Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 28/08/2025
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-443758)
32 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. Deux injections espacées de 24 heures déclenchent une mutation ciblée, puis une micropompe est implantée sous la peau sous anesthésie pour diffuser en continu une substance qui imite le stress chronique, et quatorze jours plus tard des cellules de cancer de la peau sont injectées dans la veine de la queue. L’objectif est de suivre pendant deux semaines la formation de métastases pulmonaires, la mise à mort de toutes les souris étant imposée par les tumeurs développées. Le porteur écrit que l’implantation de la pompe ne devrait générer aucune souffrance, et affirme que l’étude des phénomènes métastatiques « nécessite » un modèle in vivo.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Le but de ce projet est de découvrir comment les vaisseaux sanguins influent sur la croissance des tumeurs. Nous voulons en particulier comprendre comment le corps réagit au stress constant et comment cela peut affecter la formation de tumeurs secondaires (dans d’autres organes ici les poumons) à distance du site primaire d’une tumeur (dans un organe ici la peau) lors du phénomène de métastase cancéreuse. Des recherches antérieures ont montré qu’une protéine activée lors d’un stress continu induit la production d’une substance chimique dans la paroi interne des vaisseaux sanguins. L’objectif de notre travail est de comprendre comment cette modification influence l’expression des gènes des cellules des vaisseaux sanguins et facilite la dissémination des cellules tumorales sur le site secondaire de la circulation vers l’organe métastasé. Pour mener cette étude, nous allons utiliser des souris génétiquement modifiées qui ne produisent pas la Cxcl12 spécifiquement dans leurs cellules de la paroi interne des vaisseaux sanguins. Nous allons également utiliser une forme de cancer de la peau très vascularisée comme modèle de tumeur primaire. Pour simuler le stress constant, nous allons implanter des mini-pompes dans ces souris, délivrant une substance qui imite le stress. Au cours de nos recherches, nous allons examiner le développement de tumeurs secondaires pulmonaires, ainsi que les changements dans leur vascularisation, sur deux semaines.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Étant donné la disponibilité d’antagonistes situés sur les parois des vaisseaux qui se comportent déjà bien pour le traitement chez l’homme, les résultats issus de cette étude pourraient être facilement transférés pour des thérapies complémentaires du cancer.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Nous soumettrons nos groupes de souris à deux injections d’une substance permettant de générer la mutation specifique espacées de 24h. Ces gestes techniques réalisés par du personnel compétent et expérimenté sont réalisés en quelques secondes. Les souris qui ne produiront pas la substance chimique spécifiquement dans leurs les cellules de la paroi interne des vaisseaux sanguins et les souris contrôles la produisant seront soumises 6 jours plus tard à une implantation d’une micropompe sous la peau réalisée sous anesthésie qui durera au maximum 5 minutes. Quatorze jours après une implantation réussie, les souris recevront en intraveineuse dans la veine caudale des cellules de cancer de la peau ce geste réalisé par du personnel compétant et expérimenté n’excédera pas 1 minute. L’implantation de la micropompe sera accompagnée d’un traitement analgésique préopératoire en sous cutané.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les souris seront soumises à des manipulations de courte durée lors du nettoyage des cages et des pesées occasionnelles qui peuvent engendrer un léger stress. Les génotypésdes animaux seront determiner par extraction d’ADN à partir de follicles pileux réalisées sur souriceaux de 21 jours. Ce geste n’engendre aucune douleur à cet âge. L’implantation de la micropompe en sous cutané sera réalisés sous anesthésie et avec un traitement préopératoire d’antalgique et ne devraient générer aucune souffrance chez les souris. Il existe un risque minime de cicatrisation altérée au niveau du site chirurgical d’implantation. La formation de métastases, c’est-à-dire de tumeurs secondaires à distance de la tumeur primaire facilitées par la dissémination dans la circulation sanguine, sera examinée au bout d’un temps court au niveau des poumons. L’expérience accumulée sur ces modèles a montré que vu le temps d’utilisation pour observer des métastases pulmonaires est très inférieur au temps permettant la croissance de tumeurs sous-cutanées, et que la souffrance des animaux est minimisée.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les tumeurs développées chez les souris exigent que toutes les souris soient mis à mort à la fin des expériences.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
L’étude de la contribution de la circulation sanguine et de l’extravasation des cellules tumorales depuis les vaisseaux et donc des phénomènes métastatiques à distance de la tumeur primaire, nécessite d’utiliser un modèle in vivo.
2. Réduction
L’utilisation de micro-pompes micro-osmotiques permet de limiter le stress des animaux et d’éviter des traitements trop invasifs. Cela réduit aussi le risque que certains animaux meurent à cause du stress. Le nombre d’animaux nécessaires pour l’étude a été calculé grâce à un test statistique, afin de garantir des résultats fiables tout en limitant leur utilisation.
3. Raffinement
Les animaux seront manipulés par du personnel expérimenté. L’implantation sous-cutanée de micro-pompes réduit considérablement le stress lié à la manipulation des animaux (par exemple, aucune injection quotidienne n’est nécessaire). Le stress des animaux est réduit à un niveau minimum. Toutes les mesures seront prises pour minimiser le degré de souffrance des animaux, comme décrit dans la grille de score. L’anesthésie et l’analgésie seront assurées pendant l’implantation de la pompe osmotique en sous cutané. La douleur ou la souffrance des animaux pendant l’induction de la tumeur peut être maintenue à un niveau modéré grâce à des mesures adaptées prises en concertation avec la SBEA (Structure chargée du Bien-Etre Animal; Conseille le personnel d’institute sur des questions relatives au bien-être des animaux) et le vétérinaire référent. La mise en place de points limites précoces, prédictifs et adaptés basés sur une observation quotidienne des animaux (apparence de l’animal, évolution du poids, modifications du comportement, respiration, aspect de la cicatrice au niveau du site d’implantation de la micropompe, mobilité, croissance d’une tumeur cutanée) au cours de la procédure permettra de prendre les mesures adéquates pour limiter au maximum la douleur, la souffrance et le stress des animaux. L’utilisation d’analgésiques sera également proposée lors de l’atteinte de certains points limites.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Pour obtenir des données sur la fonction et la contribution spécifique du facteur produit par les cellules de la paroi des vaisseaux sanguins dans la progression tumorale (ici la métastase de la tumeur primaire dans des organes secondaires), le modèle murin est particulièrement approprié. En effet les modèles de formation des tumors et de stress chronique utilisés sont bien établis chez la souris. Toutes les lignées de souris étant consanguines sur un fond génétique stable, elles permettent de futurs croisements entre les lignées et des implantations de tumeurs dérivées de souris de même fond génétique que les souris receveuses. Le taux d’échec de l’implantation de tumeurs est dès lors minime. En raison de la comparaison avec l’évolution de la progression tumorale chez l’homme, ce projet sera réalisé sur des souris adultes âgées de 9 à 15 semaines.