Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2024-09-06 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-412504)
Greffées sous la peau du flanc avec des cellules d’adénocarcinome du pancréas, des souris immunodéprimées reçoivent trois injections d’un inhibiteur d’enzyme puis une chimiothérapie. 1 648 souris sont utilisées au total dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger à modéré, toutes tuées pour le prélèvement de tissus. Une partie n’entre dans le projet que pour une biopsie de deux à trois millimètres au bout de la queue, à 21 jours. Le porteur laisse croître les tumeurs jusqu’à un point limite de 2 000 mm3 et affirme que la perte de poids, qu’il utilise comme indicateur de douleur, n’est pas corrélée à la taille de la tumeur. Le second axe, la production d’organoïdes à partir de pancréas prélevés à six mois, reste décrit en deux phrases, sans que l’effectif annoncé soit expliqué.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Les objectifs de ce projet comportent deux axes (1) développer un modèle de sénéscence chimio-induite in vivo et tester l’effet d’inhibiteur d’enzyme de la 0-glcNACylation (OGT) et (2) produire des organoides à partir de différentes lignées de souris transgéniques.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Les bénéfices de ce projet seront une meilleure compréhension des mécanismes cellulaires du cancer et identifier à terme de proposer de nouveaux candidats médicaments dans une pathologie qui manque de traitement efficace.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Nous réaliserons un modèle de xénogreffe sous cutanée de cellules d’adénocarcinome pancréatique (par injection sous cutanée sur le flanc des souris). Ces souris recevront 3 injections d’inhibiteurs OSMI (inhibiteur spécifique de l’enzyme OGT) puis bénéficieront d’un protocole de chimiothérapie. Les différerentes injections durent quelques secondes. Pour le génotypage des biopsies de l’extrémité de la queue sont nécessaires. prélevement unique d’un échantillon de queue (2-3mm) à 21jours pour génotypage. Le prélevement est unique et prend quelques secondes.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les xénogreffes consistent en une tumeur sur le flanc de la souris. Pour ces tumeurs, un point limite (2000mm3) sera appliqué (taille de la tumeur au-delà de laquelle, l’expérimentation est stoppée). La sévérité de la procédure est estimée modérée. Il est possible que la chimiothérapie induise une perte de poids. La biopsie de queue est un acte rapide ne provoquant qu’un faible inconfort à l’âge auquel il est pratiqué. Cependant, si l’animal présente des signes de stress intense (comme des vocalisations), il sera redéposé dans sa cage d’origine et le prélèvement sera retenté plus tard après éventuellement quelques jours d’habituation à la manipulation humaine.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
mise à mort pour prélevement des tissus d’intéret.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
axe 1: Il s’agit de modèles physiopathologiques préclinique de progression carcinogénétique et de réponse aux thérapies dont la complexité et la cinétique ne peuvent être reproduites in vitro. L’effet de l’inhibiteur pharmacologique et l’inhibition seront au prélable caractérisées sur des modèles cellulaires d’adénocarcinomes coliques. L’un des intéret de l’axe 2 est de produire des organoïdes qui seront à terme des modèles alternatifs d’études de la cancérogenèse pancréatique
2. Réduction
AXE1: Pour l’impact de l’inhibiteur OSMI/chimiothérapie: Les effectifs ont été calculés avec l’outil biostatgv. Le nombre total de sujet est de 10 souris par groupe (8 conditions expérimentales). AXE2: Nous prévoyons de réaliser 10 prélevements de pancréas pour chaque génotype (n=8) qui permettra d’avoir un effectif suffisant pour analyser d’un point de vue qualitatif
3. Raffinement
Pour réduire la douleur et l’angoisse: (i) acclimatation des animaux pendant 7jours avant le début des expériences (ii) sacrifice des animaux à distance des autres animaux. Le nombre de cohorte a été optimisé pour réduire le ombre de souris. Une surveillance accrue est effectuée avec un suivi régulier de l’état général des souris. Nous serons particulièrement attentifs à la détection précoce de tout signe de douleur. Nous surveillerons les courbes de poids de souris et rechercherons les signes de stress et de douleur. La perte de poids ne doit pas dépasser 20 % du poids initial. La diminution du poids de la souris est utilisé comme un indicateur de la douleur et de la cachexie associée à la douleur et il n’est pas démontré de corrélation statistique à la taille de la tumeur. Une injection sous cutanée d’analgésique sera realisée en cas de douleur. Si les signes de douleur persistent, un sacrifice anticipé sera effectué. Pour les xénogreffes, un point limite sera appliqué (taille de la tumeur au-delà de laquelle, l’expérimentation est stoppée). Des enrichissements adaptés (cabanes, carrés de cotons, …) sont présents en permanence dans les cages.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Les modèles expérimentaux sont: -Modèle standard de xénogreffes en souris immunodéprimées permettant l’implantation de lignées cellulaires. – Modèle de souris transgénique référence pour l’apparition de lésions néoplasiques pancréatiques Axe1: Les xénogreffes sont réalisées sur des souris Scid de 8 semaines suivant les protocoles classiques de la littérature scientifique. Axe2: les pancréas de souris seront prélevés à 6 mois (ce qui permettra d’évaluer une différence de pourcentage de pancréas néoplasiques vs le pancréas normal)