Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 23/05/2023
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-571471)
400 souris vont être utilisées dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger, la plupart tuées à l’issue et une partie réutilisée pour des formations internes du personnel. Des femelles gestantes mettent bas, puis leurs petits reçoivent des injections dans l’abdomen avant d’être mis à mort vers quinze jours de vie pour prélever leur cerveau et en faire des tranches, afin de tester des candidats médicaments contre des maladies du système nerveux. Le porteur indique que sur une portée d’environ dix petits, six servent au projet et les autres sont réutilisés ou tués, les mères pouvant aussi être réutilisées pour des formations. Il affirme que l’animal est « indispensable » à la réalisation de tranches de cerveau que les organoïdes ne peuvent remplacer.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Ce projet a pour but de réaliser des etudes electrophysiologiques sur tranches de cerveaux de souriceaux pour etudier l’activité neuronale chez les nouveaux nés en condition saine dans un premier temps et en condition pathologique. En effet, les tests d’efficacité de candidats médicament dans des pathologies du système nerveux central (comme la maladie d’Alzheimer, l’autisme, la maladie de Parkinson et les accidents vasculaires cérébraux) est une étape clé dans le développement d’un candidat médicament neuro-actif. Pour étudier un potentiel effet thérapeutique d’un candidat médicament, les souriceaux recevront le traitement par voie intrapéritoneale pendant plusieurs jours avant d’être mis à mort pour la réalisation d’etudes électrophysiologiques sur tranches de cerveau. Pour ce projet, des souris gestantes seront hebergées jusqu’à la mise bas des souriceaux. Les enregistrements en patch clamp sur tranches se réaliseront à differents temps sur les 15 jours post naissance (P15) après le prélèvement des cerveaux des souriceaux. Les enregistrements en patch clamp sur tranches se réalisent à 15 jours post naissance (P15) car le fonctionnement des réseaux du striatum en développement est étudié et non pas le fonctionnement de ces réseaux chez l’adulte. Plus précisement, le but étant d’étudier les effets d’un traitement administré dès la naissance qui modifie le développement des réseaux GABAergiques à P15. Pour cela, l’effet de l’injection du véhicule et celui de l’injection du candidat médicament dans des conditions saines ou pathologique sera etudié en comparaison.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Apres avoir organisé la réception et l’hébergement des souris gestantes dans une animalerie qui leur est dédiée, les souris gestantes mettront bas. Apres 4 jours de vie, des admistrations intrapéritonéales sur un ou plusieurs jours seront réalisées avec un candidat medicament ou le véhicule pour etudier leur effet sur l’activité des neurones. Les enregistrements en patch clamp sur tranches de cerveaux se réaliseront à differents temps sur les 15 jours post naissance (P15) apres le prélèvement des cerveaux des souriceaux.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Les principaux stress sont representés par le transport du fournisseur jusqu’au laboratoire d’accueil pour la souris gestante ainsi que le fait qu’elle soit isolée pour la préparation de la mise bas. A la fin du protocole, si la souris qui a mis bas ne peut etre réutilisée elle sera mise a mort. Pour les nouveaux nés, quelques jours apres leur naissance, les souriceaux vont recevoir une administration intraperitonéale (traitement aigu ou sur quelques jours). Le temps de l’injection IP, le souriceaux est retiré de la mère ce qui represente un stress de courte durée et la douleur potentielle d’une injection IP doit etre prise en compte. Une injection IP par jour sera réalisée au maximum. Les souriceaux qui seront utilisés pour le projet seront mis à mort pour récuperer le cerveau et les souriceaux qui ne seront pas utilisés pour le projet seront soit réutilisés pour des formations internes soit mis à mort.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Pour les souriceaux, les nuisances attendues sont liées aux administration intrapéritonéale (traitement aigu ou sur quelques jours). Le temps de l’injection, le souriceau est retiré de la mère, ce qui représente un stress de courte durée et la douleur legère de courte durée due à l’injection du candidat medicament ou du vehicule doivent etre pris en compte.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les souriceaux qui seront utilisés pour le projet seront mis à mort pour récupérer le cerveau et les souriceaux qui ne seront pas utilisés pour le projet seront soit réutilisés une fois l’age adulte atteint pour des formations internes du personnel à des actes techniques soit mis à mort. En moyenne, sur une portée de 10 souriceaux, 6 seront utilisés pour le projet et les 4 souriceaux restants seront soit réutilisés si possible, soit mis à mort. Les mères pourront etre également soit réutilisés pour des formations internes du personnel à des actes techniques soit mises à mort à la fin du projet.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
L’utilisation des animaux est indispensable à la réalisation de tranches de cerveaux. Ces modèles de tranches de cerveaux seront justement utilisées en première intention pour les tests d’efficacité de candidat médicament ainsi que pour l’étude de leur mécanisme d’action. L’utilisation de modèles de tranches de cerveaux ex vivo est ne peut pas etre remplacer par des organoides cerebraux car l’organisation des réseaux neuronaux GABAergiques à P15 est precisement étudiée.
2. Réduction
Le but d’utiliser les modèles de tranches de cerveaux est de réaliser des test d’efficacité et d’etudier les mécanismes d’action des molécules testées. Le but même étant de réduire les tests d’efficacité sur les modèles in vivo. Le laboratoire N° 2 calcule le nombre nécessaire de mèes porteuses qui donneront naissance à 6 à 8 souriceaux en moyenne pour la réalisation de tranches de cerveaux à posteriori. Les etudes statistiques seront effectuées par le laboratoire N°2. Un lot expérimental (test de deux molécules) inclut au minimum 5 souris gestantes et peut aller jusqu’à 8 femelles gestantes compte tenu du nombre de neurones à enregistrer provenant de portées différentes. Il est envisagé de tester environ 10 molécules. Cela implique les portées de N=25 à 40 souris gestantes soit un maximum de 400 souriceaux pour 10 molécules testées.
3. Raffinement
La réception, l’hébergement et la mise à mort des souris ayant mis bas sont effectués par un personnel compétent et entraîné. Un enrichissement est mis à disposition des femelles gestantes (rondin de bois, coton pour le nidification, petite maison pour les souris…). Une importance particulière est portée au suivi des animaux pour prévenir et remédier à l’apparition de douleur ou de mal-être. Le matériel utilisé est adapté à l’espèce. La mise à mort est réalisée par dislocation après une anesthésie gazeuse dans une pièce séparée de la pièce d’hébergement. Les souris gestantes sont hébergées dans une pièce ou armoire ventilée qui leur est dédiée.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Les souris sont couramment utilisés pour etudier certains mecanismes neurochimiques qui sont comparables a ceux retrouvés chez l’Homme. L’utilisation de la souris présente également l’avantage d’avoir accés dans des futurs projets à des modèles transgeniques de pathologies du système nerveux central. Par ailleurs, les techniques d’enregistrements électrophysiologiques sur tranches sont classiquement réalisées chez le rongeur et maitrisées par le laboratoire N°2. Pour ce projet, nous utilisons les portées de souris gestantes Swiss adultes pour prélever les cerveaux des souriceaux et réaliser tranches de 4 à 15jours apres la naissance. Pour ce projet, l’etude de l’activité neuronale se réalisent à 15 jours post naissance (P15). L’âge de P15 est choisi car le fonctionnement des réseaux neuronaux en développement est étudié et non pas le fonctionnement de ces réseaux chez l’adulte. Plus précisement, le but étant d’étudier les effets d’un traitement administré dès la naissance qui modifie le développement des réseaux neuronaux specifiques impliqués dans des pathologies du système nerveux central à P15. Pour cela, l’effet de l’injection du véhicule et celui de l’injection du candidat médicament dans des conditions saines, en premier lieu, et pathologique dans un futur projet sera etudié en comparaison.