Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2022-05-13 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-399312)
1 553 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant des niveaux de souffrance modéré à sévère. Le porteur leur injecte des cellules T humaines génétiquement modifiées, leur inflige jusqu’à trente prélèvements sanguins rétro-orbitaux et, pour une partie, une greffe de peau, avec le développement attendu d’une réaction du greffon contre l’hôte provoquant une inflammation sévère et une perte de poids. Toutes sont euthanasiées pour analyse, certaines souris conditionnées mais non injectées servant d’abord à « maintenir les compétences » du personnel. Il affirme qu’un modèle de souris humanisée est le plus pertinent pour évaluer ces cellules avant les premiers essais chez l’humain.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Les objectifs du projet sont : 1) vérifier l’impact des cellules Natural killer (NK) sur la persistance des cellules T régulatrices en présence ou non de traitement concomitant 2) l’efficacité des cellules T régulatrices génétiquement modifiées dans des modèles de transplantation (GvHD et transplantation de peau) 3) vérifier la distribution et l’innocuité du produit dans un modèle de souris humanisées relevant par bioluminescence
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Les bénéfices attendus du projet sont: 1) détermination de la dose à injecter aux patients pour obtenir une efficacité thérapeutique 2) obtenir des données précliniques d’efficacité thérapeutique du produit 3) obtenir des données de sécurité/innocuité du produit thérapeutique avant les premiers tests chez l’humain
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Les prélèvements de sang se font par voir rétro-orbitale sous anesthésie locale. Nous prélèverons 100uL de sang toutes les semaines jusqu’à semaine 6 à partir de Jour7 après injection des cellules (6 prélèvements) puis le cas échéant une fois toutes les 2 semaines jusqu’à semaine 15 (9 prélèvements) et enfin 1 prélèvement une fois par mois jusqu’à semaine 30 (15 prélèvements) soit au total 30 prélèvements si l’expérience dure jusqu’à semaine 30. Chaque prélèvement sanguin prend environ 2 minutes/souris maximum. Pour la procédure de greffe de peau, les animaux subiront une intervention chirurgicale sous anesthésie générale et traitement anti-douleur. La douleur des animaux sera atténuée par une injection de buprénorphine. L’intervention chirurgicale dure environ 1heure mais nous surveillerons les souris jusqu’ à leur réveil complet (durée de l’intervention: 2 heures maximum)
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Développement de signes de Graft versus Host Disease (GvHD) (perte de poids, pilo-érection, prostration…) qui est une réaction immunitaire du greffon contre l’hôte, entraînant une inflammation sévère.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Tous les animaux qui ont reçu une injection de cellules seront euthanasiés en fin d’expérimentation pour l’analyse ex-vivo Les animaux qui ont été conditionnés au busulfan mais n’ayant pas reçu de cellules (le nombre de cellules peut ne pas être suffisant en fonction de leur expansion in vitro qui peut être variable d’un donneur à un autre) pourront être utilisés pour le maintien des compétences du personnel puis euthanasiés
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
De nombreux tests in vitro permettant une sélection importante de nos cellules seront effectués afin de valider leur qualité et leur efficacité avant les tests in vivo
2. Réduction
Afin de réduire le nombre d’animaux utilisé, chaque groupe contiendra le nombre minimum indispensable à l’obtention de résultats statistiquement pertinents. Nous prévoyons 3 expériences mais si les 2 premières expériences donnent le même résultat, la 3eme sera annulée pour réduire le nombre de souris utilisé. Utilisation de la bioluminescence pour déterminer le temps de mise à mort et ainsi réduire le nombre d’animaux utilisé.
3. Raffinement
Dans une approche éthique, nous prévoyons de limiter au maximum le nombre d’animaux avec des scores cliniques sévères et mettre en place des points limites adaptés. Pour les actes de prélèvement invasifs comme les prélèvements sanguins, nous utiliserons un anesthésique local pour limiter la douleur. Les actes de chirurgie seront faits sous anesthésie générale avec administration de produits analgésiant et anti-douleur jusqu’à la prise de greffe et rétablissement de l’animal. Nous utiliserons également une litière adaptée (douce, non-poussiéreuse) qui favorise l’expression des comportements normaux de la souris (enfouissement, nidification…). Pour les souris qui recevront une greffe de peau, nous réduirons le nombre de souris par cage de 6 à 4 animaux.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Nous avons développé des méthodes permettant de modifier génétiquement les cellules humaines et en particulier les cellules T régulatrices (Tregs). Afin de pouvoir estimer l’efficacité, l’innocuité et la persistance de ces Tregs humains, nous devons utiliser un modèle murin humanisé le plus relevant possible. Un tel modèle n’existe que chez la souris et permet l’analyse de la biologie des cellules humaines in vivo. Souris adultes de 8 à 12 semaines pour leur poids relativement stable en fin de croissance, pour la facilité de manipulation, de prélèvement et d’analyses d’échantillons, d’évaluation physique (bien-être) Pour les souris NSG/NXG et HLA-A2 NSG reconstituées par des cellules CD34+ (huNSG, huHLA-A2 NSG) chez Jax Labs ou Janvier labs (huNXG), seules des souris de plus de 12 semaines sont disponibles car c’est le temps nécessaire pour que les cellules CD34+ se greffent et se différencient en cellules immunes matures.