Recherche appliquée

18 chèvres vont être utilisées dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger, gardées en vie à l'issue et reversées sur d'autres projets de l'établissement. Elles sont vaccinées jusqu'à trois fois, écouvillonnées dans le nez, les yeux et le rectum tous les deux jours pendant deux semaines pour les vaccins vivants, puis saignées à la jugulaire plusieurs fois par an pendant cinq ans afin de constituer des stocks de sérum de référence. Le porteur retient la chèvre pour son volume sanguin, environ 2,5 litres chez un animal de 40 kilos, ce qui lui évite de recourir à des bovins, et prévoit de remplacer les animaux qui atteignent huit ans de vie en animalerie. Il affirme que le recours aux ruminants est "indispensable" et qu'aucune méthode in vitro ne donnerait des résultats équivalents, pour un projet qui produit avant tout des réactifs vendus aux laboratoires de diagnostic.

Objectifs

Pour contrôler les maladies animales, il faut pouvoir les détecter et avoir des vaccins qui protègent les animaux à risque. Pour détecter les maladies ou prouver l’efficacité d’un vaccin, il faut réaliser des tests de diagnostic en laboratoire, notamment des tests sérologiques pour la détection d’anticorps dans le sang. Les laboratoires ont besoin de sérum contenant des anticorps contre les maladies ciblées pour contrôler que les outils de diagnostic qu’ils utilisent sont performants et donnent des résultats fiables. Pour cela, nous vaccinons des chèvres avec des vaccins inoffensifs protégeant contre certaines maladies de ces animaux pour qu’elles produisent des anticorps que nous pourrons alors fournir aux laboratoires pour contrôler leurs tests de diagnostic sérologique. De plus, nous souhaitons tester au maximum deux nouveaux vaccins pour confirmer qu’ils sont inoffensifs et qu’ils permettent bien aux animaux de produire des anticorps protecteurs.

Bénéfices attendus

Avec ce projet, nous serons en mesure d’accompagner les laboratoires dans la production de résultats de diagnostic sérologique fiables contre des maladies de ruminants. Nous pourrons également évaluer et confirmer l’efficacité de nouveaux vaccins destinés à renforcer la protection de ces animaux. Ces avancées contribueront ainsi à un meilleur contrôle des maladies graves touchant les élevages de ruminants, tout en soutenant la santé animale et la performance des exploitations.

Procédures

Nous prévoyons de vacciner des chèvres trois fois maximum pour certaines procédures. 3 animaux seront utilisés par vaccin. Si, au cours du projet, certains animaux ne peuvent plus être suivis pour des raisons indépendantes des procédures réalisées, ils seront remplacés afin de maintenir un effectif de trois animaux par procédure. Le nombre maximal prévu est de six animaux par procédure, soit un total de 18 animaux sur l’ensemble du projet. Après vaccination les animaux seront observés attentivement (prise de température, état général de l’animal, inspection du site d’injection) et, dans le cas des vaccins vivants, des écouvillons nasaux, oculaires et rectaux seront prélevés tous les deux jours pendant 14 jours. Des prélèvements sanguins seront réalisés au niveau de la jugulaire à partir de six jours après la vaccination afin de vérifier la production d’anticorps. Une fois cette réponse immunitaire confirmée, des prélèvements complémentaires pourront être effectués en fonction des besoins. Ces collectes pourront avoir lieu plusieurs fois par an durant le projet afin de constituer des stocks de sérum de référence destinés au contrôle des tests diagnostiques. Pour les vaccins induisant une réponse immunitaire de courte durée, le protocole de vaccination pourra être renouvelé six mois après la dernière injection. Pour le test des nouveaux vaccins, la quantité d’anticorps sera mesurée un mois et deux mois après vaccination. Si la quantité d’anticorps détectée est faible, une deuxième injection de vaccin sera réalisée suivie du même programme d’échantillonnage.

Impact sur les animaux

Les vaccins utilisés dans ce projet présentent peu, voire pas d’effets indésirables connus. Néanmoins, et de manière exceptionnelle, certains symptômes peuvent apparaître comme une réaction au niveau du site d’injection, perte d’appétit, prostration, poil hirsute, vocalisation et une fièvre légère et passagère, voire des déjections nasales ou oculaires. Les manipulations (prélèvements sanguins, écouvillonnages, injections) peuvent entraîner du stress et de l’inconfort chez l’animal. Les prélèvements sanguins à la jugulaire peuvent entraîner une douleur légère liée à l'insertion de l’aiguille et parfois un petit hématome.

Devenir

En fin d’essai, c'est-à-dire après le dernier prélèvement sanguin, après concertation entre le vétérinaire, le responsable de projet et le responsable de l’animalerie, les animaux seront gardés en vie au sein de notre établissement. Les animaux pourront être repositionnés sur un autre projet soit de classe légère ou modérée, dans la mesure où ce projet n’interfère pas avec le premier.

Remplacement

Les maladies ciblées dans ce projet affectent exclusivement les ruminants au sein des élevages. Le recours à des ruminants dans l’étude est donc scientifiquement justifié et ne peut être remplacé par une autre espèce. En effet, l’évaluation de l’efficacité du vaccin nécessite l’induction d’une réponse immunitaire dans l’espèce cible, car la nature, l’intensité et la spécificité de cette réponse varient selon les espèces. Seule l’espèce concernée permet d’obtenir des données fiables et directement transposables aux conditions d’élevage. De plus, la production d’anticorps spécifiques dirigés contre l’antigène étudié, destinés au développement et à la validation d’outils diagnostiques sérologiques, doit être réalisée chez des ruminants afin de garantir la pertinence biologique et la validité des résultats. Ainsi, l’utilisation de ruminants est indispensable pour répondre aux objectifs scientifiques et sanitaires du projet, et aucune méthode alternative in vitro ou sur une autre espèce ne permettrait d’obtenir des résultats équivalents et applicables sur le terrain.

Réduction

Pour les productions d’anticorps, l’espèce choisie est la chèvre. Son volume sanguin est suffisamment important (environ 2.5L pour un animal de 40kg), permettant d’obtenir une quantité suffisante de sérum en termes de volume et de diversité nécessaires pour valider des kits de diagnostic, répondre aux demandes des laboratoires de diagnostic et avoir une première confirmation de la qualité d’un nouveau vaccin. Si pendant les 5 ans du projet, ces animaux arrivent à la durée maximale de 8 ans de vie au sein de l’animalerie ou meurent pour des raisons indépendantes aux inoculations prévues, ils seront remplacés, avec un maximum de 6 caprins par procédure. Le nombre maximum de caprins utilisés pour ce projet est donc de 18 animaux.

Raffinement

Pour les animaux de rente, le raffinement consiste à une habituation à la manipulation pendant quelques semaines avant la réalisation des prélèvements. L’animal est amené régulièrement dans l’espace dédié au prélèvement et à la manipulation sans réalisation de prélèvement, afin de l’habituer. Lorsque l'animal s'est familiarisé avec le processus, la manipulation ne provoque plus de réaction de stress, permettant ainsi de réaliser les prélèvements sanguins ou par écouvillon dans un contexte serein et favorable. Pour réduire le stress et favoriser l’expression de comportements naturels, des mesures d’enrichissement adaptées sont mises en place : accès à des dispositifs permettant l’exploration et le jeu (ex. plateformes ou objets stables sur lesquels les animaux peuvent grimper), ainsi qu’un enrichissement alimentaire sous forme de friandises ou de distributions alimentaires variées, utilisées de manière ludique pour stimuler l’intérêt et l’activité des animaux durant les procédures. Pendant toute la durée des procédures, l’état de santé des animaux sera surveillé quotidiennement. Après chaque injection vaccinale ou prélèvement, une surveillance renforcée sera mise en place : les animaux seront observés trois fois par jour pendant trois jours, ou jusqu’à la disparition d’éventuels symptômes. Un suivi attentif sera ensuite maintenu pendant sept jours, ou jusqu’au retour à un état normal si des signes apparaissent. Au-delà de cette période de vigilance accrue, les animaux continueront à faire l’objet d’une observation quotidienne durant toute la durée de leur hébergement comme l’exige la réglementation. En cas d’anomalie, le vétérinaire référent sera immédiatement contacté et les mesures appropriées seront appliquées selon ses recommandations. Si nécessaire, il pourra intervenir dans un délai inférieur à 24 heures pour réaliser un examen complet de l’animal.

Choix des espèces

Les espèces atteintes au sein des élevages par les maladies ciblées dans ce projet sont les bovins, les caprins et les ovins. Il est nécessaire de générer une réponse immunitaire chez des ruminants (au moins une de ces espèces) afin d’évaluer l’efficacité du vaccin et d’obtenir des anticorps spécifiques de l’antigène utiles pour le diagnostic de ces maladies. Les chèvres peuvent être utilisées pour produire des sérums de référence pour les maladies caprines et bovines d’intérêt pour nous. Le volume sanguin est suffisamment important pour permettre d’obtenir les quantités nécessaires de sérums de référence pour nos projets. Nous avons donc choisi les caprins pour tous nos projets, ce qui nous permet de satisfaire nos besoins sans avoir des recours à des vaches et d’autres bovins. Les animaux sont âgés de 1 à 2 ans à l’arrivée dans l’animalerie et sont au stade adulte, car le système immunitaire est mature et présente un atout pour une réponse immunitaire efficace.

Déjà utilisés dans d'autres projets de l'animalerie et destinés à l'être encore, 29 chats sont soumis à des procédures d'un niveau de souffrance léger, sans mise à mort à l'issue. Chacun porte un collier équipé d'un boîtier de 30 grammes, reçoit une brume de phéromone de synthèse ou de placebo, subit trente minutes de trajet en voiture, dix minutes d'attente en caisse au milieu d'odeurs et de cris de chats et de chiens, puis dix minutes de consultation vétérinaire. Le porteur liste l'agitation, la peur, l'hypersalivation, les vomissements, la diarrhée, les blessures en cas de mouvement brusque, et l'inconfort du collier avec risque de patte ou de bouche coincée. Il affirme qu'aucune méthode de remplacement n'est envisageable et rappelle que l'habituation à la caisse, reconnue efficace, demande un travail que les propriétaires appliquent rarement, ce que le produit testé est censé contourner.

Objectifs

Les chats domestiques (Felis catus) sont très sensibles aux changements d’environnement. Le transport en voiture et la consultation vétérinaire sont souvent vécus comme des situations particulièrement stressantes, provoquant miaulements, agitation, éliminations inappropriées ou refus de manipulation. Ce stress peut non seulement compliquer l’examen clinique, mais aussi modifier certains paramètres physiologiques, rendant leur interprétation plus difficile. Les méthodes traditionnelles de réduction du stress, comme l’habituation à la caisse de transport ou les techniques de manipulation douce, bien que reconnues comme efficaces, nécessitent une mise en place sur le long terme et une application rigoureuse. En pratique, ce conditionnement prolongé est rarement appliqué, et l’appréhension associé à cet évènement constitue une cause fréquente de retards ou d’abandons de soins vétérinaires. L’utilisation de phéromones a déjà été montré comme une option efficace pour aider les chats dans ces situations, depuis des années, avec les produits commercialisés autour du monde. Des nouvelles phéromones sont étudiées en ce moment, ainsi que des nouvelles formulations plus adaptés à chaque situation. Ce projet a pour but d’évaluer l’efficacité des analogues structurels des phéromones apaisantes afin d’améliorer le bien-être des chats face à des situations nouvelles et potentiellement stressantes intégrant l’ensemble des étapes d’une visite vétérinaire, du transport en voiture à l’examen vétérinaire.

Bénéfices attendus

Cette étude vise à proposer une solution naturelle, non invasive et sans danger pour aider les chats à mieux gérer le stress associé aux situations peu familières qu’ils peuvent rencontrer au cours de leur vie. Parmi celles-ci, le transport en voiture et la visite vétérinaire constituent un enchaînement d’événements particulièrement stressants. Les réactions de stress peuvent être délétères pour le pronostic de l’animal, altérer la qualité des soins, compliquer la récupération et rendre la manipulation plus difficile. Le transport est reconnu comme une source importante de stress chez le chat domestique, pouvant entraîner des comportements négatifs, nuire au bien-être, et compliquer les visites vétérinaires. Ce stress est l’une des principales raisons pour lesquelles les propriétaires retardent ou évitent les consultations, compromettant ainsi la santé de l’animal . Les méthodes traditionnelles de réduction du stress, telles que l’entraînement progressif ou le renforcement positif, bien qu’efficaces, nécessitent un investissement important en temps et en régularité, limitant leur application au quotidien. Des solutions alternatives comme l’utilisation de phéromones ont montré des résultats concluants. Par exemple, il a été démontré l’effet apaisant d’un analogue de la phéromone faciale féline lors de transports, avec une diminution significative des simptomes tels que vomissements, défécation, vocalisations et une amélioration globale du comportement observée par les conducteurs. De même, il a été mis en évidence l'effet apaisant d’une phéromone, associé à une réduction de la fréquence cardiaque et une augmentation des comportements de repos pendant un transport prolongé. Si les résultats de notre étude confirment l’efficacité des produits testés, cela pourrait permettre de formuler des recommandations visant à améliorer l’expérience globale de la visite vétérinaire, depuis le transport jusqu’à la consultation. Un tel outil contribuerait non seulement au bien-être de l’animal, mais aussi à faciliter l’accès aux soins en réduisant l’appréhension des propriétaires face à ces événements souvent perçus comme difficiles, tout en optimisant la manipulation et le diagnostic vétérinaire.

Procédures

Les animaux ne seront soumis à aucune intervention invasive ni prélèvement biologique au cours de cette étude. Le protocole repose exclusivement sur l’observation comportementale dans un contexte réaliste de transport et consultation vétérinaire, auxquels les chats domestiques peuvent être confrontés dans leur vie quotidienne. Les interventions prévues dans la première expérience consistent en mettre sur le chat un collier portant un boitier de 30 gr servant à relever les paramètres cardiaques comme mesure du stress, en un transport en voiture de 30’ précédée par l’application d’un produit (analogue de phéromone faciale féline ou placebo) sous forme d’une brume sur le chat, dans la caisse de transport et sur le siège passager du véhicule, en une attente de 10’ dans sa caisse avant de subir une consultation vétérinaire durant aussi 10’. Dans la deuxième expérience, un test comportemental remplacera la consultation vétérinaire étant le stress du seul transport la cible de l’étude. Pour cela, le chat sera filmé dans une salle pourvue de ressources pendant 20’. Les expériences étant deux, les chats feront le transport en voiture 2 fois mais espacées d’au moins 4 mois.

Impact sur les animaux

Les nuisances ou effets indésirables attendus sur les animaux incluent un état de stress associé : au transport en voiture qui pourrait causer de l’agitation, de la peur, une respiration accelerée, hypersalivation, vomissement, diarrhée, coups et blessures en cas de mouvements brusques ; à l’attente dans la caisse de transport et dans une salle peu familière ainsi que l’exposition aux odeurs et sons d’animaux (chats et chiens) diffusés dans la « salle d’attente »; à la contention par le vétérinaire lors de l’examen clinique. Inconfort causé par le collier, avec démangeaisons au niveau du cou et possibles lésions cutanées, coincement de la bouche et/ou d’une patte dans le collier avec blessure.

Devenir

A la fin de ce projet, l'ensemble des individus est conservé en vie afin d'être réutilisé pour de futurs projets de recherche.

Remplacement

Le but de cette étude est d’étudier les effets des phéromones apaisantes sur le comportement des animaux, il est donc nécessaire de la réaliser sur des animaux vivants, dans ce cas des chats. Plus précisément, cette étude est conçue pour tenter d'avoir un véritable impact sur la vie des chats domestiques, en développant un produit potentiel qui pourrait améliorer leur qualité de vie dans des conditions réelles. Par conséquent, aucune méthode alternative ou de remplacement ne peut être envisagée.

Réduction

29 chats seront inclus au total dans ce projet. 28 chats (2 groupes de 14 chats) participeront à l’expérience et un chat sera inclus dans un pré-essai. Ce nombre de chats est présent dans notre animalerie et la possibilité de travailler avec uniquement ces animaux nous permet d’éviter l’utilisation de nouveaux animaux. Aussi, ces mêmes chats sont réutilisés dans d’autres projets (réduction). Afin de vérifier qu'un tel effectif serait suffisant pour obtenir des résultats statistiques robustes, nous nous sommes basés sur des résultats obtenus dans notre institut sur l'effet de la phéromone apaisante dans une expérience précédente avec la même espèce et sur une autre impliquant des lapins. Des articles scientifiques sur le stress lié au transport des chats a été aussi considéré pour ce calcul. Nous avons pu calculer que selon le paramètre mesuré, un effectif entre 22 et 90 chats serait suffisant pour obtenir une puissance statistique de 80%. Nous avons décidé d'inclure un effectif de 28 chats qui est cohérent avec les évaluations statistiques réalisées sur une selection de parametres que nous consideront d’intérêt dans le contexte étudié. Des précautions méthodologiques seront mises en place afin de limiter les biais expérimentaux, notamment une répartition aléatoire des traitements ainsi qu’une procédure en aveugle lors de leur application. Aussi, les personnes effectuant les observations et les analyses ne sauront pas à quel groupe appartient chaque animal au moment de l’étude.

Raffinement

Les chats sont hébergés dans leur chatteries habituelles, identiques et accueillant des groupes de 7-8 chats. Elles mesurent 25 m², avec une partie interne et une autre externe. Toutes les ressources nécessaires au bien-être animal sont présentes : gamelles d’eau et de nourriture, litières en N+1, des jeux, des plateformes de différentes auteurs, des cachettes, des paniers, et plusieurs enrichissements environnementaux. Concernant l’expérience, la présence dans la caisse de transport sera au maximum de 50 minutes, dont une présence dans la voiture d’environ 30 minutes. Un collier (smart collar PetPace) sera utilisé pour collecter de données physiologiques liées à l’activité cardiaque; cette approche, en plus d'apporter des informations scientifiques au projet, remplace des procédures potentiellement plus invasives, telles qu'une prise de sang pour l'évaluation hormonale. Les chats sont habitués aux manipulations. Des séances d’habituation à la caisse de transports et au collier sont prévues pour limiter le stress des procédures, faire accepter le dispositif et avoir des données fiables. Les protocoles d’habituation sont rédigés et suivi par le personnel de la sbea. La voiture aura une température contrôlée autour de 21 à 23°C. Le trajet inclura des routes peu empruntées, la conduite sera douce, et tout bruit sera évité. 1 chat sera impliqué dans un pré-essai afin de tester la réaction au transport, la conduite à tenir pour soulager le chat (s’arrêter, calmer le chat avant de rentrer) et détecter tout type d’imprévus causé par le collier (grattage excessif au niveau du cou, risque de coincement de la patte et/ou de la bouche, perte du collier). Chaque chat subira le transport 2 fois mais à un intervalle d’au moins 4 mois, ce qui permettra une récupération du stress. Tout le personnel en charge des manipulations est formé et habitué à travailler avec des chats. La consultation vétérinaire est réalisée par le vétérinaire de l’établissement. La salle de test où le chat sera laissé pendant 20’ (test comportemental de la deuxième expérience) comprendra des ressources familières pour permettre le comportement naturel du chat.

Choix des espèces

L’objectif est d’évaluer l’effet d’analogues structurels de la phéromone apaisante sur le comportement et la physiologie du chat dans des situations potentiellement stressantes, telles que le transport ou une consultation vétérinaire. Pour cette raison, il est nécessaire de tester les produits sur l’espèce cible soit le chat dans notre cas. L’ensemble des individus impliqués dans cette étude seront des adultes de 1 à 16 ans. Même si ce choix répond à la disponibilité actuelle de l’animalerie, cette large tranche d’âge permet aussi de représenter la population du chat domestique et ses problématiques d’adaptation dans des différentes situations.

Génétiquement modifiées pour reproduire une ataxie neurodégénérative rare, une partie des souris développe des troubles moteurs légers dès huit jours. 4 392 animaux vont être utilisés dans des procédures classées légères, pour maintenir et génotyper cette lignée modèle de la maladie AOA1. Le génotypage repose sur un prélèvement de tissu invasif, réalisé une fois par animal sur souris vigile. Selon leur patrimoine génétique, certaines sont orientées vers d'autres projets de recherche, les autres tuées faute de pouvoir être réutilisées ou placées.

Objectifs

L’Ataxie Apraxie Oculomotrice de type 1 (AOA1) est une maladie neurodégénérative rare caractérisée par une dégénérescence d’une zone cérébrale spécifique. Cette pathologie est liée à une mutation génétique qui conduit à une incapacité à réaliser des mouvements volontaires et un handicap moteur sévère. La mise au point d’un traitement pour l’AOA1 est cruciale pour les patients atteints de cette maladie qui ne bénéficient actuellement d’aucune solution thérapeutique. Il existe un modèle murin de la pathologie pertinent pour l’évaluation de stratégie thérapeutique avant leur évaluation chez l’Homme. L’objectif du projet sera de réaliser des prélèvements invasifs de tissu permettant de connaitre le patrimoine génétique des animaux produits afin de maintenir la colonie de ce modèle murin génétiquement modifié, pour permettre par la suite de tester différentes approches thérapeutiques dans des projets dédiés.

Bénéfices attendus

L’Ataxie Apraxie Oculomotrice de type 1 (AOA1) est une maladie neurodégénérative rare de la famille des ataxies cérébelleuses autosomiques récessives. Ce trouble neurologique héréditaire se caractérise par une ataxie cérébelleuse à début précoce (âge moyen d’apparition : environ 4 ans) et entraine un handicap moteur sévère, avant l’âge de 25 ans. A ce jour, il n’existe aucun traitement curatif pour les patients. Le bénéfice du projet sera de connaitre le patrimoine génétique des animaux que nous produisons afin de maintenir une lignée de souris génétiquement modifiées, modèle de cette pathologie. Ceci nous permettra de générer des lots expérimentaux pour différents projets de recherche portant sur l’évaluation de nouvelles stratégies thérapeutiques pour le traitement de l’AOA1. A plus long terme ce projet pourrait donc permettre d’améliorer les connaissances sur l’AOA1 et contribuer à l’amélioration de la prise en charge des patients.

Procédures

Afin de connaitre leur patrimoine génétique tous les animaux produits auront un petit prélèvement de tissu, effectué une fois sur animal vigile (moins d’une minute par animal). Dans de très rares cas (problème technique), un deuxième prélèvement pourra être nécessaire (1 fois, moins d’une minute par animal, vigile). Une partie des animaux présentera des troubles moteurs légers détectables à partir de l’âge de 8 jours mais qui ne présenteront pas d’impact significatif sur l’animal.

Impact sur les animaux

Les animaux ressentiront une légère et brève douleur au moment du prélèvement pour connaitre leur patrimoine génétique. Il existe également un risque de saignement à la suite du prélèvement. Ils pourront ressentir un stress lors des manipulations. Une partie des animaux du projet peuvent présenter des légers troubles moteurs liés à leurs modifications génétiques (phénotype dommageable) observables à partir de l’âge de 8 jours, mais qui n’entrainent pas d’effets indésirables significatifs.

Devenir

En fonction de leur patrimoine génétique, une partie des animaux sera dirigée vers d’autres projets de recherche, en utilisation continue. Tous les autres animaux seront euthanasiés car ils ne pourront pas être réutilisés dans d’autres projets ou replacés du fait de leur modification génétique.

Remplacement

Il a été démontré qu’un modèle cellulaire d’AOA1 peut être généré à partir de cellules souches de patients. Bien que ce modèle cellulaire constitue un outil pertinent pour l’étude des altérations moléculaires et cellulaires associées à la pathologie, il présente des limitations majeures. En particulier, il ne permet pas de reproduire le phénotype ataxique ni d’évaluer les conséquences fonctionnelles et comportementales de la maladie. Dans ce contexte, le recours à un modèle animal apparaît indispensable afin de reproduire de manière adéquate les troubles moteurs et neurodégénératifs observés chez les patients. Le tissu nerveux ne pouvant être accessible chez l’Homme et les essais thérapeutiques ne pouvant être testés directement chez l’Homme, il est essentiel de recourir à des études pré-cliniques chez l’animal. La souris représente un modèle pertinent pour approfondir la compréhension des mécanismes physiopathologiques de l’AOA1 et pour évaluer des approches thérapeutiques, notamment de thérapie génique, susceptibles de ralentir la progression de la maladie et potentiellement la guérir. Étant donné qu’un modèle de l’AOA1 associé à la mutation génétique que nous voulons cibler a déjà été créé chez cette espèce, ce modèle constitue un outil particulièrement pertinent et approprié pour nos études de recherche.

Réduction

Du fait de la nature du projet (prélèvement pour connaitre le patrimoine génétique des animaux), il n’y aura pas de tests statistiques. Nous piloterons notre élevage afin de ne produire que le nombre d’animaux nécessaires pour correspondre à nos besoins stricts pour les projets de recherche et le maintien de notre lignée. Nous prévoyons donc de produire au cours du projet un nombre total maximal de 4392 souris afin de constituer nos cohortes d’étude (contrainte de génotype). Nous contrôlerons les accouplements pour générer uniquement les animaux nécessaires, ainsi, en fonction de nos besoins expérimentaux au cours des 5 années du projet il est possible que nous produisions finalement moins que ce nombre maximal. Les animaux produits seront en utilisation continue dans des projets d’évaluation de thérapies dans lesquels les effectifs par groupe auront été définis à l’aide de tests statistiques afin d’inclure uniquement le nombre d’animaux nécessaires pour obtenir des résultats statistiquement exploitables. De plus nous inclurons dans ces groupes les mâles et les femelles, en effet nous pouvons utiliser les 2 sexes dans ce modèle murin préclinique car la mutation d’intérêt n’est pas liée au sexe, ce qui limitera le nombre d’animaux à produire.

Raffinement

Les animaux seront hébergés dans des conditions conformes à la réglementation en vigueur pour l’espèce. Ils auront à disposition de l’eau et de la nourriture à volonté, ainsi qu’un enrichissement de leur environnement (bâtonnet de bois à ronger et coton pour nidifier au minimum). Les animaux en provenance d’un fournisseur bénéficieront d’une semaine d’acclimatation avant leur mise en accouplement. Une attention particulière est portée aux animaux afin de garantir leur bien-être grâce à une surveillance quotidienne par la zootechnie, la mise en place de points limites et de soins adaptés. Le prélèvement pour le génotypage est de la plus petite taille possible et réalisé sur de jeunes animaux (moins de sensibilité à la douleur et cicatrisation rapide), c’est un geste rapide et maitrisé qui est réalisé par des personnes compétentes dans un endroit calme dédié. Les petits sont replacés rapidement avec leur mère et le reste de la portée pour leur redonner un environnement réconfortant. Ils sont surveillés immédiatement puis environ 30 minutes après pour s’assurer de l’absence de saignement et de la bonne prise en charge par la mère. Le matériel est propre et désinfecté entre chaque animal pour limiter le risque d’infection et de contamination croisée. Une partie des animaux pourra présenter des troubles moteurs en lien avec leur modification génétique (phénotype dommageable). Ces troubles ne seront réellement impactant qu’à partir de l’âge de 200 jours environ or les animaux concernés seront transférés dans des projets dédiés aux expérimentations dès l’âge de 21 jours environ. Les techniques de raffinement spécifiques à ce phénotype dommageable sont donc prévues exclusivement dans les projets expérimentaux.

Choix des espèces

Nous avons besoin d’un modèle animal fiable pour reproduire et étudier la pathologie et pertinent pour tester par la suite différentes approches thérapeutiques. La souris est un modèle bien connu, son génome est connu et de nombreux outils sont disponibles pour le modifier, permettant ainsi d’introduire des mutations génétiques spécifiques pour la modélisation de pathologies humaines. Dans notre cas cette espèce représente un modèle pertinent puisqu’un modèle de l’Ataxie Apraxie Oculomotrice de type 1 (AOA1) associé à la mutation génétique que nous voulons cibler a été créé chez cette espèce. Cette lignée permet de reproduire les signes observés chez les patients atteints d’AOA1. Le prélèvement pour connaitre le patrimoine génétique des animaux sera réalisé à l’âge de 7 à 10 jours. Cet âge nous permettra de bénéficier de la cicatrisation rapide observée chez les jeunes animaux et de connaitre très tôt leur génotype afin de les transférer dans les projets d’expérimentation à partir du sevrage.

64 320 souris vont être utilisées pour maintenir et génotyper des lignées destinées à l'étude des maladies rénales chroniques, dans des procédures classées légères. Chacune subit un unique prélèvement de queue de quelques secondes, seul acte du protocole. Le porteur présente ces modifications génétiques comme sans conséquence dommageable pour les animaux. Les souris sont tuées après reproduction ou quand leur génotype ne correspond pas, celles qui conviennent partant vers d'autres projets où elles seront mises à mort.

Objectifs

Les maladies rénales chroniques représentent un problème de santé publique majeur, touchant 850 millions de personnes dans le monde. Ces pathologies, d'origine génétique ou acquise, se caractérisent par une altération progressive et irréversible de la fonction et de la structure du rein. Actuellement, il n'existe aucun traitement permettant d’enrayer efficacement cette progression, qui conduit souvent à l’insuffisance rénale terminale, nécessitant alors une dialyse ou une greffe rénale. Cette absence de solutions thérapeutiques curatives souligne la nécessité de mieux comprendre les mécanismes biologiques et cellulaires impliqués dans la progression des MRC. L’objectif de ce projet est de permettre la création et/ou le maintien de lignées murines transgéniques, avec ou sans phénotype rénal observable, afin de fournir des modèles pertinents pour l’étude de ces mécanismes. Ces lignées sont essentielles pour identifier les voies physiopathologiques impliquées et, à terme, développer de nouvelles approches thérapeutiques. Les modifications génétiques concernées n’entrainent pas de conséquences dommageables pour les souris. Ces modifications génétiques sont deteminées par génotypage qui consiste en l’analyse de l’ADN pour identifier la présence, l’abscence ou la modification d’un gène.

Bénéfices attendus

Ce projet a pour but de générer et de maintenir des modèles de souris permettant l’étude des mécanismes de maladies rénales chroniques pour lesquelles aucun traitement n’est actuellement disponible. Une meilleure compréhension de mécanismes responsables de la destruction du rein permettra d’améliorer les traitements à destination des patients atteints par ces maladies.

Procédures

Prélèvement de queue sur animal vigile (1 fois, 5sec).

Impact sur les animaux

La contention et le prélèvement peuvent provoquer un stress et une souffrance légère et transitoire de quelques minutes.

Devenir

Les animaux sont mis à mort après accouplement ou si leur génotype n’est pas celui attendu. Les animaux de génotype souhaité mais non utilisés pour le maintien des colonies feront l'objet d'une utilisation dans le cadre de projets d'expérimentations faisant l’objet d’une demande d’autorisation séparée et seront mis à mort au terme de cette utilisation.

Remplacement

Compte tenu de l’absence de modèle cellulaire complet, il n’est pas possible du substituer des approches in vitro aux modèles murins impliqués dans ce projet. Il n’y a pas de remplacement possible fiable à l’heure actuelle pour le prélèvement de queue.

Réduction

Les stratégies d’accouplements ont été calculées selon les expériences antérieures pour générer un nombre suffisant d’animaux pour mener à bien les projets de recherche. Le nombre d’animaux est justifié par l’utilisation de différents fonds génétiques car nous avons montré que le fond génétique est un déterminant essentiel des lésions rénales. D’autre part, les deux sexes sont étudiés car la sensibilité aux lésions rénales peut différer entre mâles et femelles.

Raffinement

Les souris seront surveillées par les membres qualifiés de l'animalerie et par les responsables du projet afin de détecter tout signe de douleur ou de maladie. Tout comportement anormal sera directement communiqué à la personne en charge du projet. Des points limites spécifiques ont été établis. Tout animal en souffrance recevra un soin adapté (anti-septique, compression). Si les points limites établis sont atteints sans possibilité de soulager l’animal, celui-ci sera mis à mort.

Choix des espèces

La souris permet l’étude d’animaux génétiquement modifiés particulièrement informatifs pour la compréhension des mécanismes physiopathologiques. De plus, de nombreux outils d’analyses ont été développés et bien caractérisés dans cette espèce animale. Afin de permettre l’identification des souris et l’analyse de leurs gènes avant leur sevrage, le tatouage des coussinets et le prélèvement de queue sont effectués entre 7 et 10 jours de vie.