Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 12/07/2024
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-833646)
Une injection intraveineuse pratiquée à proximité de l’œil, avec un risque d’hémorragie ou d’atteinte oculaire, puis jusqu’à sept prises de sang mensuelles sous anesthésie générale : une partie des 1 350 souris de ce projet suit ce protocole, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger à modéré. Les autres servent à l’élevage de la lignée et sont prélevées d’un bout de queue entre sept et dix jours pour génotypage. Il s’agit de tester une thérapie génique contre la leucodystrophie métachromatique, une atteinte grave de la gaine de myéline. Le porteur indique que les souris développent le phénotype dommageable à partir de dix-huit mois et qu’il ne le prend pas en compte puisque toutes seront tuées avant cet âge, celles de bon génotype qui échappent à ce projet passant dans d’autres travaux du laboratoire.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
L’objectif du projet sera d’établir un élevage de souris d’une lignée modèle d’une atteinte grave de la gaine de myeline (leucodystrophie métachromatique) pour ensuite évaluer l’effet thérapeutique d’une approche de thérapie génique sur cette pathologie chez ces animaux modèles.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Le bénéfice du projet sera d’établir la preuve de concept de l’efficacité de nouvelles thérapies pour la leucodystrophie métachromatique afin de proposer de nouvelles pistes de traitements chez l’Homme et un essai de phase I/II (environ 150 patients par an en France).
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Dans le cadre de l’élevage pour obtenir nos lots expérimentaux il sera nécessaire de réaliser un prélèvement de l’extrémité de la queue une fois sur animal vigile entre 7 et 10 jours d’âge (durée 1 minute par animal environ), pour connaitre le patrimoine génétique de nos animaux. – Une partie des animaux auront une injection intraveineuse (durée 5 min) sous anesthésie générale suivie de prises de sang mensuelles sous anesthésie générale (maximum 7 et durée 2 minutes) associée à une injection sous cutanée de sérum physiologique. Les animaux seront euthanasiés par une méthode réglementaire.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les effets indésirables possibles sont : – une légère et brève douleur au moment du prélèvement de l’extrémité distale de la queue pour le génotypage – un risque cardio-respiratoire et hypothermique pris en charge durant l’anesthésie – Légère douleur pour la prise de sang (picotement) – un stress de l’animal lors des contentions. – Une légère douleur liée à la piqure de l’aiguille suite à l’injection intraveineuse (durée 5 mn, sous anesthésie générale) – un risque rare d’hémorragie ou d’atteinte oculaire ou d’infection suite à l’injection intraveineuse réalisée à proximité de l’oeil . Les animaux développent un phénotype dommageable à partir de 18 mois mais non considéré ici puisqu’ils seront tous euthanasié avant cet âge.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
En fin de procédure tous les animaux injectés seront euthanasiés, car les prélèvements et analyses (histologique et biochimique) sont nécessaires en post-mortem pour recueillir nos données d’efficacité. Les animaux d’élevage seront maintenus au cours du projet jusqu’à l’âge de 8 mois maximum. Les animaux non porteurs des genotypes d’intérêt seront euthanasié. Les autres animaux de génotype souhaité seront en utilisation continue dans nos autres projets de recherche.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
À l’heure actuelle il n’existe pas de modèle In vitro ou de système cellulaire pour étudier la biodistribution et l’expression des thérapie génique dans l’ensemble de l’organisme. Cet organisme doit être comparable à la complexité que l’on retrouve chez l’Homme. Choisir la souris et notamment le modèle murin de la pathologie permet de collecter des données cruciales avant de passer chez le gros animal puis l’Homme pour application clinique.
2. Réduction
Nous limitons au maximum le nombre d’animaux par groupe de façon à obtenir des résultats fiables. Compte tenu de la littérature et des effets attendus, un test de puissance statistique a été utilisé pour déterminer le nombre minimum d’animaux nécessaires. De ce fait un nombre de 15 souris par groupe a été choisi, ce qui va nous permettre de limiter la variabilité inter-animale et inter-groupe, et de réaliser des tests statistiques fiables. Un nombre total maximal de 1350 souris sera produit au cours de ce projet pour nos permettre d’évaluer l’effet thérapeutique de notre approche, de renouveler nos reproducteurs et de générer les animaux pour nos autres projets de recherche.
3. Raffinement
Dans la réalisation de ce projet, La procédure a été mise en oeuvre afin de permettre une interprétation fiable des résultats dans le respect du bien-être animal en limitant au maximum la douleur et le stress. Les conditions d’hébergement sont conformes à la réglementation.. En cours de procédure une attention particulière est donnée à nos animaux afin de garantir leur bien-être grâce à une surveillance quotidienne (points limites) et de soins adaptés. Les animaux auront accès à l’eau et à la nourriture (adaptée à leur stade physiologique) à volonté. Ils bénéficieront d’un enrichissement réglementaire adapté à l’espèce. Les animaux d’etude seront hébergés par 3 à 5 souris par cage ventilée au maximum, si nécessaire en cas d’agressivité de mâles les animaux seront séparés ou isolés. Un animal peut se retrouver seul lorsqu’il est le dernier animal de la cage et qu’aucun regroupement n’est possible (sexe, âge) avec des maisonnettes rajoutées dans ce cas en plus de l’enrichissement classique. Pour l’élevage, nos souris seront en trio. L’injection intraveineuse et les prises de sang sont faites sous anesthésie pour éviter tout stress de l’animal. Au moment de l’euthanasie, un sédatif sera administré à l’animal avant d’injecter le composé euthanasiant. La lignée peut présenter un phénotype dommageable mais nos animaux seront euthanasiés avant sa manifestation. Une période d’acclimatation de 7 jours est réalisée pour les animaux provenant d’élevage extérieur.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Nous utilisons pour ce projet le modèle de souris génétiquement modifiées qui reproduit le phénotype présent chez l’Homme et nous permet donc d’évaluer l’effet thérapeutique de notre approche. Pour l’élevage, les animaux seront mis en accouplement à partir de l’âge de 2 mois environ jusqu’à l’âge de 8 mois. Les petits produits seront prélevés d’un fragment de queue à l’âge de 7 à 10 jours pour connaitre leur patrimoine génétique. Pour l’évaluation de notre thérapie génique, les souris sont utilisées à partir de l’âge de 6 mois minimum et jusqu’à l’âge de 15 mois maximum. A cet âge les animaux présentent des atteintes tissulaires au niveau du cerveau, ceci nous permettant de suivre l’efficacité de notre thérapie à différents stades de la progression de la pathologie chez notre modèle de souris.