Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 08/12/2023
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-721285)
35 900 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger à modéré. Elles subissent des stimulations hormonales par injection, des microchirurgies de transfert d’embryons sous anesthésie et des biopsies pour génotypage, pour archiver des lignées génétiquement modifiées par congélation de sperme et d’embryons. Le porteur indique que les mâles reproducteurs et donneurs de sperme, les femelles donneuses d’ovocytes et les femelles ayant subi le transfert d’embryons sont toutes mises à mort, comme les animaux nés des transferts et utilisés pour le contrôle qualité. Il affirme que la congélation des semences est « la seule méthode possible » pour sauvegarder ces lignées murines.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Les équipes de recherches utilisent de nombreux modèles génétiques différents chez la souris, pour supporter des programmes de recherche visant à la fois à étudier le rôle de gènes dans le développement, à caractériser l’impact de mutations génétiques identifiées chez des patients et à évaluer des stratégies thérapeutiques. Les opérations de stockage et de congélation en azote liquide des lignées génétiques impliquées vise à garantir la disponibilité de ces lignées à l’état cryoconservé permettant au besoin de revivifier la lignée en cas de problème survenu sur la lignée à l’état respirant (perte, dérive génétique, contamination) et de faciliter les échanges de ces lignées entres les différents sites hébergeurs par l’envoi des semences cryoconservées.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
L’archivage et la sauvegarde des lignées par cryoconservation de sperme et/ou d’embryons permet de garantir la disponibilité des lignées murines traitées et de favoriser/simplifier les échanges entre différents sites.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
-hébergement en situation d’isolement de 1 à 2 semaines maximum – Stimulation hormonale : 2 injections intrapéritonéales (durée inférieure à 30 secondes) réalisées à 48h d’intervalle – Microchirurgie sous anesthésie générale (durée de l’intervention inférieure à 30 min) nécessitant 2 injections, une en IP et une en sous-cutanée – Biopsies de tissu pour génotypage (moins d’1 minute)
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les mâles vasectomisés et les mâles reproducteurs (utilisés pour la production du sperme ou des embryons) sont hébergés en situation d’isolement intermittent entre deux périodes d’accouplement. L’isolement peut générer de l’anxiété, la souris étant un animal vivant en groupes sociaux. Les femelles pseudo-gestantes peuvent faire l’objet de douleurs post-chirurgicales suite à la réimplantation des embryons par micro-chirurgie. Un stress peut aussi apparaitre en raison de la contention des animaux lors des stimulations hormonales ou pour l’anesthésie des femelles pseudo-gestantes. Le prélèvement de tissu pour génotypage peut entrainer une douleur et un stress en lien avec la contention de l’animal.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Tous les animaux utilisés dans ce projet seront mis à mort. En effet, les mâles reproducteurs sont mis à mort en fin de projet et ceux donneurs de sperme doivent être mis à mort afin de prélever le sperme. Les femelles pseudo-gestantes ayant été sujettes à la chirurgie de transfert d’embryons ne peuvent subir un deuxième transfert d’embryons. Les femelles donneuses sont mises à mort pour permettre la récolte d’ovocytes post-mortem. Les animaux issus des transfert d’embryons (contrôles qualités) ne sont pas conservés.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Il n’y a pas de remplacement possible, la congélation des semences est la seule méthode possible pour la sauvegarde de lignées murines.
2. Réduction
Les nombres d’animaux utilisés sont réduits au maximum et l’estimation a été faite en se basant sur la littérature scientifique et sur la base des années d’expérience dans ces approches. Pour les cryoconservations de sperme, 2 animaux sont nécessaires par lignée. Pour les cryoconservations d’embryons, en moyenne, 45 animaux seront nécessaires par lignée
3. Raffinement
La procédure chirurgicale de transfert d’embryons associe anesthésie générale et analgésie post et per-opératoire, avec la mise en oeuvre de points limites opérationnels pour le monitoring du temps post opératoire. Des points-limites ont été établis, entrainant la mise à mort anticipée de l’animal si nécessaire. Les conditions d’élevage, d’hébergement et de soins sont contrôlées pour réduire toute douleur, souffrance, angoisse ou dommage durable potentiels. Le milieu est enrichi à l’aide de coton de nidification et de maisons en carton.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
L’archivage des lignées murines déja existantes impose l’utilisation du modèle murin. Les animaux utilisés sont des reproducteurs à l’âge adulte pour les femelles receveuses et les males reproducteurs ou donneur de sperme, aprés la puberté et avant tout vieillissement. Les femelles donneuses utilisées sont des femelles impubères (4 semaines) pour faciliter l’efficacité du traitement de superovulation. Les animaux issus des transferts d’embryons dans le cadre des contrôles qualités effectués seront âgés de 7 à 10j.