Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 20/08/2024
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-128294)
Reproducteurs d’au moins 90 jours, mis en croisement pour fournir les embryons et les larves d’autres projets, 5 280 poissons zèbres vont être utilisés dans une procédure impliquant un niveau de souffrance léger. Chacun perd 20 % de sa nageoire caudale, coupée sous anesthésie à la tricaïne, avec de la lidocaïne ajoutée à l’eau contre la douleur. Le porteur indique que la nageoire repousse en sept à dix jours et que le poisson nage correctement entre-temps. Le prélèvement sert à trier les individus, 2 400 porteurs de la mutation recherchée partant vers des projets ultérieurs, les 2 880 autres étant tués.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Permettre de déterminer le statut génétique des poissons adultes âgés d’au moins 90 jours de vie.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Le projet nous permet de conserver uniquement les individus de génotypes désirés et s’intègre dans la Réduction du nombre d’animaux dans les projets de recherche.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Prélèvement de 20% de la nageoire caudale sur animaux anesthésiés.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
La procédure est de classe légère. L’eau des poissons sera supplémentée de lidocaine, antalgique, pour diminuer la douleur et le stress de la procédure. Pendant 7-10 jours, le poisson nagera avec une nageoire caudale plus petite le temps que celle-ci régénère mais cela ne l’empêche pas de nager correctement ou de chercher sa nourriture.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les animaux porteurs de la mutation seront utilisés ultérieurement dans des projets scientifiques (n=2400), les animaux non porteurs de la mutation d’intérêt seront euthanasiés (n=2880).
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Le poisson zèbre est un modèle de choix pour l’analyse du développement précoce du système nerveux central et entérique car il permet une visualisation de ces organes au cours du développement embryonnaire et larvaire grâce à la transparence des embryons et larves et à la rapidité de son développement précoce. Le développement des organes et leurs fonctions sont assez similaires avec les organes humains, ce qui fait du poisson zèbre un organisme de choix. Nous travaillons sur la meilleure compréhension du développement d’organes qui communiquent entre eux (cerveau et intestin), il n’est donc pas possible de réaliser nos projets de recherche en utilisant des lignées cellulaires in vitro.
2. Réduction
Les animaux utilisés dans ce projet sont les reproducteurs qui seront mis en croisement pour obtenir les embryons et larves pour les études scientifiques. Le nombre d’animaux est maintenu le plus bas possible tout en maintenant un nombre d’individus suffisants (40 couples d’adultes par lignée) pour éviter une dérive génétique. Les larves et embryons issus des croisements peuvent être analysés au niveau de plusieurs organes (cerveau, intestin, nageoires, cartilage de la face) en même temps ce qui limite le nombre de reproducteurs nécessaires et donc le nombre de poissons à génotyper.
3. Raffinement
La dose de tricaine, anesthésique, a été validée par notre vétérinaire. La gestion de la douleur est également pris en charge par l’ajout de lidocaine, antalgique, dans la solution d’anesthésique avant la procédure, pendant la procédure de biopsie et ensuite pendant la phase de convalescence du poisson. Des publications récentes nous ont permis de choisir le meilleur antalgique et la dose à utiliser pour notre procédure. Au cours du projet, une veille bibliographique nous permettra de connaitre d’autres signes possibles de douleur ou d’angoisse chez le poisson et nous pourrons prendre des mesures de raffinement appropriées.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Pour réaliser des études de gènes impliqués dans les maladies développementales de l’enfant, il faut pouvoir suivre l’effet des mutations d’un gène donné sur le développement de l’organe atteint (dans notre cas le cerveau et l’intestin) et ce, dans sa globalité et dans son contexte d’interaction moléculaire avec les autres organes environnants. Ce type d’études ne peut donc se réaliser sur des lignées cellulaires in vitro. Le poisson zèbre est un modèle approprié pour nos études sur la fonction des gènes responsables de troubles du neurodéveloppement. Le poisson zèbre est un vertébré et possède des régions cérébrales identiques à celles de l’être humain. Il a un développement ex-utero, ce qui nous permet de réaliser l’ensemble de nos études sur des embryons et des larves âgées de moins de 5 jours de développement. Pour obtenir ces embryons et larves, nous avons besoin de reproducteurs, mâles et femelles, pour produire des oeufs fécondés. Ces reproducteurs sont des poissons adultes âgés de 90 jours. A ce stade, les nageoires caudales sont assez grandes pour procéder à une biopsie de 20% sans altérer le comportement du poisson adulte. Les 20% de cette nageoire caudale repousse en 7-10 jours.