Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 27/03/2025
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-178801)
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Ce projet a pour objectif de produire des souris utilisées comme modèles de l’hypophospahtémie liée à l’X appartenant à deux lignées très proches l’une de l’autre qui différent par leur fond génétique : HypDuk-BALB/c et HypDuk-B6. On parle de lignées congéniques. Chez les patients, l’ hypophosphatémie liée à l’X est une maladie génétique héréditaire qui se manifeste par du rachitisme pendant la croissance et des atteintes musculo-squlettiques chez l’adulte. Elle est due à une mutation sur un gène dit « phex » qui fait que lorsque cette anomalie génétique et présente, elle se traduit par un défaut de minéralisation elle-même liée à une perte de phosphate au niveau des reins et une baisse de phosphate dans le sang. Les hommes et les femmes sont tous deux affectés par cette maladie car l’anomalie génétique est dominante. Les souris prises comme modèles de cette maladie dans ce projet ont un taux de phosphate dans le sang faible mais qui ne se traduit pas par des atteintes osseuses comme chez les patients. Ainsi, bien que le gène altéré est dominant chez les patients et affecte les hommes et les femmes, les femelles souris dites hétérozygotes qui possèdent un exemplaire du gène muté et un exemplaire du gène sain expriment peu ou pas d’anomalie . De fait, seuls les mâles portant la mutation sur le chromosome sexuel seront utilisés comme modèle d’étude et de thérapie génique de la maladie.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Cette demande s’inscrit dans le projet de développement d’une thérapie génique pour l’hypophosphatémie liée à l’X. Ces procédures justifient la production des colonies HypDuk-Balb/c et HypDuk-B6 et leur gestion.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Les animaux subiront une biopsie de moins de 2 mm de diamètre à l’oreille pour le génotypage. Une paire de ciseaux fins sera utilisée à cet effet qui sera désinfectée à l’alcool et rincée à l’eau stérile entre chaque prélèvement. Cet acte est exécuté par du personnel zootechnique entraîné et ne nécessite que quelques secondes.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Le prélèvement à l’oreille réalisé à des fins de génotypage est le seul effet indésirable du projet. Il induit une douleur légère et passagère.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
– 240 animaux seront inclus dans des projets scientifiques de thérapie génique pour traiter l’hypophosphatémie – 150 animaux seront gardés en vie pour les besoins de la reproduction et la gestion des élevages – 710 animaux seront euthanasiés car ne présentant pas un génotype d’intérêt pour l’expérimentation ou la reproduction.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Dans le cadre du projet de développement d’une thérapie génique pour le traitement de l’hypophosphatémie liée au chromosome sexuel X, nous avons nécessairement besoin d’utiliser le modèle animal car: i) Nous mesurons des paramètres biochimiques dans les fluides biologiques tels que le taux de phosphate dans le sang ; ii) Nos vecteurs de thérapie génique agissent simultanément dans différents compartiments sur le foie, les reins, et les os ; iii) Nous avons besoin d’un organisme corps entier pour évaluer les réponses de l’organisme à notre traitement comme les réponses immunitaires dirigées contre nos vecteurs et qui peuvent en affecter l’efficacité. Il n’existe donc pas de remplacement possible aux prélèvements de tissus et de sang à partir desquels nous procéderons à des explorations fonctionnelles dans le cadre de projets de thérapie génique pour le traitement de l’hypophosphatémie liée à l’X.
2. Réduction
La production des 2 lignées de souris objet de ce projet repose sur des croisements spécifiques et des stratégies d’accouplement en sorte d’adapter au plus juste la production aux besoins expérimentaux des projets de thérapie génique. Notre équipe dispose d’un historique lui permettant d’ajuster le nombre d’accouplement en tant que de besoin. A l’origine de cet historique, le nombre de couples avait été mis en place à l’aide d’un outil qui relie le nombre de reproducteurs nécessaires aux objectifs de production.
3. Raffinement
Pour la biopsie de l’oreille à des fins de génotypage, les souris vigiles seront maintenues en contention (manuelle) par du personnel zootechnique entrainé qui possède une parfaite maitrise du geste de manière à prélever moins de 2 mm de tissu sans saignement. Lorsque l’animal est remis dans sa cage, il est surveillé pendant au moins 5 minutes pour détecter un éventuel comportement qui traduirait une gêne occasionnée par l’acte.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
A notre connaissance, les seuls modèles animaux mimant l’hypophosphatémie liée à l’X sont les deux modèles murins objets de cette demande. Les animaux sont prélevés à 7 jours.