Lapins

40 lapins vont être utilisés, puis réutilisés dans d'autres projets, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger à modéré. Ils subissent des prélèvements de sang répétés sur animal vigile, une anesthésie suivie d'une chirurgie, une vaccination, un transport et des tests comportementaux en enclos face à un objet et une personne inconnus. Le porteur teste une phéromone de synthèse censée apaiser le lapin dans des situations stressantes, un produit déjà commercialisé. Il indique que l'étude, portant sur le comportement et la physiologie, doit porter sur des animaux vivants.

Objectifs

Les lapins sont souvent confrontés à des situations stressantes. Le stress exerce des effets qui réduisent la qualité de vie des lapins, pouvant sur le long terme entrainer des problèmes de santé ou des troubles du comportement. Les facteurs de stress potentiels comprennent la manipulation et les stimuli courants qui provoquent la peur. Peu de remèdes sont aujourd’hui disponibles pour aider les lapins à faire face aux différents défis qui pourraient perturber leur bien-être. La copie synthétique de la phéromone maternelle apaisante du lapin (RAP = Rabbit Appeasing Pheromone) reproduit la composition de la substance originale produite par la lapine lors de la mise bas. En condition naturelle, cette substance assure l'attraction des lapereaux au nid tout en étant pour eux un message rassurant et apaisant. Une étude préliminaire menée sur des lapins de production a montré que les animaux traités avec RAP semblaient plus calmes, et une amélioration était observée pour la fertilité, la taille des portées et la viabilité des lapereaux à la naissance. Le produit est actuellement commercialisé sous forme de bloc diffuseur. D’autres formulations (émulsion cutanée ; diffèrent dispositifs de diffusion) sont en cours d’étude pour optimiser la captation des phéromones (molécules volatiles) de la part des lapins. Une application sur la peau permet au lapin d'être diffuseur pour lui-même et pour d'autres lapins voisins ; cette formulation aussi serait à préférer pour la gestion d’un évènement ponctuel. Une application au travers un diffuseur serait plus indiqué pour un traitement à long terme. Le but du projet est d’étudier les effets de la RAP (contre un placebo) dans des conditions de laboratoire contrôlées sur un groupe de lapin représentant un modèle du lapin de compagnie. Nous proposons une étude composée de deux procédures incluant chacune deux situations potentiellement stressantes pour le lapin : 1) l’arrivée dans un nouvel environnement et l’anesthésie pour la réalisation d’une chirurgie ; 2) La vaccination et le transport. Les hypothèses pour chaque situation sont que les lapins traités avec la RAP aient : une meilleure adaptation au nouvel environnement ; une réaction plus calme aux manipulations vétérinaire et une anesthésie et récupération post chirurgie de meilleure qualité ; une meilleure réponse immunitaire après la vaccination ainsi que des manifestations mineures de stress lors du transport.

Bénéfices attendus

En étant une proie, le lapin tende à stresser et paniquer en toute situation qui pourrait représenter un danger pour lui. Qu'ils soient de compagnie, de ferme ou de laboratoire, les lapins domestiques sont généralement exposés à plusieurs sources de stress qui peuvent inclure un changement d’environnement, les manipulations, un transport. Étant donné que les lapins sont très sensibles aux systèmes d’élevage et de gestion, les événements suscitant la peur sont également des facteurs importants à traiter. Le stress et la peur peuvent nuire au bien-être du lapin et provoquer des problèmes de santé et/ou un stress chronique et des réactions agressives envers le propriétaire qui voit sa relation avec son animal se dégrader. Dans un contexte vétérinaire, la peur et le stress prouvé par le lapin sont des facteurs pouvant avoir un impact négatif sur la qualité des soins, de l’anesthésie, la réponse aux thérapies ou la récupération d’une chirurgie. L’utilisation d’un produit capable de réduire les effets négatifs du stress chez le lapin est donc de grand intérêt. Pour ses propriétés, la copie synthétique de la phéromone maternelle du lapin est un outil visant à réduire le stress, aider les animaux à mieux s’adapter aux défis et améliorer le bien-être animal. Les expériences ici décrites ont comme objectif d’étudier les effets de la RAP dans des situations connues pour être stressantes et qui sont souvent vécues par le lapin domestique. Nous nous attendons que les lapins traités avec la RAP aient, selon la situation testée : une meilleure adaptation à un nouvel environnement ; une réaction plus calme aux manipulations vétérinaire et une anesthésie et récupération post chirurgie de meilleure qualité ; une meilleure réponse immunitaire après la vaccination ainsi que des manifestations mineures de stress lors du transport. Le produit sera appliqué sous des formes différentes (en émulsion cutanée ; diffusé dans l’air) selon l’expérience, afin de tester aussi les formulations disponibles et pouvoir conseiller le meilleur produit pour chaque situation.

Procédures

Le projet prévoit la réalisation de prises de sang. Dans la première procédure, 4 prises de sang/lapin (en raison d’un prélèvement tous les 5 jours) sont prévues pour le premier test tandis que 3 prises de sang/lapin (en raison d’un prélèvement tous les 2 ou 10 jours) sont prévues pour le deuxième test. Dans la deuxième procédure, un total de 6 prises de sang/lapin (espacées d’’une semaine) sont prévues pour le premier test ; 3 prises de sang/lapin (en raison d’un prélèvement tous les 4 ou 6 jours) sont prévues pour le deuxième test. Chaque prélèvement dure environ 10 minutes. Dans la première procédure, chaque lapin reçoit une anesthésie suivie d’une chirurgie ; l’ensemble des ces actes dure 30 minutes. Le projet inclus aussi des tests comportementaux effectué dans un enclos neutre (aréna) pour évaluer la réaction du lapin confrontés à des situations potentiellement stressantes. Dans la première procédure, chaque lapin effectue le test 3 fois (en raison d’un test tous les 6 jours). Le test dure 10 minutes : le lapin est seul dans l’aréna (4’) ; le lapin est exposé à un objet inconnu (3’) ; le lapin est exposé à une personne inconnue (3’). Dans la deuxième procédure, chaque lapin effectue le test 1 fois durant lequel il sera seul dans l’aréna pendant 10 minutes. Ces mêmes lapins subiront un transport en voiture d’une durée de 30 minutes.

Impact sur les animaux

Les nuisances attendues sur les animaux lors de la procédure 1 sont :l’hébergement individuelle; la contention pour la réalisation des prises de sang ; les prises de sang sur animal vigile à la veine saphène ; la possible création d’un hématome sur le site du prélèvement ; la réalisation répétée 3 fois d’un test comportementale incluant des tests de nouveauté (lapin seul dans l’aréna ; lapin exposé à un objet inconnu et à un intrus) ; la pesée ; une anesthésie suivie par une chirurgie ; possible douleur due à la chirurgie; injection de produits pour soulager la douleur. Les nuisances attendues sur les animaux lors de la procédure 2 sont : la contention pour la réalisation des prises de sang ; les prises de sang sur animal vigile à la veine saphène ; la possible création d’un hématome sur le site du prélèvement ; la vaccination ; la pesée ; le transport ; la réalisation d’un test comportementale (lapin seul dans l’aréna).

Devenir

A la fin de ce projet, tous les animaux seront réutilisés dans d’autres projets de recherche.

Remplacement

Il s'agit d'une étude de recherche investiguant les effets de la phéromone apaisante de lapin (RAP) sur le comportement, la physiologie et la zootechnie du lapin. En tant qu'étude sur ces trois indicateurs, elle doit nécessairement porter sur des êtres vivants.

Réduction

Il s’agit de procédures expérimentales exploratoires. Pour les premières deux test sur les réactions des lapins à un nouvel environnement et à l’anesthésie les 16 lapins sont achetés pour d’autres finalités scientifiques. Cela évite l’achat d’autres animaux (réduction). La taille de l’échantillon est acceptable pour des résultats statistiques exploitables car les mesures sont répétées. L'etude prevoit 3 types d’observations : comportementales, zootechniques et physiologiques. Pour chacun, les effets « traitement » et/ou « temps » seront évalués à l’aide de méthodes statistiques qui varient selon le plan d’expérience et la nature de chaque variable, quantitative ou qualitative. Pour les tests autour de la vaccination et le transport, 24 lapins seront répartis en 2 groupes de 12 animaux. Ces études sur les effets de la RAP étant exploratoires, nous n’avons pas de données préliminaires permettant un calcul de puissance, néanmoins cet effectif est cohérent avec des données bibliographiques sur des études similaires. Les données seront analysées statistiquement à l’aide de modèles mixtes pour mesures répétées, afin d’évaluer l’effet du traitement, du temps et de leur interaction.

Raffinement

L’hébergement des lapins est conforme aux guidelines pour taille des cages et enrichissement. Les cages seront fournies d’une litière absorbante pour assurer le confort des animaux ; une plateforme/abris (pour se cacher dessous et s’allonger dessus ; du matériel à ronger (exemple : buchettes en bois, boules en osiers). Pour les deux tests où le logement est individuel, les cages seront grillagées et entreposées les unes à côté des autres pour permettre le contact visuel, olfactif et auditif entre les lapins. Pour les autres deux tests, l’hébergement est prévu par couple de lapins socialement compatibles. Les paramètres environnementaux seront adaptés aux besoins des lapins et surveillés (une température ambiante moyenne de 21°C et une photopériode de 12h-12h). Chaque matin et soir les lapins sont contrôlés par le vétérinaire ou le personnel en charge du projet afin de suivre leur santé et bien-être même en week-end. Afin de limiter la réaction de peur des lapins, l’opérateur frappe 3 fois à la porte pour avertir de son entrée dans la salle. Aussi, des séances de socialisation (caresser les lapins dans leur cage en leur offrant des friandises) seront prévues pour limiter la peur des lapins durant la sortie de la cage et des manipulations. Les prélèvements sanguins respectent les guidelines pour volume et fréquence, elles sont effectuées par un vétérinaire et/ou un opérateur expérimenté, toujours en binôme avec un autre operateur formé à la contention. Les prises de sang se feront dans une salle différente à l’élevage, et loin des congénères ; une attention particulière sera portée aux gestes et au ton de la voix qui seront doux et calmes. Une serviette pourra être utilisée pour mieux contenir le lapin, contenir les mouvements brusques et cacher ses yeux pour diminuer ainsi sa peur. Pour peser les lapins, ils seront introduits dans une boite qui est posée sur la balance, donc les animaux ne sont pas du tout contenus. La pesée servira aussi à monitorer la croissance des animaux et détecter d’éventuels problèmes de santé. Le transport sera réalisé dans le calme ; le trajet sectionné ne sera pas très long (environ 30’), inclura des routes peu empruntées et la conduite sera douce. La caisse contiendra une serviette ainsi que du foin. Durant les test comportementaux, l’opérateur est proche et prêt à intervenir à tout moment pour arrêter le test et reconduire l’animal dans sa cage en cas de stress important.

Choix des espèces

La phéromone apaisante testée est la copie synthétique de la phéromone maternelle du lapin. Plus précisément, il s'agit d'une substance apaisante émise par la mère au moment et dans les jours qui suivent la mise bas et qui a pour effet d'apaiser le nouveau-né, de façon espèce spécifique. Pour cette raison nous allons impliquer l'espèce lapin de notre projet. Pour les deux premiers tests (réactions des lapins à un nouvel environnement et à l’anesthésie) les lapins auront 9 semaines (63 à 69 jours). L’âge n'a pas été choisie, on s'est adapté au stade choisi pour d'autres finalités de recherche. Néanmoins ce stade convient aux types d'expériences menées car les lapins représentent un modèle du lapin de compagnie qui arrive dans le nouveau foyer normalement à l’âge de 2 mois. Pour les deux autres tests (réactions des lapins à la vaccination et au transport) les lapins auront entre 5 et 7 semaines ; cela représente un modèle adapté du lapin de compagnie qui normalement est adopté à cette âge et qui est peu après amené chez le vétérinaire pour une consultation ainsi que pour sa première vaccination. Le lapin jeune est préféré aussi pour faciliter son habituation à l’Homme et aux manipulations.

7 500 souris, rats et lapins vont être utilisé·es, la grande majorité tuée à l'issue et environ 675 réutilisés, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger à modéré. Une neurodégénérescence de la rétine est induite par injection d'endothéline 1, ce qui doit entraîner "une altération permanente de la vision" sur l'œil traité, pour tester des molécules neuroprotectrices. Le porteur affirme qu'aucune méthode alternative ne reproduit l'œil "dans sa globalité fonctionnelle" et envisage d'induire les deux yeux "pour limiter le nombre d'animal en étude". Il indique aussi que ces maladies "ne sont pas douloureuses chez l'homme, et par transposition chez l'animal".

Objectifs

Le glaucome est une maladie dégénérative du nerf optique, c’est la deuxième cause de cécité dans le monde. Le plus souvent, il est associé à une pression intra oculaire élevée, mais aussi présent chez des patients normotones (avec une pression intraoculaire normale), il est caractérisé par une dégénérescence des cellules ganglionnaires rétiniennes (RGC), cellules qui intègrent l’ensemble des informations de la rétine nécessaires à la vision. L'objectif de ce projet est de développer un modèle glaucome chez le rat, la souris et le lapin caractérisé par la dégénérescence des RGC afin de contribuer au développement de nouveaux traitements médicaux. Ce modèle pourra être utilisé pour identifier des substances thérapeutiques neuroprotectrices et tester leurs efficacités.

Bénéfices attendus

Ce projet permettra de participer à la recherche de nouveaux traitements neuroprotecteurs pour lutter contre les effets délétères du glaucome.

Procédures

Le déclenchement du modèle expérimental est dû à une injection intra ou prérioculaire. Les examens ophtalmologiques se feront à l'aide de techniques non invasives (imagerie, observations au biomicroscope, electrorétinogramme), réalisées chez l’homme en cabinet médical par un ophtalmologiste sans hospitalisation. Ils le sont également chez l’animal en clinique vétérinaire. Ces examens pourront se faire pour une partie sur animaux vigiles mais certains qui nécessitent l’immobilisation complète de l'animal seront pratiqués sous anesthésie légère, ce type d'examen ne dure que quelques minutes et se produit une fois par semaine. Les administrations de produits se feront soit par instillations (gouttes oculaires), par voie sous cutanée, intramusculaire ou intrapéritonéale. Ces procédures ne durent que quelques secondes. Les gouttes oculaires peuvent être administrées plusieurs fois par jour (dans la majorité des cas 6 à 8 administrations maximum par jour). Les administrations de produit par injection au niveau de l'œil se feront sous anesthésie locale et générale si besoin, leur fréquence est limitée, une à deux fois par semaine. Les administrations de produit par pose d’implant nécessitent une anesthésie et éventuellement des points de sutures au niveau des conjonctives, de la sclère ou de la cornée. Cet acte chirurgical dure cinq minutes tout au plus et sera réalisé généralement une seule fois, puisque l’implant à vocation à délivrer son contenu sur une longue période. Des prélèvements de sang pourront être réalisés au cours des procédures expérimentales afin de doser le principe actif du traitement administré ou tout autre marqueur d'intérêt.

Impact sur les animaux

Les maladies neurodégénératives de la rétine ne sont pas douloureuses chez l'homme, et par transposition chez l’animal. Outre les nuisances dues aux manipulations de l'animal pour les observations, le stress dû aux contentions manuelles de l'animal pour les administrations de produits, les instillations ou la douleur éventuelle de la piqûre lors des injections de produits ou d'anesthésiant, la pathologie devrait entrainer une altération permanente de la vision sur l'œil ayant reçu l'injection. L'administration des produits peut entrainer des inflammations transitoires des tissus oculaires, au niveau de la cornée, des rougeurs conjonctivales, ou des réactions internes au niveau de l'iris ou de l'humeur vitréenne dans le cas de produits administrés par voie intra oculaire. Les examens sont ceux couramment utilisés chez l'homme en cabinet d'ophtalmologie, leurs effets indésirables sont négligeables.

Devenir

A l'issue de chaque procédure, tous les animaux qui auront suivi la totalité de la procédure expérimentale seront mis à mort pour permettre de réaliser les évaluations ex vivo (évaluations histologiques, dosage de produit...). Pour les animaux n’ayant pas reçu la totalité de la procédure expérimentale (estimé à environ 10%) pourront être gardés en vie et réutilisés dans une autre procédure, après avis du vétérinaire si besoin.

Remplacement

A ce jour, aucune méthode alternative ne permet de mimer l’œil dans son environnement et dans sa globalité fonctionnelle. En effet, l’œil est composé de différents tissus (vasculaires, rétinien neuronal, vitréen, cornéen, humeur aqueuse …) de physiologie différente et soumis aux variations environnementales, aux interactions des tissus et organes voisins. Compte tenu de la complexité de l’organe et en l’absence de modèle alternatif, le projet nécessitera donc d’avoir recours à des animaux.

Réduction

Le nombre maximum d’animaux prévu pour ce projet a été déterminé en fonction de la distribution théorique rencontrée dans les données bibliographiques et historiques de l'établissement, du nombre d'études estimées et tient compte des variations du métabolisme, de la robustesse des mesures et de notre expérience. Ce nombre limité doit nous permettre de conclure sur l’efficacité ou non d’un traitement. L'effet d'un traitement sera évalué à l'aide des tests statistiques. Afin d’avoir une puissance aux tests au moins égale à 0,80, un calcul de l’effectif sera réalisé avant chaque étape afin d’ajuster et de revoir à la baisse si possible le nombre d’animaux à inclure dans les procédures. La possibilité d'induire les deux yeux sera étudiée pour limiter le nombre d'animal en étude. De plus, dès que les procédures expérimentales le permettront, des évaluations non invasives seront choisies tout au long du projet pour améliorer la condition animale et éviter la mise à mort inutile des animaux.

Raffinement

Un suivi quotidien des animaux sera effectué afin de minimiser au maximum l’impact des procédures sur leur bien-être. Les animaux seront hébergés par deux au minimum en première intension, avec enrichissement à ronger et un abri pour les rongeurs plateforme pour les lapins. Les examens choisis pour évaluer les signes cliniques de la maladie sont non invasifs et semblables à ceux pratiqués chez l'homme en cabinet d'ophtalmologie ou chez l’animal en clinique vétérinaire. Afin de réduire le stress de l'animal lors d'examens nécessitant l'immobilisation de l'animal, une administration d'anesthésique sera réalisée. Des points limites adaptés, suffisamment prédictifs et précoces permettent de limiter une éventuelle douleur à son minimum. Ce projet a été soumis pour évaluation à un comité d’éthique et sera suivi par la structure en charge du bien-être animal de l'établissement.

Choix des espèces

Les espèces animales choisies ont une physiologie, une anatomie et un métabolisme largement décrits dans la bibliographie scientifique. L’extrapolation à l’homme des effets sur l’œil en est d’autant plus facilitée. De plus, les modèles expérimentaux concernant cette pathologie sont largement utilisés et décrits sur ces espèces dont les publications de référence sur laquelle le projet est basé. Pour ce projet, des souris, des rats et des lapins ont été retenus pour tenir compte des particularités anatomiques et physiologiques de chaque espèce afin d’augmenter les chances de mener ce projet à terme. Le choix de l’espèce se fera en fonction de la quantité et des caractéristiques des produits à administrer. Les animaux utilisés seront de jeunes adultes à leur arrivée dans notre animalerie. Les lapins inclus dans ce projet auront 8 à 15 semaines et les rongeurs 6 à 12 semaines conformément aux publications de référence qui servent de base aux modèles. Les lapins inclus dans ce projet auront 8 à 15 semaines et les rongeurs 6 à 12 semaines, conformément aux publications de référence qui servent de base aux modèles et ce qui correspond à la maturité visuelle chez ces animaux.

7 300 souris, rats et lapins vont être utilisé·es, la grande majorité tuée à l'issue et environ 675 réutilisés, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger à modéré. Un glaucome est induit par injection dans l'œil, ce qui doit entraîner "une altération permanente de la vision" sur l'œil traité, pour tester des molécules neuroprotectrices lors de 25 études prévues sur cinq ans dans chaque espèce. Le porteur affirme qu'aucune méthode alternative ne reproduit l'œil "dans sa globalité fonctionnelle". Il indique aussi que ces maladies "ne sont pas douloureuses chez l'homme, et par transposition chez l'animal", une équivalence posée sans démonstration.

Objectifs

Le glaucome est une maladie dégénérative du nerf optique, c’est la deuxième cause de cécité dans le monde. Le plus souvent, il est associé à une pression intra oculaire élevée, mais aussi présent chez des patients normotones (qui ont une pression intraoculaire normale), il est caractérisé par une dégénérescence des cellules ganglionnaires rétiniennes (RGC), cellules qui intègrent l’ensemble des informations de la rétine nécessaires à la vision. L'objectif de ce projet est de développer un modèle glaucome chez le rat, la souris et le lapin caractérisé par la dégénérescence des RGC afin de contribuer au développement de nouveaux traitements médicaux. Ce modèle pourra être utilisé pour identifier des substances thérapeutiques neuroprotectrices et tester leurs efficacités. Nous envisageons de réaliser 25 études de test d'efficacité de molécules en 5 ans dans chaque espèce.

Bénéfices attendus

Ce projet permettra de participer à la recherche de nouveaux traitement neuroprotecteurs pour lutter contre les effets délétères du glaucome en proposant un modèle qui permet d'évaluer l'efficacité de nouveaux produits thérapeutiques.

Procédures

Le déclenchement du modèle expérimental est dû à une injection intravitréenne. Les examens ophtalmologiques se feront à l'aide de techniques (imagerie, observations au biomicroscope, electrorétinogramme) réalisés chez l’homme en cabinet médical par un ophtalmologiste sans anesthésie et sans hospitalisation. Ils le sont également chez l’animal en clinique vétérinaire. Ces examens pourront se faire pour une partie sur animaux vigiles mais certains qui nécessitent l’immobilisation complète de l'animal seront pratiqués sous anesthésie légère, ce type d'examen ne dure que quelques minutes et se produit une fois par semaine Les administrations de produits se feront soit par instillations (gouttes oculaires), par voie sous cutanée, intramusculaire ou intrapéritonéale. Ces procédures ne durent que quelques secondes. Les gouttes oculaires peuvent être administrées plusieurs fois par jour. Les injections peuvent être quotidienne pendant une durée d’une semaine. Les administrations de produit par injection au niveau de l'œil se feront sous anesthésie locale et générale si besoin, leur fréquence est limitée, une à deux fois par semaine. Les administrations de produit par pose d’implant nécessitent une anesthésie et éventuellement des points de sutures au niveau des conjonctives, de la sclère ou de la cornée. Cet acte chirurgical dure cinq minutes tout au plus et sera réalisé généralement une seule fois, puisque l’implant à vocation à délivrer son contenu sur une longue période. Des prélèvements de sang pourront être réalisés au cours des procédures expérimentales afin de doser le principe actif du traitement administré ou tout autre marqueur d'intérêt.

Impact sur les animaux

Les maladies neurodégénératives de la rétine ne sont pas douloureuses chez l'homme, et par transposition chez l’animal. Outre les nuisances dues aux manipulations de l'animal pour les observations, le stress dû aux contentions manuelles de l'animal pour les administrations de produits, les instillations ou la douleur éventuelle de la piqûre lors des injections de produits ou d'anesthésiant, la pathologie devrait entrainer une altération permanente de la vision sur l'œil ayant reçu l'injection. Nous avons déjà expérimenté ce modèle dans notre laboratoire, il n'a pas été observé d'altération de comportement des animaux envers leurs congénères ou concernant la prise alimentaire. L 'administration des produits peut entrainer des inflammations transitoires des tissus oculaires, au niveau de la cornée, des rougeurs conjonctivales, ou des réactions internes au niveau de l'iris ou de l'humeur vitréenne dans le cas de produits administrés par voie intra oculaire. Les examens sont ceux couramment utilisés chez l'homme en cabinet d'ophtalmologie, leurs effets indésirables sont négligeables.

Devenir

A l'issue de chaque procédure, tous les animaux qui auront suivi la totalité de la procédure expérimentale seront mis à mort pour permettre de réaliser les évaluations ex vivo (évaluations histologiques, dosage de produit...). Pour les animaux n’ayant pas reçu la totalité de la procédure expérimentale (estimé à environ 10%) pourront être gardés en vie et réutilisés dans une autre procédure, après avis du vétérinaire si besoin.

Remplacement

A ce jour, aucune méthode alternative ne permet de mimer l'œil dans son environnement et dans sa globalité fonctionnelle. En effet, l'œil est composé de différents tissus (vasculaires, rétinien neuronal, vitréen, cornéen, humeur aqueuse) de physiologie différente soumis aux variations environnementales, aux interactions des tissus et organes voisins. Le projet nécessitera donc d’avoir recours à des animaux compte tenu des particularités de l’organe concerné par le projet et l’absence de modèle alternatif.

Réduction

Le nombre maximum d’animaux prévu pour ce projet a été déterminé en fonction de la distribution théorique rencontrée dans les données bibliographiques et historiques de l'établissement, du nombre d'études estimées et tient compte des variations du métabolisme, de la robustesse des mesures et de notre expérience. Ce nombre limité doit nous permettre de conclure sur l’efficacité ou non d’un traitement. L'effet d'un traitement sera évalué à l'aide des tests statistiques, chaque groupe traité sera comparé à celui du groupe témoin. Afin d’avoir une puissance aux tests au moins égale à 0,80, un calcul de l’effectif sera réalisé avant chaque étape afin d’ajuster et de revoir à la baisse si possible le nombre d’animaux à inclure dans les procédures. De plus, dès que les procédures expérimentales le permettront, des évaluations non invasives seront choisies tout au long du projet pour améliorer la condition animale et éviter la mise à mort inutile des animaux.

Raffinement

Un suivi quotidien des animaux sera effectué afin de minimiser au maximum l’impact des procédures sur leur bien être. Les animaux seront hébergés par deux au minium en première intention avec un enrichissement à ronger et abris pour les rongeurs et plateforme pour les lapins. Les examens non invasifs choisis pour évaluer les signes cliniques de la maladie sont semblables à ceux pratiqués chez l'homme en cabinet ophtalmologique ou chez l’animal en cabinet vétérinaire. Les examens de l'œil qui requièrent l’immobilité de l'animal pourront être réalisés pour son confort sous anesthésie. Des points limites adaptés, suffisamment prédictifs et précoces permettent de limiter une éventuelle douleur à son minimum. Ce projet a été soumis pour évaluation à un comité d’éthique et sera suivi par la structure en charge du bien-être animal de l'établissement.

Choix des espèces

Le lapin sera choisi pour la taille de son œil. Les observations des paramètres observées en sont facilitées. Si la quantité de produit à évaluer est limitée (difficulté à synthétiser, coût), le rongeur sera alors choisi. Il le sera aussi si des analyses histologiques spécifiques sont nécessaires, le catalogue d’anticorps par exemple y est plus développé. Enfin le choix de l’espèce, sera guidé aussi par les données existantes sur le produit à évaluer (spécificité d’action, données historiques sur l’espèce choisie). C’est pour ces raisons que des souris, des rats et des lapins ont été retenus pour tenir compte des particularités anatomiques et physiologiques de chaque espèce afin d’augmenter les chances de mener ce projet à terme. Les animaux inclus dans les études seront de jeunes adultes. Les lapins inclus dans ce projet auront 8 à 15 semaines et les rongeurs 6 à 12 semaines, conformément aux publications de référence qui servent de base aux modèles et qui correspond à la maturité visuelle chez ces animaux.

2400 lapins, 2450 souris et 2450 rats vont être utilisés, tous tués à l'issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger à modéré. Ils reçoivent une injection dans l'œil déclenchant une néovascularisation de la rétine, des instillations, des injections et parfois la pose chirurgicale d'un implant oculaire, avant évaluations après mise à mort. Le porteur affirme que les maladies vasculaires de la rétine ne sont pas douloureuses chez l'homme, et par transposition chez l'animal, et décrit démangeaisons et rougeurs comme de simples gênes. Il conclut qu'aucune méthode alternative ne permet de reproduire l'œil "dans sa globalité fonctionnelle".

Objectifs

L’objectif du projet est la mise en place, au sein de l’établissement utilisateur, d’un modèle expérimental de néovascularisation rétinienne chronique chez le lapin et le rongeur afin de tester l'efficacité de traitements potentiels dans cette maladie. Nous nous baserons sur les données de la littérature, en utilisant un composé qui induit les mécanismes similaires à ceux impliqués dans les complications néovasculaires chez l'homme.

Bénéfices attendus

Le bénéfice attendu du projet est de proposer des modèles expérimentaux qui permettront d'évaluer l'efficacité de nouveaux traitements. La recherche de traitements contre les atteintes vasculaires impliquées dans différentes pathologies est en constante évolution et nécessite de pouvoir les tester dans les meilleures conditions possibles et dans le plus grand respect du bien-être animal.

Procédures

Le déclenchement du modèle expérimental est dû à une injection intravitréenne. Les examens ophtalmologiques se feront à l'aide de techniques non invasives (imagerie, observations au biomicroscope). Ces examens sont réalisés chez l’homme en cabinet médical par un ophtalmologiste sans anesthésie et sans hospitalisation. Ils le sont également chez l’animal en clinique vétérinaire. Ces examens pourront se faire pour une partie sur animaux vigiles mais certains qui nécessitent l’immobilisation complète de l'animal seront pratiqués sous anesthésie légère, ce type d'examen ne dure que quelques minutes. Les administrations de produits se feront soit par instillations (gouttes oculaires), par voie sous cutanée, intramusculaire ou intrapéritonéale. Ces procédures ne durent que quelques secondes. Les gouttes oculaires peuvent être administrées plusieurs fois par jour (dans la majorité des cas 6 à 8 administrations maximum par jour). Les administrations de produit par injection au niveau de l'œil se feront sous anesthésie locale et générale si besoin. Les administrations de produit par pose d’implant nécessitent une anesthésie et éventuellement des points de sutures au niveau des conjonctives, de la sclère ou de la cornée. Cet acte chirurgical dure cinq minutes tout au plus et sera réalisé généralement une seule fois, puisque l’implant à vocation à délivrer son contenu sur une longue période. Des prélèvements de sang pourront être réalisés au cours des procédures expérimentales afin de doser le principe actif du traitement administré ou tout autre marqueur d'intérêt. Si des prélèvements de sang doivent être effectués, ils se feront par ponction et basés sur les recommandations du Gircor et durent moins d'une minute.

Impact sur les animaux

Les maladies vasculaires de la rétine ne sont pas douloureuses chez l'homme, et par transposition chez l'animal. Un des effets indésirables attendu dans ce modèle expérimental devrait entrainer une altération de la vision sur l'œil ayant reçu l'injection. Dans le cas où traitement devrait être administré par chirurgie, il s'agira d'une chirurgie permettant l'insertion d'un implant oculaire de taille réduite, une inflammation peut être observée dans les heures suivant l’intervention. La manipulation et l’immobilisation des animaux au cours des différents examens et des différentes administrations devraient engendrer un léger stress malgré toutes les précautions mises en place. Il en va de même pour les lapins lors de la sortie des animaux et leur placement en salle d’expérimentation. L'administration des produits devrait engendrer tout au plus une douleur légère et de courte durée notamment lors de l’anesthésie. Au cours de l’anesthésie jusqu’au réveil, une baisse de la température corporelle pouvant induire un stress physique/thermique est attendue. Elle sera minimisée par l’utilisation de tapis chauffant, de lampe chauffante ou d’armoire de réveil chauffée en fonction des espèces. Une légère perte de poids peut survenir à la suite de certaines manipulations ou actes invasifs (anesthésie…). Un point terminal est fixé à -20% par rapport au poids du début de l’étude. Elle ne devrait pas être supérieure à 20% d’autant plus que l’accès à l’eau et à la nourriture ne sera pas limité lors de leur stabulation. Des démangeaisons, des sensations de brûlures, des rougeurs palpébrales, des gonflements des paupières sont autant de nuisances attendues et imputables à la composante inflammatoire de la maladie induite par ces procédures. Elles n’occasionneront pas de douleur tout au plus une légère gêne ou un léger inconfort.

Devenir

A l'issue de chaque procédure, tous les animaux seront mis à mort pour permettre de réaliser les évaluations ex vivo (évaluations histologiques, dosage de produit...).

Remplacement

A ce jour, aucune méthode alternative ne permet de mimer l'œil dans son environnement et dans sa globalité fonctionnelle. En effet, l'œil est composé de différents tissus (vasculaires, rétinien neuronal, vitréen, cornéen, humeur aqueuse) de physiologie différente soumis aux variations environnementales, aux interactions des tissus et organes voisins. Le projet nécessitera donc d’avoir recours à des animaux compte tenu des particularités de l’organe concerné par le projet et l’absence de modèle alternatif.

Réduction

Le nombre maximum d’animaux prévu pour ce projet a été déterminé en fonction de la distribution théorique rencontrée dans les données bibliographiques et historiques de l'établissement, du nombre d'études estimées et tient compte des variations du métabolisme, de la robustesse des mesures et de notre expérience. Ce nombre limité doit nous permettre de conclure sur l’efficacité ou non d’un traitement. L'effet d'un traitement sera évalué à l'aide des tests statitiques, chaque groupe traité sera comparé à celui du groupe témoin. Afin d’avoir une puissance aux tests au moins égale à 0,80, un calcul de l’effectif sera réalisé avant chaque étape afin d’ajuster et de revoir à la baisse si possible le nombre d’animaux à inclure dans les procédures. De plus, dès que les procédures expérimentales le permettront, des évaluations non invasives seront choisies tout au long du projet pour améliorer la condition animale et éviter la mise à mort inutile des animaux.

Raffinement

Un suivi quotidien des animaux sera effectué afin de minimiser au maximum l’impact des procédures sur leur bien-être. Les rongeurs seront placés en groupe dans des cages d’hébergement contenant nourriture et boisson ad libitum et enrichissement à ronger et abris. Les lapins seront placés individuellement ou par deux dans des cages avec boisson ad libitum, nourriture et enrichissement à ronger. Les examens non invasifs choisis pour évaluer les signes cliniques de la maladie sont semblables à ceux pratiqués chez l'homme en cabinet ophtalmologique ou chez l’animal en cabinet vétérinaire. Les examens de l'œil qui requièrent l’immobilité de l'animal pourront être réalisés pour son confort sous anesthésie. Des points limites adaptés, suffisamment prédictifs et précoces permettent de limiter une éventuelle douleur à son minimum. Ce projet a été soumis pour évaluation à un comité d’éthique et sera suivi par la structure en charge du bien-être animal de l'établissement.

Choix des espèces

Le lapin sera choisi pour la taille de son œil. Les observations des paramètres observées en sont facilitées. Si la quantité de produit à évaluer est limitée (difficulté à synthétiser, coût), le rongeur sera alors choisi. Il le sera aussi si des analyses histologiques spécifiques sont nécessaires, le catalogue d’anticorps par exemple y est plus développé. Enfin le choix de l’espèce, sera guidé aussi par les données existantes sur le produit à évaluer (spécificité d’action, données historiques sur l’espèce choisie). C’est pour ces raisons que des souris, des rats et des lapins ont été retenus pour tenir compte des particularités anatomiques et physiologiques de chaque espèce afin d’augmenter les chances de mener ce projet à terme.