Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 16/01/2025
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-378992)
Concilier carrière sportive et carrière reproductive des juments de valeur, et ramener en France une technique de fécondation in vitro que les éleveurs vont chercher à l’étranger : 80 équidés sont utilisés, 20 dans des procédures d’un niveau de souffrance léger et 60 dans des procédures modérées. Les donneuses subissent une à deux ponctions folliculaires par voie vaginale sous sédation, environ 40 minutes chacune, les receveuses une injection de synchronisation, toutes six échographies. Le porteur décrit une douleur ponctuelle malgré l’anesthésie, une inflammation ou une douleur pelvienne possible ensuite, et des risques d’infection locale ou de saignement interne. Aucune jument n’est tuée, toutes sont gardées vivantes et réutilisées pour d’autres protocoles, dans un projet que le porteur rattache aux « coûts de production » de la filière équine, la sauvegarde de races locales menacées venant ensuite.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Depuis 60 ans la filiere équine cherche à optimiser la reproduction des equidés afin de concilier carriere sportive et reproductive. La superovulation n’étant pas fiable dans l’espèce équine, le taux de récupération des embryons est d’environ 75 % et le taux de gestation attendu après transfert est d’environ 50 à 75 %. Une seconde option consiste à produire des embryons in vitro. Cette étude concerne le développement de 2 techniques de production in vitro d’embryons : 1) intra Cytoplasmic Sperm Injection (ICSI) par injection d’un spermatozoïde dans le cytoplasme de l’ovocyte. Dans l’espèce équine cette procédure, qui nécessite un équipement de micromanipulation coûteux et un personnel expérimenté, est la seule technique qui permet actuellement une production in vitro efficace d’embryons équins dans un cadre clinique mais elle n’est pas disponible en France. Les éleveurs français qui ont recours à cette technique doivent donc envoyer les ovules collectés dans différentes cliniques étrangères. 2)FIV (Fécondation in Vitro) : récemment une méthode a été mise au point, permettant le développement d’embryons. Des taux élevés de blastocystes ont été obtenus et la naissance de trois poulains en bonne santé a été rapportée par une équipe américaine. Tout en offrant une excellente occasion d’étudier les aspects fondamentaux de la fécondation, l’application pratique de la FIV dans un cadre clinique pose encore des défis supplémentaires : 1) jusqu’à présent, la FIV n’est possible qu’avec du sperme fraîchement éjaculé, alors que la flexibilité et le potentiel d’application du sperme refroidi ou congelé-décongelé sont bien plus importants ; 2) seule une longue période de pré-incubation des spermatozoïdes de 22 heures a permis de réussir la FIV 3) avec seulement trois poulains nés, on sait peu de choses sur les effets à long terme de la FIV utilisant ce protocole de traitement du sperme sur la santé du poulain, ou sur la différence entre la FIV et l’ICSI en termes d’épigénétique L’objectif de ce projet est donc d’établir et de valider la faisabilité et l’innocuité de la technique de FIV et ICSI, avec du sperme frais et congelé.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
L’objectif de ce projet a deux attentes: 1) optimiser la reproduction des équidés. Les coûts de production dans un élevage imposent d’optimiser la gestion des reproducteurs. Lorsque les reproducteurs ont une grande valeur génétique mais sont peu ou pas fertiles, la production d’un embryon nécessite des techniques de procréation assistée. C’est le cas pour des juments ayant des problèmes d’ovulation (le follicule se lutéinise sans libérer l’ovocyte) ou de tractus génital (oviducte ou utérus) empêchant la remontée des spermatozoïdes vers l’ovocyte, le transport de l’embryon vers l’utérus ou son implantation. C’est aussi le cas pour des étalons ayant une semence de mauvaise qualité ou des étalons morts pour lesquels le stock de paillettes congelées ne permet pas d’inséminer un grand nombre de juments 2) participer à la sauvegarde des espèces menacées dont les effectifs sont en constante diminution, au point de mettre en péril certaines races locales (anes:Grand Noir du Berry, chevaux de trait: Boulonnais …)
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Des échographies seront réalisées sur tous les animaux (6 répétitions de ce geste par animal); l’acte dure 2 à 3 minutes. Une seule injection sous-cutanée (durée : 10 secondes) sera réalisée chez les juments receveuses pour les synchroniser et permettre le transfert embryonnaire. 1 à 2 ponctions folliculaires pour les donneuses d’ovocytes la durée de l’acte est d’environ 40mm avec la sedations et la préparation au niveau périnéale (la vulve est soigneusement désinfectée, rincée et séchée, la queue est bandée, pose de la sonde urinaire).
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Lors de la ponction folliculaire, les juments peuvent être soumises à plusieurs nuisances. Tout d’abord, la manipulation et la contention nécessaires pour immobiliser l’animal engendrent un stress. Cette ponction, réalisée à l’aide d’une aiguille introduite à travers la paroi vaginale sous guidage échographique, peut occasionner une douleur ponctuelle malgré l’anesthésie. Une sensation de pression peut également être ressentie. Cette pratique peut provoquer des effets secondaires, tels que de la somnolence, une désorientation passagère ou un inconfort transitoire lié à l’anesthésie. Après l’intervention, une légère inflammation ou une douleur pelvienne passagère peut survenir. Les risques de complications incluent des infections locales, des saignements internes rares ou des irritations dues à la manipulation des organes reproducteurs. L’induction de l’ovulation se fait par voie sous-cutanée, ce qui peut générer du stress lors de la contention ainsi qu’une légère douleur au niveau du site d’injection. Lors de la fécondation, la préparation de l’appareil reproducteur et l’introduction d’un cathéter ou d’un endoscope peuvent entraîner un inconfort local. Ces manipulations, parfois répétées, peuvent aussi générer une gêne ou un stress supplémentaire. Bien que rares, des complications comme des infections ou des inflammations utérines peuvent survenir.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Tout les animaux sont gardés en vie et réutilisé pour d’autres protocoles après examens vétérinaires
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
L’objectif est de développer et améliorer une technique de production in vitro d’embryons équins par FIV et ICSI. Le développement de ces techniques peut se faire en partie avec des ovocytes collectés sur des juments abattues dans des abattoirs commerciaux. Toutefois, les résultats obtenus avec des ovocytes collectés dans les abattoirs ou in vivo par ponction folliculaire sont parfois différents. Notre objectif étant de produire des embryons à partir de femelles en carrière sportive ou de femelles subfertiles, nous devons mettre au point et améliorer nos techniques sur des ovocytes collectés in vivo par ponction, sans abattage des animaux. Les embryons équins seront transférés dans des juments receveuses car il n’existe pas actuellement de système in vitro permettant le développement embryonnaire au-delà de 8 jours.
2. Réduction
Les lot sont établis en fonction du nombre minimal d’animaux requis pour obtenir des embryons FIV et ICSI. Un à trois embryons transférables peuvent être obtenus à la fin de la période de développement in vitro, pour chaque séance de ponction folliculaire d’une jument au début du projet. Grâce à l’expérience, ce chiffre devrait croître.
3. Raffinement
Notre procédure sera raffinée, minimisant les interventions. Les juments seront logées en bâtiment conventionnel sur aire paillée avec accès au pâturage, en visibilité et contact des congénères pour rendre le plus agréable possible leur environnement expérimental pendant toute la durée du projet. Les ponettes voient plusieurs fois par jours les animaliers et les expérimentateurs qui surveillent attentivement leur comportement. L’enrichissement du milieu est assuré par des brosses, des jeux, des bouts de bois à ronger. Les animaliers ont suivi une formation à la manipulation éthologique des animaux : les animaux sont habitués aux différentes procédures et les vivent sans stress. Les femelles soumises aux ponctions recevront un traitement à base de sédatifs, d’analgésiques, d’anti-inflammatoires et d’antibiotiques. Ce traitement sera précisé dans la description des procédures. Les animaux seront surveillés tout au long des procédures et après les procédures afin d’écarter tout probléme avant leur remise en troupeau.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Notre objectif étant d’améliorer les rendements de production et développement in vitro d’embryons équins grâce à la FIV et l’ICSI afin de répondre aux attentes de la filière équine française , nous sommes obligés d’utiliser cette espèce pour notre projet. Nous utiliserons des femelles adultes, pubères et cycliques pour collecter les ovocytes de bonne qualité, aptes à être fécondés (donneuses). Nous utiliserons des femelles jeunes (moins de 10 ans), cycliques pour assumer le développement embryonnaire et la gestation jusqu’au stade 25 jours (receveuses). A 25 jours l’activité cardiaque peut être visualisée lors d’un examen gynécologique. Cette activité est gage de bon développement embryonnaire et viabilité de l’embryon au départ. Toutes les juments gestantes après le transfert embryonnaire seront gardés pour le poulinage.