Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 24/03/2023
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-285051)
66 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance sévère. Chaque animal reçoit une inoculation de cellules cancéreuses qui provoque une tumeur et un état de cachexie progressif, avec fonte musculaire, sur vingt-neuf jours, complété par des tests de force et un séjour de 48 heures en cage sans enrichissement, avant d’être tué pour prélever ses muscles. Le porteur indique développer ce modèle « suite à un besoin de nos clients », afin de leur offrir la possibilité d’y tester leurs composés. Il suit la souffrance par une grille de score et affirme qu’aucune méthode sans animaux ne permet d’étudier l’efficacité réelle d’un composé sur la cachexie.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Suite à un besoin de nos clients, nous souhaitons développer un modèle de cachexie liée au cancer du colon. Nous avons déjà une forte expérience dans l’utilisation du modèle de cachexie liée au cancer du poumon par l’inoculation ectopiques de cellules cancéreuses du poumons (Lewis Lung Carcinoma). La mise en place de ce nouveau modèle nous permettra non seulement d’étendre notre expertise dans le domaine mais également d’offrir à nos clients la possibilité de tester leurs composés sur un autre type de modèle de cachexie liée au cancer.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Cette étude permet d’avoir un suivi longitudinale sur un modèle sévère de cachexie liée au cancer. Une analyse complète sur différents paramètres in vivo tels que le poids, la prise alimentaire, la taille des tumeurs, la composition corporelle, la force des pattes, l’activité spontanée et les échanges respiratoires assure une caractérisation bien défini de ce modèle afin de proposer le proposer à nos clients. Ces derniers pourront alors tester leurs composés dans un but thérapeutique.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Ce projet comporte 5 types d’interventions différents: Inoculation de cellules CT-26 : Durée de 5 minute environ. Test de force (2 tests : pattes avant et 4 pattes) : Durée 30sec/session (3sessions/test ; répété 2 fois au cours du projet). Mesures de composition corporelle : Durée de 1-2 minutes (répétée 3 fois au cours du projet). Administrations sous-cutanées : Durée 10 secondes environ; administrations quotidiennes jsuqu’à 29 jours maximum. Physiocages : Durée de 48h ; à partir de D-2 avant euthanasie
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Le modèle employé dans le présent projet est un modèle de cachexie résultant du développement d’une tumeur sous-cutanée induite par l’inocculation de cellules CT26. Le développement tumoral induit un état de cachexie progressif s’accompagnant d’une réduction de masse maigre et d’une perte de poids corporel. Pour des raisons éthiques, le modèle est limité à 29 jours post inoculation des cellules CT26 après lesquels les animaux seront euthanasiés. L’hébergement individuel est nécessaire de par la nécessité de la mesure individuelle de la prise alimentaire. L’anesthésie constituera une nuisance sur les animaux. Les mesures de tumeur peuvent générer un stress voire une douleur pour l’animal. L’ensemble des traitements (par voie sous-cutanée) ainsi que les pesées et les mesures de composition corporelle peuvent être source d’angoisse. Le test de force constitue une légère nuisance sur l’animal. Enfin, les physiocages consitituent également un stress sur l’animal qui sera privé par définition d’enrichissement pendant 48h.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Tous les animaux seront euthanasiés à l’issue de la procédure. En effet, l’étude implique des anayses biochimiques et histologiques sur les muscles des pattes arrières qui doivent ainsi être collectés à l’issue de la procédure.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
L’utilisation d’animaux à des fins scientifiques se justifie ici car il n’existe aucune méthode de substitution n’utilisant pas l’animal de laboratoire et permettant l’étude de l’efficacité réelle d’un composé sur l’état de cachexie. Or, nous souhaitons développer un modèle de cachexie liée au cancer du colon. Nous avons choisi un modèle utilisant l’espèce souris qui est parfaitement caractérisé dans la littérature scientifique.
2. Réduction
Le nombre d’animaux utilisés par groupe a été défini comme le nombre minimum nécessaire pour être en mesure de mettre en évidence une différence statistiquement significative sur les paramètres étudiés. Le groupe contrôle du modèle a été réduit à 6 animaux (contre 8 pour les groupes cachectiques) du fait d’une moindre variabilité des paramètres mesurés, ces souris ne développant pas de tumeur. Le nombre d’animaux utilisés a été rationalisé à partir de l’expérience acquise par notre laboratoire sur l’analyse des paramètres d’intérêt en concordance avec une analyse bibliographique. Ainsi, le nombre d’animaux par groupe a été réduit au strict minimum nécessaire pour chaque série expérimentale en fonction des paramètres d’intérêt. Les paramètres étudiés sont les suivants : poids corporel, poids corporel cumulé, prise alimentaire, prise alimentaire cumulée, efficacité alimentaire, volume tumoral, densité tumorale, poids de la tumeur, poids corporel sans tumeur, composition corporelle (masse grasse, masse maigre, masse fluidique ; animal, carcasse avec/sans tumeur, tumeur seule), test de force par grip test (2 et 4 pattes), activité spontanée, échanges respiratoires et poids des muscles de la patte.
3. Raffinement
Le modèle animal utilisé est parfaitement caractérisé dans la littérature et couramment utilisé en préclinique. C’est un modèle de cachexie chez la souris induit par une inoculation de cellules de cancer du colon (CT-26). Le protocole a été planifié de façon à limiter au maximum tout stress et tout inconfort pour les animaux. Les animaux seront hébergés individuellements et un enrichissement du milieu sera assuré par des dômes en carton, de briquettes en bois et de matériel de nidification. Afin de réduire toute douleur, l’inoculation des cellules sera réalisée sous anesthésie gazeuse (sur tapis chauffant) et les mesures de composition corporelle seront réalisées chez l’animal vigile (durée de la mesure : 2 minutes). Les administrations sous-cutanées seront réalisées par des expérimentateurs rodés à ce type de pratique, et deux sites d’administration seront utilisés (alternance d’un jour à l’autre). Enfin, compte-tenu du développement d’une tumeur et d’un état de cachexie chez les animaux, le développement de cette dernière sera limité à 29 jours et un suivi journalier étroit des animaux à l’aide d’une grille de score de souffrance permettra une action rapide en cas d’atteinte des points limites établis. Les points limites sont défini ainsi : – score >20 (ou 15, si le vétérinaire référant décide de l’euthanasie de l’animal) – taille de tumeur >3000mm3 – propagation de la nécrose de la tumeur – perte de poids >20%. Au-delà des points limites, la souffrance de l’animal est évaluée. Au-delà d’un score de 5, la souffrance définie comme légère induit une surveillance renforcée de l’animal (2x/jour). Au-delà de 10, la souffrance définie comme modérée induit une surveillance renforcée de l’animal et traitement analgésique jusqu’à réduction du score
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Le modèle souris Balb/c ANn Crl est très bien documenté dans la littérature en tant que modèle de cachexie induit par une inoculation de cellules CT-26. Le choix du modèle souris Balb/c ANn Crl a été validé avec le client et le chef de projet. Les animaux utilisés seront de jeunes souris adultes (5 semaines à réception ; 7 semaines au début du traitement). Le choix de ce stade de développement est guidé par la population humaine qui sera ciblée par les composés à tester, à savoir une population adulte présentant un état cachectique lié au cancer.