Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 09/10/2023
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-510946)
895 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. Le porteur ligature ou pose un manchon sur la carotide et la jugulaire sous anesthésie, pour étudier la relation entre veine et artère lors du remodelage artériel, y compris dans un modèle d’athérosclérose. Il décrit des interventions d’une trentaine de minutes qu’il qualifie de « peu invasives » et prévoit d’écarter et de tuer les animaux dont la souffrance ne s’améliore pas sous 24 heures. Il présente ce travail fondamental comme une piste vers de nouvelles cibles thérapeutiques cardiovasculaires et affirme qu’aucune alternative ne permet d’étudier ces interactions.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Le remodelage artériel est un mécanisme d’adaptation de l’artère en réponse à un état physiologique ou pathologique. Au cours des expérimentations précédentes, nous avons montré l’existence d’une relation entre la veine et l’artère lors du remodelage artériel. Cette relation a été mise en évidence dans un modèle de remodelage physiologique par variation du flux artériel, mais également dans un modèle pathologique d’athérosclérose (maladie des grosses artères conduisant à un dépôt de graisse appelé athérome). Le signal conduisant au remodelage de l’artère serait transmis par l’intermédiaire du système immunitaire depuis la veine vers l’artère en passant par le tissu adipeux ou fibrotique. Nous devons compléter ces premiers résultats par l’identification des acteurs de la mise en place de cette relation. Pour cela, nous allons réaliser une étude des variations d’expression transcriptomique à partir des jugulaires et carotides lors de la mise en place du remodelage carotidien dans les 2 modèles expérimentaux physiologique et pathologique. Ensuite, nous allons mettre en évidence la localisation des acteurs moléculaires identifiés. Enfin, nous identifierons les facteurs circulants impliqués dans l’activation de la composante veineuse. Concernant le remodelage artériel pathologique d’athérosclérose, nous avons déjà montré qu’en inhibant la composante veineuse, le dépôt de plaque d’athérome était plus faible au niveau de la carotide. Nous devons montrer que c’est un phénomène local et non global. Pour cela, nous réaliserons une observation histologique à distance des carotides (l’aorte) pour montrer la persistance des plaques d’athérome sur ces sites alors qu’elles seront fortement diminuées sur les carotides.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Le rôle de la veine et du tissu périphérique dans le remodelage artériel est actuellement très peu connu. L’intérêt est donc dans un premier temps, de démontrer la place importante de ces tissus dans la physiologie artérielle. De plus, identifier les acteurs moléculaires et cellulaires impliqués dans le remodelage pathologique va permettre de proposer des cibles thérapeutiques cardio-vasculaires et de proposer la veine et non plus uniquement l’artère comme cible thérapeutique.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
– Ligature de la carotide et jugulaire : geste réalisé une fois par animal sous anesthésie générale couplée à une analgésie, avec une durée d’intervention de 30 minutes. 277 souris sont concernées. – Pose d’un manchon sur la carotide et la jugulaire ou ligature de la jugulaire : geste réalisé une fois par animal sous anesthésie générale couplée à une analgésie avec une durée d’intervention de 30 minutes. 456 souris sont concernées.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les procédures opératoires sont peu invasives et n’entraînent pas de douleurs importantes. Un protocole d’analgésie est mis en place. Le modèle d’athérosclérose entraîne une prise de poids mais n’entraîne pas d’effets secondaires délétères sur le temps du protocole limité à 10 semaines maximum selon l’objectif technique.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les animaux sont systématiquement mise à mort afin de récupérer les tissus d’intérêts pour analyse.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Aucune alternative à l’utilisation d’animaux vivants ne permet d’étudier les mécanismes d’interaction entre la veine, l’artère et le tissu périphérique dans un contexte physiologique et encore moins pathologique. Les modèles prévus sont des modèles standards et bien documentés dont l’impact sur l’animal est bien maîtrisé.
2. Réduction
Le nombre d’animaux pour les expériences ont été précisément définies à l’aide d’un logiciel pour avoir assez de puissance statistique lors de l’étude. Des tests statistiques sont réalisés au cours du projet . Concernant l’étude transcriptomique de l’ensemble des transcrits, le nombre d’animaux inclus est conseillé par la plateforme technique réalisant l’expérience. Une procedure d’analyse est assurée par la plateforme pour obtenir une analyse statistique adéquat. Il est à noter que le choix de réaliser la technique de séquençage haut-débit plutôt que l’étude de cibles prédéfinies permet d’observer plus de cibles avec moins d’échantillons et donc moins d’animaux.
3. Raffinement
Pour les souris ayant été opérées, la réponse nociceptive des animaux sera régulièrement testée en cours d’intervention. Les éventuelles modifications du rythme cardiaque et respiratoire seront observées pour évaluer la souffrance, la détresse et l’inconfort des animaux pendant l’intervention chirurgicale. La douleur de l’animal sera évaluée quotidiennement selon une grille d’évaluation de la douleur. Nous nous intéressons à un processus inflammatoire sur un temps très court, nous surveillerons étroitement les animaux le jour de la chirurgie (ajout d’une visite en fin de journée) puis le lendemain (matin puis après-midi). En cas de souffrance constatée, l’animal sera isolé et mis à mort. Seules les souris prévues pour les temps longs à J56 post chirurgie pourront recevoir une nouvelle dose d’analgésique. Si aucune amélioration n’est constatée rapidement (24h maxi), l’animal sera écarté et mis à mort. Pour toutes les procédures, les souris seront surveillées quotidiennement afin de détecter d’éventuels inconforts.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Les souris génétiquement modifiées représentent des outils spécifiques dans la plupart des domaines de la recherche médicale. La souris est un excellent modèle pour la maladie humaine, l’organisation de son ADN et l’expression de ses gènes sont très similaires à celles de l’homme et peuvent être modifier pour se rapprocher au mieux de la pathologie recherchée. L’ensemble des souris utilisées seront des souris adultes âgées entre 3 et 6 mois, âge qui permet de standardiser la taille attendues des vaisseaux et qui permet un développement optimal du remodelage artériel.