Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2025-03-27 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-332152)
480 rats vont être utilisés dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré, chacun subissant jusqu’à douze séances hebdomadaires d’enregistrement cardiaque d’une heure, deux chirurgies et jusqu’à six séries d’injections. La première opération, de soixante minutes, sert à administrer un produit qui provoque l’accumulation d’alpha-synucléine dans le cœur, et les injections répétées détruisent la fonction des nerfs vagues, ce dont le porteur affirme que cela reste sans impact sur l’état général des animaux dans les conditions de l’étude. La seconde chirurgie, de quatre-vingt-dix minutes, est menée sans réveil, tous les rats étant tués pour l’analyse histologique des cœurs et des cerveaux. L’effectif repose sur des groupes de 15 animaux, le porteur reconnaissant que la moitié pourrait suffire si aucune différence n’apparaît entre mâles et femelles à mi-parcours.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
La maladie de Parkinson est liée à la dégénérescence de certains neurones dans le cerveau, associée à l’accumulation de la protéine alpha-synucléine. En plus des symptômes moteurs caractéristiques de la maladie, il existe de nombreux symptômes non-moteurs qui sont très invalidants. Parmi ces symptômes non-moteurs, l’hypotension orthostatique (baisse soudaine de la pression artérielle lors du passage d’une position couchée ou assise à une position debout) est fréquente chez les patients, provoquant des étourdissements et vertiges qui augmentent le risque de chute. On observe également une diminution de la variabilité de la fréquence cardiaque et d’autres troubles de la régulation du rythme cardiaque dont la fréquence et l’intensité varient d’un patient à l’autre. Cependant, il existe des preuves que l’accumulation d’alpha-synucléine ne se restreint pas au cerveau et touche également des organes périphériques dont le cœur. En effet, il existe des neurones situés dans le cœur qui constituent le système nerveux intracardiaque et qui jouent un rôle important dans la régulation de la fonction cardiaque. Les neurones cardiaques intègrent les informations en provenance des systèmes nerveux sympathique et parasympathique, permettant ainsi d’assurer le contrôle de l’activité du cœur. Ils pourraient être affectés dans la maladie de Parkinson et ainsi contribuer directement aux troubles cardiaques. Le rôle potentiel de ces neurones cardiaques dans la maladie de Parkinson reste inconnu à ce jour et c’est ce que nous cherchons à mettre en évidence dans ce projet.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Ce projet va permettre de mettre en évidence les effets cardiaques retrouvés dans la maladie de Parkinson en déterminant comment le système nerveux cardiaque est modulé par l’agrégation protéique pathologique d’alphasynucléine, quelle serait la vulnérabilité des neurones cardiaques et les dysfonctionnements cardiaques qui en découlent. L’évaluation des troubles cardiaques permettrait de mettre en évidence l’intérêt probable de modifier la prise en charge thérapeutique des patients en incluant de nouvelles molécules permettant de limiter ces dysfonctionnement.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Tous les animaux (n=480) seront soumis à deux tests comportementaux moteurs (un spontané et un nécessitant une légère contention de quelques secondes) puis à une anesthésie gazeuse de moins de 10 minutes permettant de raser l’animal et de poser des électrodes au niveau du thorax pour mesurer pendant 1 heure l’activité cardiaque sur l’animal vigile. La mesure se fait par télémétrie ; l’animal est libre de ses mouvements pendant la mesure. Cette mesure est répétée une fois par semaine soit 6 fois pour la moitié des animaux et 12 fois pour les animaux restants. Une chirurgie d’une durée de 60 minutes sera réalisée sous anesthésie et couverture médicamenteuses anti-douleurs. Cette chirurgie permet d’administrer un produit qui provoque une accumulation d’alpha synucleine aun niveau cardiaque. Les animaux vigiles recevront une injection 1 fois par jour pendant 3 jours, à deux semaines d’intervalle (3 fois pour la moitié des animaux (n=240) et six fois pour la seconde moitié (n=240)) permettant la perte de fonction des nerfs vagues. Puis après six et/ou douze semaines, les animaux passeront de nouveau les deux tests comportementaux. 240 animaux seront soumis à une seconde chirurgie de 90 minutes permettant de faire des mesures de l’activité cardiaque et de la pression artérielle. Les animaux seront endormis et sous couverture médicamenteuses anti-douleurs à la suite de laquelle les animaux seront mis à mort sans réveil préalable (pour prélèvements). 240 animaux auront une seconde chirurgie sans réveil et sous couverture anesthésique et analgésique (pour d’autres prélèvements).
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Léger stress transitoire lors des pesées, injections, inductions et réveil d’anesthésie, et tests comportementaux. Légère douleur transitoire lors des injections. Légère gêne pendant l’heure de port des électrodes. Léger inconfort transitoire lors du réveil après anesthésie. Pendant les jours suivant la chirurgie, douleur et inconfort minimisés par les antalgiques et légère perte de poids transitoire. Dans les conditions de vie des animaux dans ce projet, la perte de fonction des nerfs vagues n’a pas d’impact sur l’état général des animaux.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Tous les animaux (n=480) seront mis à mort à la fin de l’étude de façon à obtenir des résultats de plusieurs paramètres physiologiques tels que l’activité électrique du coeur et la pression artérielle, ainsi que la réalisation des analyses histologiques des coeurs et cerveaux récupérés.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Des approches in silico ou in vitro ou des données obtenues chez les patients existent et donnent de l’information mais ces approches ont des limites et à ce stade d’avancée des connaissances, il est nécessaire de passer au modèle in vivo pour avoir un système entier et intégré.
2. Réduction
Le nombre d’animaux dans chaque lot expérimental a été obtenu grâce à des calculs de puissance statistique. Ces critères prenent en compte le risque de possibles décès expérimentaux ou d’origine non contrôlée et impliquent d’utiliser pour des groupes expérimentaux de 15 animaux par lot soit 480 rats mâles et femelles. Des analyses statistiques à plusieurs variables seront effectuées. Les deux sexes seront étudiés en parallèle. Après avoir expérimenté la moitié des animaux mâles et femelles, si une différence est mise en évidence, l’intégralité des animaux du projet seront nécessaires, en revanche si aucune différence n’apparait, nous pourrons grouper les résultats sur les deux sexes et ainsi n’utiliser que la moitié de l’effectif total des animaux de ce projet.
3. Raffinement
Les expérimentations sont réfléchies de façon à minimiser au maximum l’inconfort, la douleur, la détresse ou l’angoisse des animaux au cours des différentes procédures de ce projet (médicamentation définie avec le vétérinaire référent et tests comportementaux basés sur le comportement spontané des animaux ou très rapide et ne nécessitant qu’une légère contention). Lors de la chirurgie nous aurons recours à l’anesthésie générale (gazeuse, facilement modulable et permettant un réveil rapide et plus confortable) avec contrôle de la température corporelle, additionnée d’une analgésie locale en présence d’antalgique périphérique. Le traitement antalgique sera poursuivi en postopératoire. Des points limites gradés, précis et adaptés ont été définis de façon à obtenir un arbre décisionnel en fonction des observations faites et aboutir à une gestion optimale et sans délai de ceux-ci. Les rats sont hébergés deux par cage avec eau et nourriture ad libitum. Un enrichissement par bâton de bois est disposé dans les cages d’hébergement permettant aux rats d’assouvir leur besoin de ronger. Une phase d’habituation à l’animalerie et aux expérimentateurs est prévue en amont de l’étude. Le binôme d’expérimentateur reste le même tout au long de l’étude.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
L’espece animale utilisée est le rat (Rattus norvegicus). Il sagit de l’espèce la plus utilisée pour l’étude de la maladie de Parkinson puisque les réseaux neuronaux sont similaires à ceux de l’Homme. Les animaux seront utilisés à l’âge adulte (8 semaines au moment de la première chirurgie) puisque nous avons besoin d’avoir des circuits et systèmes entièrement développés.