est considéré comme dommageable.