Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2022-09-12 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-982532)
960 souris vont être utilisées, la plupart tuées à l’issue et 90 réutilisées, dans des procédures impliquant des niveaux de souffrance légers à modérés. Les femelles reçoivent des stimulations hormonales puis sont tuées pour prélever leurs ovocytes, les mâles subissent une vasectomie chirurgicale et les femelles pseudo-gestantes une réimplantation embryonnaire, pour créer des lignées reproduisant des mutations liées à l’infertilité humaine. Le porteur indique que la préhension, les chirurgies et la mise à mort génèrent du stress et que les lignées au phénotype dommageable seront euthanasiées. Il affirme qu’aucune culture in vitro ne permet d’obtenir des gamètes matures et conclut au recours à la souris.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
L’infertilité touche 186 millions de personnes dans le monde (48 millions de couple) et représente donc un problème de santé majeur. Cette infertilité peut etre causée par une déficience au niveau des gamètes aussi bien chez l’homme que chez la femme. Trouver les gènes causals impliqués dans cette infertilité est donc une nécessité afin de pouvoir mieux comprendre leurs mécanismes d’action et proposer des thérapies. L’étude de cohortes de patient(e)s infertiles permet de pointer des gènes potentiellements impliqués. L’objectif de notre étude est donc de générer des animaux déficients pour ces gènes ou reproduisant les mutations identifées afin de valider les gènes candidats.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Ce projet permettra de générer des souris déficientes pour les gènes identifiés par séquencage exomique des cohortes de patient(e)s infertiles et donc de valider les gènes candidats. A court terme, les gènes pourront être utilisés comme facteurs diagnostiques. A plus long terme, selon le phénotype occassionné, une thérapie ciblée pourra être proposée au patient.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Injection pour les stimulations hormonales (2 par souris femelles). Chirurgie sur les males pour la vasectomisation (30 minutes par souris, une chirurgie par souris). Chirurgie pour la réimplantation embryonnaire dans les femelles pseudo-gestantes (20 minutes par souris, 1 par souris).
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Stress au moment de la préhension pour les injections et pour la mise à mort. Stress engendré par la chirurgie, meme si réalisée sous analgésie et anesthésie. Les males vasectomisés et les femelles réimplantées pourront perdre du poids et une inflammation pourra apparaitre au niveau de la plaie.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
La récupération des gamètes pour l’injection intra-cytoplasmiques de sperme nécessite la mise à mort des femelles. Après vasectomisation, les males sont utilisés pendant plusieurs mois. Suite à l’implantation embryonnaire, les souris pseudo-gestantes donnent naissance aux petits avant d’etre mises à mort ou gardés en vie pour allaitement ou test par les utilisateurs. Si des animaux présentent un phénotype dommageable, nous déciderons soit d’euthanasier la lignée.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
L’étude de la fertilité nécessite l’utilisation d’animaux reproduisant les phénotypes observés chez l’homme. Il est donc compliqué de les remplacer. Il n’existe aucun système de culture in vitro permettant d’obtenir des gamètes matures et fécondables (femelle) ou fécondantes (male).
2. Réduction
Les gamètes femelles utilisées pour l’injection intra-cytoplasmique de spermatozoide sont récupérées suite à la stimulation hormonale des souris, ce qui permet de récupérer un grand nombre d’ovocytes, et donc de réduire le nombre de souris femelles. les males vasectomisés seront utilisés pour générer des femelles peudo-gestantes pendant 1 an.
3. Raffinement
Les souris seront placées en conditions de température régulée, nourriture et eau ad libitum. Les animaux seront maintenus le moins de temps possible afin d’injecter les hormones nécessaires à la stimulation ovarienne et aux injections d’analgésiant/anesthésiant. La mise à mort des animaux sera effectuée dans une pièce différente de celle de l’hébergement. La chirurgie des mâles est réalisée sous anesthésie générale et analgésie. Les femelles ont leurs ovocytes prélevés après euthanasie. Suite à la chirurgie, en cas d’inflammation de la plaie, un traitement antibiotique sera mis en place.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
La souris est un modèle de choix pour générer des animaux transgéniques. Les souris femelles seront utilisées dès 3 semaines pré-puberts et pas au delà de 12 semaines pour la récupération d’ovocytes. En effet, après 12 semaines, les souris répondent moins bien à la stimuation hormonale et le nombre d’ovocytes récoltés décroit. Les femelles pseudo-gestantes devront avoir eu une portée avant utilisation, donc entre 5 et 12 semaines. Les souris males seront vasectomisés à maturité sexuelle vers 9-10 semaines.