Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2024-09-17 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-560340)
Des souriceaux nouveau-nés sont retirés à leur mère pendant quatre heures au maximum, le temps qu’une injection virale soit faite dans leur colonne vertébrale, puis rendus à une femelle qui peut se montrer agressive à leur retour. 540 souris sont utilisées, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré pour 444 d’entre elles, léger pour 64, et menées sous anesthésie sans réveil pour 32. À partir du cinquième jour suivant l’injection, chaque animal passe trois sessions de tests comportementaux de trois à quarante minutes, et celles issues de la lignée génétiquement modifiée subissent une biopsie de l’extrémité de la queue. Le porteur indique qu’une mauvaise manipulation de l’injection rachidienne peut, rarement, léser la moelle épinière et paralyser les pattes arrière dès le réveil, 508 souris étant tuées pour prélèvement de tissus et 32 gardées vivantes pour l’élevage ou des prélèvements hors saisine.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
L’équipe étudie le système nerveux moteur situé dans la moelle épinière. Ce réseau de neurones, pour qu’il fonctionne correctement, doit être régulé finement. L’équilibre de la balance portée par les fibres nerveuses qui inhibent ou qui excitent le réseau de neurone innervant les muscles des pattes postérieures, est renforcé par les propriétés endogènes de ces neurones. C’est ce jeu d’influence qui dans sa finalité, conduira ou non à une contraction musculaire. L’un des projets de l’équipe est d’étudier, dans les conditions normales, les mécanismes moléculaires qui conduisent à cette réponse musculaire. Une protéine est principalement ciblée. Elle existe sous différentes formes et s’exprime à la surface des neurones. Ces différentes versions seraient susceptibles de jouer un rôle dans l’activité électrique de la cellule nerveuse. Des approches génétiques, biologiques, seront employées pour caractériser la contribution individuelle ou collective de ces protéines sur le modèle murin, des études comportementales analyseront leur effet global sur la posture et la locomotion de l’animal.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
La complémentarité des procédures employées dans ce projet offrira une meilleure compréhension des mécanismes responsables de l’activité des cellules nerveuses dans un réseau sain. En ciblant spécifiquement une protéine d’intérêt par l’outil génétique sur le modèle de la souris, ces études approfondies fourniront des données solides sur le rôle de cette protéine dans les conditions normales. Enfin, ce projet pourra bénéficier à l’ensemble de la communauté scientifique.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Les animaux nouveau-nés sont séparés de leur mère au moment de l’injection du virus pendant 4h maximum car c’est toute la portée qui est concernée, l’injection proprement dit se fait en moins d’une minute mais la préparation en post injection et pré-injection nécessite 20 min par animal. Plus tard dès le 5eme jour post injection, les animaux injectés vont suivre des sessions d’expérimentations non invasives à une fréquence de 3 sessions par animal sur l’ensemble de l’étude, couvrant les 3 premières semaines postnatales. Ces tests comportementaux durent entre 3 et 40 min maximum en fonction des tests, les enregistrements vidéo durent 3 min maximum par animal. Chez les souris génétiquement modifiées, pour distinguer précocément celles qui le sont de celles qui ne le sont pas, il est nécessaire de faire un test génétique à partir d’un fragment (
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les animaux nouveau-nés sont séparés de leur mère au moment de l’injection virale, puis plus tard lors des tests comportementaux et des enregistrements vidéos. Les manipulations et les changements de lieux des animaux pour ces tests peuvent également engendrer du stress. Bien que l’injection dans la colonne vertébrale soit généralement sûre, dans de très rares cas , une mauvaise manipulation peut entraîner une lésion de la moelle épinière, pouvant causer une paralysie partielle ou totale des membres postérieurs, visible dès le réveil. Les animaux injectés peuvent perdre du poids. La mère peut être stressée du fait de l’enlèvement de la totalité de ses petits et peut avoir des signes d’agressivité au retour des souriceaux qui auront subi une injection virale à la naissance. Le phénotype éventuel attendu serait un déficit moteur qui pourrait potentiellement se manifester par un affaissement de l’arrière train, des tremblements des pattes postérieures. La biopsie de l’extrémité de la queue des souriceaux provenant de la lignée de souris génétiquement modifiée, peut induire du stress chez l’animal et un léger saignement.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
les animaux sont mis à mort pour prélèvement tissulaire. Les 32 animaux gardés en vie seront potentiellement utilisés pour l’élevage ou pour des prélèvements tissulaires pour des procédures hors saisine.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Les données préliminaires de ce projet ont été obtenues à partir de lignées cellulaires et de modélisation, ce qui nous a permis de réduire le nombre d’animaux nécessaires. Néanmoins, l’expérimentation sur l’animal demeure essentielle, car nous étudions la complexité du réseau de neurones innervant les muscles des pattes postérieures dans les conditions normales d’une activité de locomotion où de nombreux paramètres rentrent en jeu.
2. Réduction
Ce projet nécessitera un total de 540 animaux. Il s’agit d’une poursuite des recherches précédemment menées par notre équipe. Cela nous a permis de réduire le nombre d’animaux utilisés. Le nombre de rongeurs par groupe expérimental sera limité à son strict minimum, en tenant compte des contraintes de chaque technique, et les analyses statistiques seront adaptées. Les études comportementales seront menées longitudinalement, ainsi chaque animal sera son propre contrôle, ce qui diminuera le nombre d’animaux utilisés. A la fin de cette étude longitudinale, les tissus des animaux âgés de 21 jours seront prélevés, évitant ainsi de rajouter un lot d’animaux supplémentaire pour les études protéiques prévues à la 3eme semaine postnatale.
3. Raffinement
Une fois injectés, les animaux sont maintenus en fratrie et ramenés à la mère. Pour minimiser les épisodes d’agressivité de la mère envers les nouveau-nés injectés, nous évaluons soigneusement le comportement de la mère en choisissant des femelles plus calmes et sans comportements stéréotypés ou anxieux. De plus, nous pourrons utiliser des récompenses pour la mère la semaine précédant la mise bas et la première semaine après la naissance. Nous prenons un soin particulier à enrichir leur cage (rondin de bois,matériel de nidification, tunnel…). Que ce soit pour l’injection virale, les tests comportementaux, les animaux resteront en contact avec de la litière provenant de leur cage d’origine pour qu’ils soient en présence d’odeurs familières. A partir du stade juvénile, du gel nourrissant ou des récompenses peuvent leur être fourni dès qu’ils sortent de la zone de stabulation. Tout au long de l’étude, la douleur et/ou la détresse de l’animal seront évaluées 2 à 3 fois par semaine par l’expérimentateur, en observant des points limites pour les jeunes animaux.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Cette étude est dans la continuité de nos projets scientifiques précédents. Nous avons une grande expertise de ce modèle, nous avons accumulé de nombreuses données sur lesquelles nous pouvons nous baser. L’injection virale est également un outil que nous maîtrisons sur ce modèle. Les animaux seront utilisés principalement au cours des 3 premières semaines post-natales. La tranche d’âge de la première et deuxième semaines post-natales restent compatibles avec les techniques d’enregistrements de l’activité neuronale sur tissu prélevé tandis que la deuxième et troisième semaines post-natales sont des périodes clés pour l’acquisition de la marche et donc pour nos études comportementales chez l’animal. Nous postulons que le niveau d’expression des protéines d’intérêt est déjà détectable à la naissance, ce qui permet une étude protéique couvrant les 3 premières semaines de vie de l’animal.