Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 19/09/2023
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-266903)
40 rats vont être utilisés, tous tués à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance modéré. Ils subissent une chirurgie d’implantation d’électrodes dans le cerveau avec injection d’un vecteur viral, puis sont soumis à une restriction alimentaire les maintenant à 90 % de leur poids pour les pousser à explorer un dispositif en quête de nourriture, l’objet étant de cartographier l’activité du cortex rétrosplénial pendant la navigation spatiale. Le porteur les héberge individuellement et prévoit un retour à l’alimentation libre si la perte de poids dépasse 15 %. Il présente les retombées pour les maladies neurodégénératives comme une simple piste de réflexion issue de cette recherche fondamentale.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Les capacités d’orientation et de mémoire sont déficitaires chez les sujets vieillissant et les patients atteints de la maladie d’Alzheimer. Le cortex rétrosplénial est impliqué dans ces processus mnésiques et de navigation. et semble être une structure fondamentale pour s’orienter dans des environnements complexes. Ce projet permet de comprendre quelles informations de l’espace sont nécessaires aux activités neuronales du cortex rétrosplénial et également d’étudier l’influence de cette structure sur les autres aires cérébrales impliquées dans la navigation, notamment le cortex entorhinal médian. Ce projet, de nature fondamentale, ouvre des pistes de réflexions sur la nature des déficits de navigation inhérents aux maladies neurodégénératives qui affectent la mémoire.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Ce projet, de nature fondamentale, ouvre des pistes de réflexions sur la nature des déficits de navigation inhérents aux maladies neurodégénératives qui affectent la mémoire.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
Procédure comportementales : exploration libre à la recherche de nourriture suite à une privation contrôlée de nourriture; et procédures chirurgicales : implantation d’un système d’électrode avec l’injection d’un vecteur viral pour utiliser les outils d’inactivation neuronale pharmacogénétique. Tous les animaux subiront la procédure comportementale. 1 groupe de 20 animaux sera soumis à la procédure chirurgicale d’implantation des électrodes seule, et un 2ème groupe d’animaux sera soumis à la chirurgies d’implantation d’électrode et d’injection du vecteur viral.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
Afin d’assurer un contrôle individuel de la prise alimentaire, les animaux seront hébergés individuellement. Cette mesure particulière d’hébergement sera maintenue durant une période la plus courte possible et les rats ainsi isolés pourront avoir des contacts visuels, auditifs et olfactifs avec leurs congénères. Puisqu’un contrôle alimentaire est prévu pendant toute la durée de l’expérience afin de réduire le poids des animaux à 90% de leur poids initial, les rats sont pesés tous les jours afin d’éviter des réductions trop importantes de leur poids. Si la perte de poids d’un animal est trop importante (e.g. >15%), l’alimentation de l’animal devient ad libitum jusqu’au retour du poids désiré.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
La mise à mort permet le prélèvement des cerveaux afin de réaliser le marquage des neurones par cresyl violet ou thionine et d’identifier la position des électrodes d’enregistrement dans les structures d’intérêts. L’identification de la position des électrodes est cruciale car elle permet d’affirmer que les activités neuronales mises en évidence proviennent bien de la structure cérébrale ciblée dans le projet.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Ce projet repose sur les méthodes invasives d’enregistrement des neurones isolés ainsi que de l’inactivation de l’activité cérébrale chez le rat jeune adulte Long Evans, qui ne sont pas compatibles avec une approche chez le sujet humain, ni adaptables aux études in vitro ou de modélisation.
2. Réduction
Le projet comporte deux expériences qui utiliseront chacune 20 animaux. Ce nombre est indispensable pour deux raisons : 1-éviter statistiquement une variabilité inter-individuelle et 2-enregistrer un nombre suffisant d’activité neuronale pour effectuer des tests statistiques. L’analyse des résultats reposera essentiellement sur l’utilisation de tests statistiques paramétriques. Cependant, si la normalité des distributions n’est pas avérée, nous utiliserons des tests statistiques non paramétriques. Ce plan d’analyse statistique permettra d’exploiter les données si une variabilité inter-individuelle est toutefois présente tout en conservant des effectifs d’animaux réduits.
3. Raffinement
La tâche comportementale repose essentiellement sur le comportement spontané des rongeurs à explorer un environnement pour aller manger des granulés de nourriture. L’hébergement des animaux s’effectue dans le respect des protocoles d’enrichissement validés par la Structure de Bien-Etre Animal de notre établissement d’expérimentation. Puisqu’un contrôle alimentaire est prévu pendant toute la durée de l’expérience afin de réduire le poids des animaux à 90% de leur poids initial, les rats sont pesés tous les jours afin d’éviter des réductions trop importantes de leur poids. Si la perte de poids d’un animal est trop importante (e.g. >15%) ou en dessous de 90% de leur poids initial (points limites), l’alimentation de l’animal devient ad libitum jusqu’au retour du poids désiré. Une grille de score approuvée par la SBEA permet de s’assurer du bien-être animal pendant et en dehors des temps d’expérience. Cette grille permet d’évaluer si l’animal est dans un état normal ou en souffrance. L’arrêt des souffrances est prévu dans cette grille de score par des mesures d’observation attentive, des méthodes de soulagement, l’arrêt complet de l’expérience ou la mise à mort de l’animal. Les méthodes d’arrêt des souffrances se font de concert avec les zootechniciens de l’animalerie et sont reportées pour chaque animale sur une feuille de soins disponibles à l’animalerie.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
Le rat représente le modèle de choix pour les études du comportement spatial qui est à la base des protocoles comportementaux qui seront utilisés. Il présente d’excellentes performances dans les tâches de navigation spatiale. Enfin, 90% des études portant sur les bases neurales de la navigation réalisées chez le rongeur reposent sur l’utilisation du rat, ce qui permet de disposer d’une littérature abondante sur laquelle s’appuyer. Par ailleurs, j’ai réalisé la seule étude qui a mis en évidence les cellules bidirectionnelles du cortex rétrosplénial chez le rat. Utiliser le rat me permet de comparer les résultats issus de ce projet avec ceux précédemment obtenus. Le projet vise à établir le rôle de certaines structures cérébrales chez le rat jeune adulte. Afin de pouvoir comparer les résultats avec les travaux antérieurs, nous utiliserons des animaux qui auront 3 mois au début de l’expérience.