Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 18/03/2025
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-194287)
Une minute d’administration par le nez, une seule fois, pour chacune des 200 souris qui vont être utilisées dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger. Elles sont infectées par une souche atténuée de salmonelle qui multiplie dans leurs poumons des lymphocytes rares, puis tuées pour que leurs organes soient collectés et ces cellules cultivées in vitro. Le porteur indique que l’infection n’entraîne pas de mortalité et provoque une perte de poids d’environ 10 % le premier jour. La finalité immédiate reste de produire assez de cellules pour des expériences en éprouvette, les applications thérapeutiques annoncées étant renvoyées au long terme.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Les lymphocytes MAIT (pour Mucosal Associated Invariant T) sont des acteurs majeurs de l’immunité en particulier dans les organes barrières comme les poumons. Selon le contexte, les lymphocytes MAIT peuvent exercer des fonctions anti-bactériennes, de réparation tissulaire ou d’inhibition des autres lymphocytes. Les gènes contrôlant le type de réponse produite par les lymphocytes MAIT sont inconnus. De manière générale, la biologie des MAIT reste relativement mal comprise du fait de leur rareté en l’absence d’infection. Pour contourner ce problème, un modèle d’infection intra-nasale par une souche atténuée de salmonelle a été mis en place par plusieurs équipes. L’infection est bégnine pour la souris mais induit une forte expansion des lymphocytes MAIT des poumons, qui peuvent alors être isolés et caractérisés in vitro. Le but de notre projet est d’identifier les mécanismes contrôlant les fonctions des lymphocytes MAIT des poumons. A long terme, l’objectif est de pouvoir manipuler à façon les lymphocytes MAIT afin de stimuler ou réduire l’inflammation ou la réparation des poumons.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Ce projet permettra d’obtenir des lymphocytes MAIT en nombres suffisants pour des études de fonction in vitro, permettant de déterminer les mécanismes qui controllent la fonction des lymphocytes MAIT. Identifier des gènes controllant la fonction des lymphocytes MAIT peut offrir de nouvelles opportunités thérapeutiques pour inhiber, augmenter ou orienter ces cellules selon le bénéfice souhaité.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Administration (1 fois) par voie intranasale sur animaux vigils (1 minute par administration).
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
La procédure n’implique aucune injection. L’infection intra-nasale par la souche atténuée de salmonelle n’induit aucune mortalité, mais peut conduire à une perte de poids d’environ 10% le premier jour suivi d’une reprise de poids progressive.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les animaux sont euthanasiés pour des analyses post-mortem : collecte des organes, analyses par cytométrie en flux et cultures in vitro.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Trois protocoles d’expansion in vitro des lymphocytes MAIT, faisant varier les conditions de stimulation, ont été testés mais n’ont pas donné de résultat satisfaisant. Il n’existe actuellement aucune méthode alternative à l’expérimentation animale permettant d’étudier les lymphocytes MAIT du poumon.
2. Réduction
Le nombre des animaux a été réduit au maximum tout en gardant un effectif convenable pour réaliser une étude statistique fiable, condition nécessaire pour une interprétation biologique des résultats. Pour les échantillons indépendants, le test de Mann-Whitney sera appliqué. Pour les échantillons appariés, le test de Wilcoxon sera utilisé. Pour les comparaisons de plus de 2 groupes, les tests non-paramétriques de Kruskal-Wallis (échantillons indépendants) ou de Friedman (échantillons appariés) seront utilisés avec le test de comparaison de Dunn pour comparer chaque groupe par rapport à un groupe contrôle.
3. Raffinement
Les inoculations seront réalisées dans une salle dédiée, différente de celle où seront logés les animaux et où se déroulent d’autres phases d’analyses afin d’éviter tout stress supplémentaire à l’animal. Les animaux seront suivis quotidiennement afin d’assurer leur bien-être et les expérimentations seront arrêtées avant la souffrance des animaux. Une grille de score adaptée sera utilisée pour évaluer de façon objective l’état des animaux et des points limites ont été définis.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
La souris est l’espèce dans laquelle les lymphocytes MAIT ont été largement étudiés (en dehors de l’humain) et pour laquelle nous disposons d’outils moléculaires et génétiques permettant leur étude. La souris est également le seul modèle pour lequel un protocol d’expansion in vivo des lymphocytes MAIT a été décrit. -Les souris seront utilisées à l’âge adulte. -Nous utiliserons des souris adultes car nous souhaitons que les souris aient un système immunitaire matures.