Rôle neuroprotecteur de la surexpression de CRX dans un modèle d’amaurose congénitale de Leber

La perte progressive des cellules de la rétine responsables de la vision constitue une cause fréquente de déficience visuelle, touchant environ une personne sur 4 000. Certaines de ces maladies sont liées à des anomalies de protéines régulant l’expression de nombreux gènes essentiels au développement, à la maturation, au maintien et au bon fonctionnement des cellules visuelles. Les altérations de l’un de ces régulateurs peuvent conduire à plusieurs formes de maladies rétiniennes héréditaires entraînant une baisse importante de la vision, voire une cécité. Des travaux récents, dont les nôtres, ont permis de mieux comprendre les mécanismes à l’origine de cette perte de vision grâce à l’utilisation de modèles animaux reproduisant ces pathologies. Afin de développer de nouvelles approches thérapeutiques, nous proposons d’augmenter l’expression de ce facteur protecteur au moyen d’un vecteur de thérapie génique. L’efficacité et la sécurité de cette stratégie ont déjà été démontrées dans de nombreuses études précliniques. Nos résultats ont montré que cette approche permettait de restaurer partiellement le développement et le fonctionnement des cellules visuelles dans un modèle de maladie rétinienne, ce qui a conduit à une récupération partielle de la vision. Nous avons également observé un effet protecteur de ce traitement dans un autre modèle de dégénérescence rétinienne, entraînant un ralentissement de la progression de la maladie. Afin de confirmer ce potentiel neuroprotecteur et d’évaluer la possibilité d’étendre cette stratégie à d’autres maladies de la rétine, nous étudierons un modèle animal présentant une dégénérescence rétinienne causée par des mécanismes différents. Trois procédures expérimentales seront mises en œuvre, pour un maximum de 200 animaux. L’objectif est d’évaluer l’efficacité de cette approche thérapeutique pour préserver les cellules visuelles et ralentir l’évolution de maladies rétiniennes héréditaires actuellement sans traitement curatif.

À l’heure actuelle, peu de thérapies sont proposées aux patients atteints de rétinopathies. La plupart ne permettent que de ralentir la dégénérescence. Certaines, plus efficaces, ne sont proposées que pour votre mutation. Nous réalisons ce projet afin de développer une thérapie génique efficace aussi bien pour des rétinopathies liées à un CRX dominant ou non, qui n’ont pour l’instant pas de traitement disponible, que pour des rétinopathies liées à d’autres gènes, entraînant la perte des photorécepteurs. Nous espérons, par ce projet, démontrer l’efficacité de notre traitement sur un modèle animal, qui servira de preuve de concept, ou d’études précliniques, nécessaires à réaliser en amont d’essais chez les patients. Notre vecteur a été breveté et codéveloppé avec la société Variant. Le but est de poursuivre vers un essai clinique.

Nous utiliserons une lignée de souris présentant une maladie de la rétine afin d’évaluer l’efficacité d’un traitement expérimental. Toutes les souris recevront une injection sous la rétine, réalisée une seule fois sous anesthésie générale. La bonne réalisation de l’injection sera vérifiée immédiatement après l’intervention par l’observation à l’œil. Les animaux bénéficieront ensuite de mesures non invasives de la structure et du fonctionnement rétiniens, réalisées sur les deux yeux à plusieurs âges (jusqu’à 5 fois par groupe). Chaque séance durera environ 20 à 30 minutes sous anesthésie générale. Une partie des souris effectuera également un test visuel comportemental afin d’évaluer leurs capacités visuelles. Ce test sera réalisé jusqu’à 5 fois et durera environ 20 minutes par séance. Les souris pourront également participer à un test comportemental d’exploration dans un environnement éclairé ou sombre. Ce test sera réalisé une seule fois et durera environ 5 minutes. À différents temps de l’étude, les animaux seront euthanasiés.

Les animaux présentent une atteinte limitée à la rétine. Les effets indésirables potentiels liés aux procédures sont principalement associés aux anesthésies répétées et aux injections oculaires. Une opacification temporaire de l’œil peut parfois être observée après une anesthésie. Dans de rares cas, des complications oculaires, telles qu’une persistance de cette opacification ou un saignement anormal, peuvent survenir et conduire à l’euthanasie de l’animal. L’injection dans l’œil entraîne un décollement rétinien transitoire qui se résorbe spontanément en quelques jours. Une gêne légère ou une inflammation temporaire peut également être observée après l’intervention. Les examens de suivi visuel et comportemental sont non invasifs et ne provoquent pas de douleur. Les animaux font l’objet d’une surveillance régulière tout au long de l’étude afin de détecter rapidement tout signe d’inconfort ou de souffrance.

Tous les animaux sont euthanasiés à la fin de la procédure, afin de récupérer les rétines et réaliser des marquages immunologiques sur les coupes histologiques, ou analyser les effets de notre traitement au niveau transcriptomique et protéique.

a thérapie génique que nous développons doit être évaluée chez l’animal avant toute application chez l’être humain. Les souris constituent un modèle adapté, car elles présentent des atteintes de la rétine similaires à celles observées chez les patients. Elles permettent ainsi d’évaluer l’efficacité et la sécurité du traitement dans un organisme vivant. Le calendrier des interventions est adapté à l’évolution de la maladie. Chez les souris utilisées dans cette étude, l’atteinte de la rétine apparaît très tôt ; le traitement est donc administré à un jeune âge. Les animaux sont ensuite suivis régulièrement pendant plusieurs mois afin d’évaluer les effets du traitement à court et à long terme.