Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2024-10-15 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-730674)
Les petits sont tués avant ou peu après la naissance, au stade embryonnaire, le jour de la mise bas ou sept jours plus tard, pour prélever leur cerveau. 198 souris vont être utilisées dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. Les femelles gestantes subissent une chirurgie de trente à quarante-cinq minutes sous anesthésie, au plus tard quatre jours avant la mise bas, pour électroporer dans l’utérus deux plasmides différents selon les embryons, ce qui permet au porteur de diviser par deux le nombre de femelles utilisées. Il indique que cette chirurgie peut entraîner douleur, infection, hypothermie et difficultés lors de la mise bas, et conclut que l’étude de la formation du cerveau « nécessite » l’utilisation d’animaux.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
L’objectif général de ce projet est de comprendre, gràce à la souris, l’origine de certaines malformations cérébrales qui ont lieu durant l’embryogenèse et conduisant à des troubles du comportement chez l’adulte (autisme).
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Une meilleure comprehension des mécanismes impliqués dans la migration, la maturation et l’activité des neurones de cortex. De nouveaux champs d’étude pour les neurosciences et les pathologies qui y sont associées (autisme).
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Une procédure chirurgicale sous anesthésie (durée de l’intervention 30-45min).
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Une chirurgie sur des femelles gestantes peut entrainer des complications à court terme (douleur, infection, hypothermie) et à long terme (difficultés lors de la mise bas).
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Mise à mort requise pour prelever le cerveau des animaux afin de réaliser des études histologique et electrophysiologique.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Ce projet s’intègre dans un projet plus global combinant différents travaux de recherche complémentaires allant de l’étude biochimique ou électrophysiologique au comportement. De nombreuses études « in-vitro » ont donc été effectuées au laboratoire sur des neurones en culture en amont de l’utilisation d’animaux pour limiter au maximum leur utilisation. Néanmoins, l’étude de la formation du cerveau nécessite l’utilisation d’animaux.
2. Réduction
Pour réduire de moitié le nombre de femelle gestante utilisée, nous avons choisi d’injecter deux plasmides par portées d’embryons. La moitié des embryons recevront le plasmide portant le gène muté et l’autre moitié le plasmide contrôle. Les embryons seront utilisés pour deux études : une étude histologique et une étude électrophysiologique des neurones du cortex.
3. Raffinement
Les souris bénéficieront d’une anesthésie générale (induction par un mélange isoflurane et d’un traitement analgésique pre/post-opératoire. Après l’acte chirurgical, les animaux sont observés sur 72h, deux fois par jour (matin et après-midi), y compris le week-end. Lors de ces observations, on vérifie son comportement, l’état de la plaie, que la souris est capable de s’alimenter, de se redresser, de reconstruire et entretenir son nid. Si un signe anormal est repéré, un des responsables du bien-être des animaux interviendra afin de l’examiner et prendre les décisions qui s’imposent (mise en place de mesures conservatoires, euthanasie). Le vétérinaire référent sera également contacté. Si l’animal ne présente aucun signe d’amélioration après mise en place des mesures, il sera alors mis à mort. La décision de mise à mort sera prise par le responsable du projet en concertation avec la vétérinaire, si le responsable du projet est injoignable la vétérinaire prendra seule cette décision.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Nous avons choisi d’utiliser la souris car l’étude du developpement du cortex cérébral necessite d’analyser un cerveau qui peut être comparé à celui de l’homme. Une majeure partie des études in-vitro ont été réalisées sur des neurones en culture provenant de cette même espèce et nous avons l’expertise de la technique chirurgicale (électroporation in-utero) chez la souris. Les animaux sont des femelles gestantes adulte. Le stade adulte est indispensable pour atteindre une maturité sexuelle indispensable à la mise en reproduction des futures femelles gestantes. La chirurgie est réalisée au plus tard 14.5 jours après l’accouplement, c’est-à-dire 4 jours avant la mise bas. Cette procédure a pour but de marquer les neurones du cortex durant leur migration afin de mieux comprendre le développement du cerveau des mammifères. Les embryons seront mis à mort soit au stade embryonnaire E17.5, à la naissance ou au stade post-natal P7. Ces trois stades nous permettent d’étudier, par histologie et electrophysiologie, la morphologie et l’activité des neurones au cours de leur developpement.