Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 2024-06-28 00:00:00
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-685609)
Contaminées par du chlordécone et d’autres polluants persistants pendant leur gestation, huit brebis subissent quinze prises de sang sur animal vigile étalées sur 150 jours, avec des couches en tissu posées toutes les quatre heures pour récolter leurs fèces. Leurs agneaux sont séparés d’elles dès la mise-bas, puis prélevés à leur tour huit fois entre la naissance et le sevrage. 24 ovins vont être utilisés en tout, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger, tous tués pour prélever les tissus et mesurer la distribution des polluants. Le porteur présente ces données comme le paramétrage d’un modèle informatique qui permettra « à terme » de remplacer une partie de l’expérimentation animale dans ce domaine.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Note de l'OXA. Cette question est celle du formulaire européen de résumé non technique. Elle est posée au laboratoire qui demande l'autorisation, et sa réponse est écrite avant que la première procédure commence (arrêté du 1er février 2013, art. 5). Ces objectifs servent à justifier l'utilisation des animaux devant le comité d'éthique. Aucun document public ne dira ensuite s'ils ont été atteints : la directive permet aux États de faire mettre à jour le résumé avec les résultats de l'appréciation rétrospective (directive 2010/63/UE, art. 43), la base européenne prévoit de les recevoir, et aucune entrée française n'en porte (base ALURES).
Certains territoires métropolitains ou Antillais sont durablement contaminés par des polluants persistants. Sur ces territoires, la production de denrées alimentaire comme l’élevage, pose un risque sanitaire pour la population. Afin de proposer des stratégies d’élevage (conditions et temps d’attente) permettant une diminution de la concentration de polluants dans la viande, c’est à dire une décontamination des animaux permettant la production de denrées saines en zone contaminée, de nouveaux modèles informatiques sont aujourd’hui développés pour prédire les temps de décontamination nécessaires. Ces modèles sont des modèles toxicocinétiques à compartiments basés sur la physiologie (modèle PBPK). Ces modèles permettront également à moyen terme de remplacer une partie de l’expérimentation animale par une prédiction in silico (par informatique). En attendant, le paramétrage de ces modèles nécessite l’obtention de données telle que la capacité de l’animal à éliminer la molécule ou encore la distribution de la molécule dans l’organisme selon les différents stades physiologiques de l’animal. La présente demande vise à obtenir ces données de paramétrage chez la brebis gestante et ensuite en lactation, et également les données concernant le tranfert de polluant vers l’agneau durant la gestation et la lactation, afin de connaître sa charge à la naissance et au cours de ses premières semaines de vie avant le sevrage. L’objectif sera de comparer ces données aux données de la littérature obtenues chez le mouton adulte non gestant non lactant afin de mieux comprendre l’effet du statut physiologique dans le comportement des molécules au sein de l’organisme et ainsi affiner le modèle.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Note de l'OXA. Le formulaire européen demande les bénéfices « susceptibles de découler » du projet. Il appelle donc une projection, et il l'obtient : ce que le laboratoire écrit ici est ce qu'il espère, avant d'avoir commencé. Deux chercheuses ont repris six corpus d'études précliniques déjà menées et pesé les dommages réellement infligés aux animaux contre les bénéfices cliniques réellement obtenus : moins de 7 % de ces études ressortaient défendables (Pound et Nicol, 2018).
Ces résultats permettront l’acquisition de connaissances sur le transfert de polluants entre la mère et le jeune au cours de la gestation et de la lactation, ainsi que sur l’élimination de polluants chez l’ovin durant la lactation et chez l’agneau en croissance (jusqu’au sevrage). Cela permettra d’obtenir des paramètres nécessaires pour développer un modèle toxicocinétique à compartiments basé sur la physiologie (PBPK), simulant le transfert de ces polluants chez les ovins. Ce modèle prédira le temps minimal de décontamination des animaux d’élevage dans l’objectif de garantir la production de denrées animales saines dans des territoires contaminés.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Note de l'OXA. La formule « en règle générale » autorise une réponse générale, et c'est l'un des points sur lesquels les examens de qualité trouvent ces documents défaillants. Cruelty Free International a établi en 2018 que les résumés allemands et britanniques, les seuls examinés à ce jour, décrivaient mal ce qui est fait aux animaux et ce que ceux-ci pourraient éprouver (Taylor et al., 2018). L'adoption d'un modèle commun européen a nettement amélioré le premier point, à peine le second (Taylor et al., 2024).
Les animaux seront soumis à 2 types d’interventions : 1- Les prélèvements de sang sur animaux vigiles à t= 0, 8, 22, 36, 50, 64, 78, 90, 92, 94, 99, 113, 127, 141, 150 jours pour les mères. à t= 90, 94, 99, 105, 113, 127, 141, 150 jours pour les agneaux (avec t=90 le jour de la naissance des agneaux) 2- La pose de couches en tissu et la récolte de fèces aux même jours que les prélèvements de sang, toutes les 4 heures durant 24 h ou 12h maximum selon le jour de prélèvement .
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Note de l'OXA. C'est l'endroit du document où les animaux devraient apparaître, et c'est celui qui résiste. Cruelty Free Europe a mesuré en 2024 que cinq des six éléments attendus sur les dommages prévus progressaient depuis l'adoption d'un modèle commun européen. Les effets indésirables sont le sixième : 41 % des résumés allemands et 48 % des britanniques les décrivent complètement. Les auteurs relèvent aussi des effets présentés comme minimes sur des projets classés modérés ou sévères (Taylor et al., 2024). Ces deux pays sont les seuls dont les résumés ont été examinés. Les résumés français relèvent du même modèle européen, et leur qualité n'a jamais été mesurée.
Les quatre nuisances et stress identifiés sont : Le stress lié 1°) à la manipulation et la contention lors des différents prélèvements et 2°) à la douleur (celle d’une piqûre par une aiguille) suite à la ponction par aiguilles pour les prélèvements sanguins sur animal vigile. 3°) Le stress lié à la perte de volume sanguin lors des prélèvements. 4°) Le stress lié à l’utilisation de couches en tissu positionnées entre le bassin et les jarrets pour le prélèvement des fèces. En revanche, la dose de chaque contaminant employée est calculée pour être largement en deçà des seuils de toxicité. Elle n’entrainera donc pas d’effet toxique.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Note de l'OXA. Le formulaire demande de justifier ce sort, non de le décrire. L'analyse dommage-avantage que la directive impose au comité d'éthique porte sur « la souffrance, la douleur et l'angoisse » infligées aux animaux (directive 2010/63/UE, art. 38). Quand ce sort est la mise à mort, celle-ci ne figure donc pas parmi les dommages que le comité met en balance avec les bénéfices annoncés. L'OXA écrit « mise à mort » plutôt que « sacrifice », qui emprunte au registre du don consenti, ou « euthanasie », qui désigne une mort décidée dans l'intérêt de celui qui meurt.
Les animaux sont mis à mort. Cela permettra de prélever différents tissus afin de les analyser et d’obtenir des données sur les concentrations des différentes molécules étudiées et d’avoir ainsi des données sur la distribution de ces molécules au sein de le l’organisme de la brebis et de son jeune agneau.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Note de l'OXA. La directive demande au résumé « une démonstration de la conformité » aux exigences de remplacement, de réduction et de raffinement (directive 2010/63/UE, art. 43). C'est donc le demandeur qui démontre sa propre conformité, dans le document même qui sollicite l'autorisation. Cette démonstration peut prendre la forme d'une affirmation qu'aucune méthode de substitution n'existe, que le document n'a pas à sourcer. Ces trois exigences sont par ailleurs subordonnées à l'objectif du projet : elles cherchent à remplacer les animaux dans un projet donné, elles n'interrogent pas ce projet.
La contamination (et décontamination) des ovins gestants, lactants et le transfert mère-jeune des polluants est un champ d’étude qui est encore peu renseigné aujourd’hui et dont l’approche est rendue complexe en raison des spécificités de la physiologie des ruminants et des pratiques d’élevage mises en oeuvre. Ces interactions « ruminants-polluants » doivent être abordées in vivo dans la mesure où (i) nous ne connaissons pas les paramètres toxicocinétiques des molécules indiquées chez les femelles gestantes et lactantes et chez leur agneaux (ii) nous ne disposons pas de modèle in vitro ou ex-vivo ou in silico validé chez ces animaux et (iii) il n’existe pas à ce jour de modèle mathématique adéquat permettant de simuler le devenir des contaminants dans l’organisme chez ce type d’animal. Cependant, les résultats de ce projet permettront de collecter des données pour la création d’un modèle de transfert de chlordécone chez les ruminants, ce qui permettra à termes de remplacer l’utilisation d’animaux dans ce type d’étude. De plus ce type de modèle permettra par la suite la création d’outil d’aide à la décision qui pourra, sur le terrain, éviter l’abattage d’animaux non conformes devant être retirés de la chaîne alimentaire à cause d’un trop fort taux de polluants.
2. Réduction
Note de l'OXA. La réduction dont il est question ici porte sur le nombre d'animaux par groupe expérimental, calculé pour que l'analyse statistique tienne. Le total annoncé dans la fiche est une estimation portant sur une autorisation de cinq ans au maximum (code rural, art. R214-123) : il ne dit pas combien d'animaux seront effectivement utilisés, et il ne se rapporte pas à une année.
Nous réduirons le nombre d’animaux en expérimentation sur la base de (i) la répétabilité des mesures analytiques dans le domaine de l’analyse des polluants, (ii) l’expérience antérieure de l’équipe de recherche en termes d’écart type résiduels prévisibles pour les petits ruminants, et (iii) la prédictibilité du modèle basé sur la physiologie (modèle PBPK) précédemment développé chez l’ovin adulte non gestant non lactant. Le nombre d’animaux sera limité au maximum pour des raisons d’éthique. Un nombre de répétition de 8 brebis gestantes réparties en 2 groupes est nécessaire pour étudier les effets du transfert mère-jeune est jugés nécessaire et suffisant. Des brebis gestantes de jumeaux permettront d’avoir un nombre d’agneaux à naître suffisant pour étudier les différentes modalités d’allaitement. Un test unilatéral associé à ce choix de 8 brebis (soit n= 4 répétitions par modalités), avec une « taille de l’effet delta/sigma » de 2, a été effectué sur R afin de calculer la puissance de notre essai. Pour un alpha de 5%; le nombre de 4 répétitions, entraine une puissance de 0.8 ce qui est satisfaisant pour montrer un effet.
3. Raffinement
Note de l'OXA. Le raffinement nomme une amélioration technique de la procédure, sans dire ce qu'elle change pour l'animal qui la subit. La réglementation impose d'atténuer la douleur, dans une limite qu'elle inscrit elle-même : « pour autant que cela soit compatible avec la finalité de la procédure expérimentale » (code rural, art. R214-109). Ce qui reste de souffrance après cette limite est autorisé. Le raffinement ne porte par ailleurs que sur la procédure : les souffrances de la captivité elle-même, confinement, bruit, lumière, manipulations d'entretien, ne relèvent d'aucun des trois R.
Nous limiterons les interventions sur les animaux à des prises de sang de volumes limités et des poses ponctuelles de couches pour la récupération de fèces sur des périodes de 24h. Les animaux, ayant un comportement social, seront hébergés en collectif, conformément à la règlementation, en groupe de 2 minimum par boxes, dans une même pièce. Ils pourront donc se voir, se sentir et s’entendre. Des filets de foin seront positionnés dans les boxes pour favoriser la recherche de nourriture et enrichir le milieu. Les animaux seront habitués à la présence quotidienne des expérimentateurs pour développer une relation sociale routinière avec l’homme, et entrainés progressivement au port des couches. Les agneaux seront isolés de leurs mères après la mise-bas et élevés en parc collectif comme ce qui se pratique en élevage ovin laitier.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Note de l'OXA. Le dossier d'autorisation demande de justifier l'origine des animaux, leur espèce, leur nombre estimé et leur stade de développement (arrêté du 1er février 2013, art. 5). La justification attendue est technique : elle porte sur l'adéquation de l'espèce à l'objectif poursuivi. Ce que l'appartenance à une espèce autorise à faire subir à un individu est une question morale, et le formulaire ne la pose pas. L'appartenance à une espèce, prise seule, ne fonde pourtant pas de différence de statut moral entre des individus également capables de souffrir.
Ce projet concerne uniquement l’espèce ovine (jeune ovin en croissance), pour laquelle aucune information n’est disponible en termes de devenir de la chlordécone et autres polluants (mirex et polychlorobiphényl non dioxine like (PCB-NDL)) dans l’organisme en croissance. Cependant cette espèce, très présente aux Antilles est largement consommée par la population locale d’où l’intérêt de l’étudier. Nous pouvons également noter qu’un modèle basé sur la physiologie (modèle PBPK) a déjà été développé chez l’ovin adulte, il est donc intéressant et opportun de l’étendre à l’ovin en croissance. De plus l’ovin, espèce compatible avec les structures d’hébergement prévus, pourra plus généralement servir d’espèce modèle pour recueillir les données toxicocinétiques concernant les molécules étudiées chez le jeune ruminant en croissance. Dans le cadre de cette expérimentation, afin de s’assurer du bien-être des animaux, les ovins seront en effet hébergés dans des conditions respectant les recommandations indiquées dans la directive 2010/63/UE.