Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 02/11/2022
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-513896)
120 souris vont être utilisées dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré, puis réutilisées comme animaux de réforme ou pour d’autres travaux pratiques. Hébergées seules pendant cinq jours en cage à métabolisme, sur une grille métallique de surface réduite, elles reçoivent un diurétique dans leur nourriture pour que des étudiants de Master mesurent la fonction rénale. Le porteur reconnaît que cet hébergement individuel génère des nuisances, tout en jugeant le traitement sans gravité. Il indique que l’usage de rongeurs reste « nécessaire » à la formation, l’étude des effets du diurétique ne pouvant selon lui se faire que sur un animal.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Ce projet est dispensé sous la forme de séances de travaux pratiques pour des étudiants de première année de Master. Il a pour objectif de les initier à l’expérimentation en cage à métabolisme pour évaluer les fonctions rénales à l’aide d’analyses statistiques à partir de données biologiques qu’ils auront collectées. Plus particulièrement, les étudiants seront amenés à tester les effets d’un diurétique (le furosémide) utilisé couramment en médecine humaine pour diminuer le volume sanguin, chose souhaitable dans le cadre de certaines maladies à oedèmes, l’hypertension artérielle ou les insuffisances cardiaques. D’un point de vue pratique, le furosémide est adapté à une expérimentation courte car ses effets sont rapides. Celui-ci provoque une augmentation du volume des urines, et donc une diminution du volume sanguin.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Ces séances de travaux pratiques visent à familiariser les étudiants de première année de Master à l’analyse in vivo de la fonction rénale de souris placées en cage à métabolisme, ce qui permet également de les sensibiliser aux problèmes méthodologiques de ce type d’expérimentation qui a pris une place centrale dans les stratégies d’élucidation de mécanismes physiopathologiques à la suite du développement de modèles animaux transgéniques. Plus globalement, ces séances de travaux pratiques permettent de familiariser les étudiants à l’utilisation des animaux à des fins scientifiques et à leur manipulation dans des conditions réglementaires.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Tous les animaux seront hébergés en cages à métabolisme individuelle durant une période de 5 jours. Durant cet hébergement, une diète alimentaire standard sera présentée aux animaux sous forme de nourriture en poudre, avec eau déminéralisée ad libidum. Le furosémide sera additionné à la nourriture en poudre en fin de matinée du 4ème jour jusqu’au 5ème jour. Durant les 5 jours, les urines seront collectées, et la prise d’eau et de nourriture seront mesurés. Ces analyses ne nécessitent pas la manipulation des animaux. En revanche, le poids des animaux sera déterminé quotidiennement et nécessitera la sortie des animaux de leur cage à métabolisme le temps de leur pesée (30 secondes à 1 minute). Pour cette mesure, les animaux seront manipulés à l’aide d’un tube en polycarbonate.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Les animaux seront placés en cages à métabolisme. Celles-ci sont transparentes et disposées les unes à côté des autres. Cela permet le maintien du contact visuel, olfactif et acoustique entre les congénères. Les cages seront placées dans une pièce dédiée, calme, avec une température contrôlée à 22°C +/-2°C et bénéficiant d’une périodicité jour/nuit de 12h/12h. Cependant, ce type d’hébergement génère des nuisances sur les animaux car ceux-ci sont hébergés individuellement, et se déplacent sur une grille métallique de surface réduite. Hormis l’hébergement en cage à métabolisme, le traitement au furosémide durant une journée ne relève d’aucune gravité. Celui-ci provoque transitoirement l’augmentation de la diurèse des animaux, mais celle-ci ne s’accompagne pas d’une déshydratation car les animaux ont libre accès l’eau de boisson durant toute la procédure expérimentale.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Le traitement au furosémide des animaux durant une journée n’entraîne aucun phénotype dommageable. En conséquence, tous les animaux pourront être réutilisés par l’EU comme animaux de réforme, ou pour d’autres types de séances de travaux pratiques (démonstration de la préhension/contention d’animaux, …).
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Dans la mesure du possible, le remplacement des animaux par des méthodes alternatives (études de films, analyses d’articles scientifiques, méthodes in vitro, …) est préféré. Toutefois, l’un des objectifs de la formation en Master à laquelle les étudiants sont inscrits est notamment de les former à la compréhension des mécanismes qui sous-tendent les différentes fonctions physiologiques et pathologiques chez les animaux ou l’humain. De ce fait, l’utilisation de rongeurs reste nécessaire : l’étude des effets d’un diurétique (furosémide) sur la fonction rénale ne peut se faire que sur un animal. Durant les expérimentations, une attention particulière sera portée aux points limites nécessitant une euthanasie de l’animal.
2. Réduction
Ce projet a une durée de 5 ans, et est dispensé une fois par an. Chaque année, l’effectif est volontairement limité à 24 étudiants répartis en 4 groupes afin de tenir compte des exigences liées à la surface d’expérimentation de la pièce dédiée à l’hébergement en cage à métabolisme. Les résultats de chaque groupe seront analysés séparément. Ce projet nécessite 6 souris par groupe d’étudiants, soit un total de 120 souris (4 groupes d’étudiants x 6 souris par groupe x 5 ans). Par ailleurs, nous limiterons le nombre d’animaux en réalisant les expériences sur un même animal, car les mêmes animaux fourniront les données contrôles (jours 10 et 11) et les données provenant du test au furosémide (jour 12). Par ailleurs, le traitement au furosémide des animaux durant une journée n’entraîne aucun phénotype dommageable. En conséquence, tous les animaux pourront être réutilisés comme animaux de réforme, ou pour d’autres types de séances de travaux pratiques (démonstration de la préhension/contention d’animaux, …).
3. Raffinement
Préalablement à leur hébergement en cages à métabolisme, les animaux en provenance du fournisseur agréé subiront une période d’acclimatation de 7 jours en stabulation (accès libre à la nourriture et à de l’eau filtrée) dans des cages ventilées (maximum 5 animaux par cage) dans les locaux de l’établissement utilisateur, et selon les normes en vigueur dans cet établissement utilisateur (température de 22-24 °C, éclairage de 7h à 19h, régime standard, litière : rafle de maïs, change une fois par semaine). Par ailleurs, l’environnement des animaux sera enrichi avec du nid végétal et des cylindres en carton. L’hébergement en cages à métabolisme sera lui aussi réalisé dans l’établissement utilisateur, et selon les mêmes normes que celles liées à l’hébergement en cages ventilées (température de 22-24°C, et éclairage de 7h à 19h). Par ailleurs, la détermination quotidienne du poids, de l’apparence physique et du comportement des animaux durant leur hébergement en cages à métabolisme nous permettra de définir les points limites nécessitant une euthanasie de l’animal. L’ensemble des expériences sera mené en présence de personnels hautement qualifiés dans des locaux d’hébergement respectant les standards en vigueur. Le taux d’encadrement des étudiants sera d’un enseignant par groupe d’étudiants (soit 6 étudiants), ce qui est élevé dans les conditions standards de travaux pratiques (1 enseignant pour 20 étudiants). Cela permettra d’assurer une vigilance constante sur la mise en œuvre des bonnes pratiques d’expérimentation par les étudiants.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Nous avons choisi de mener nos expériences chez la souris en raison de l’existance de nombreuses données publiées dans la littérature concernant les effets du furosémide sur la fonction rénale de ces animaux. Nous utiliserons des souris adultes jeunes âgées de 8-10 semaines dans le but d’évaluer les effets du furosémide sur le phénotype rénal à un stade pour lequel la fonction rénale n’est pas physiologiquement altérée par l’âge.