Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 06/03/2025
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-204014)
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
Notre projet vise à définir le gène de la lysine acetyl transferase 2B (KAT2B) comme un gardien de l’identité des hépatocytes et une cible pharmacologique pour contrecarrer la perte d’identité et de fonction hépatocytaire caractérisant les foies gravement lésés.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Le contrôle et le rétablissement de l’identité hépatocytaire émergent comme des voies thérapeutiques potentielles dans les formes graves d’atteinte à la fonction du foie. En identifiant un acteur pouvant être ciblé pharmacologiquement dans ce but, notre projet fera passer un cap permettant d’envisager plus sérieusement cette approche thérapeutique. D’autre part, en y adossant le développement d’organoïdes de foie humain, ce projet contribuera à fournir un modèle pertinent vis-à-vis de la recherche translationnelle.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
La totalité des souris sera soumise à différentes régimes ou traitements (6 protocoles de traitements ou régime) associés à des tests métaboliques et cages métaboliques (5 jours) afin de mesurer l’éfficacité des traitements provoquant la dysfonction hépatique et le rôle de nos gènes d’inéterets ou molécules pharmacologiques dans la physiopathologie hépatique. Ces tests métaboliques seront réalisés tous les 2 semaines sur les mêmes animaux afin de réduire le nombre d’animaux utilisés pendant une durée de 4 heures. La totalité des souris sera soumise à un prélèvement sanguin à la veine caudale lors des tests de tolérance au glucose afin de determiner l’insulinémie et la glycémie. La totalité des souris sera soumise à une injection intra péritonéale d’insuline et de pyruvate. Un prélèvement de sang par voie rétro-orbitaire d’une durée de 3 minutes sera réalisé sous anesthésie gazeuse à l’isoflurane à l’issu des protocoles expérimentaux. Nous utiliserons 60 souris de chaque génotype (wt/ko) pour les 5 procédures, traitées ou non avec l’activateur pharmacologique.
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
L’effet indésirable qui pourrait être attendu sur les animaux est l’apparition d’un stress en lien avec la manipulation des animaux. Le développement d’une fibrose du foie pourra également générer des effets indésirables, notamment des troubles digestifs.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
A l’issu des protocoles, les souris seront euthanasiées par dislocation cervicale après anesthésie générale de l’animal. Des dissections des échantillons biologiques seront réalisées pour mener les études histologiques, moléculaires et épigénétiques.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
Nos objectifs sont de mieux comprendre la physiopathologie de stéatose hépatique. Pour cela, la validation chez l’animal est une obligation pour déchiffrer les mécanismes moléculaires et physiopathologiques à l’origine de CETTE maladie. Nous devons donc utiliser des souris génétiquement modifiées pour identifier certains gènes intervenant dans le dévelopement de cette maladie. Il est nécessaire de travailler sur un organisme entier vivant pour reproduire la physiopathologie complexe de la stéatose hépatique, car cette maladie fait intervenir plusieurs types cellulaires dans le foie mais également d’autres organes comme l’intestin. Il est donc impossible de modéliser ces interactions complexes in vitro.
2. Réduction
Pour définir statistiquement le nombre d’animaux, une étude statiistique (utilisation du logiciel gpower pour definir le nombre d’animaux necessaires) est utilisée pour réduire au minimum le nombre d’animaux, permettant ainsi de générer le nombre exact d’animaux par expérimentation en fonction des paramètres recherchés (glycémie, poids, …).
3. Raffinement
Un suivi quotidien et une observation des animaux sont réalisés par les membres de l’équipe de l’animalerie dans laquelle les animaux sont hébergés. Les membres de l’équipe travaillant sur ce projet suivent également les animaux afin de garantir leur bien-être et minimiser au maximum leurs éventuelles souffrances. L’état général des animaux est évalué tous les jours par des observations quotidennes et pesées hebdomadaires.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
La souris génétiquement modifiée reste le meilleur modèle pour étudier l’effet d’un gène sur le développement d’une maladie. Nous utiliserons donc des souris invalidées pour notre gène d’intéret spécifiquement au niveau hépatique. Ces souris seront soumises à différents traitements régimes afin de mimer le développement d’une maladie du foie. Les animaux utilisés sont des souris adultes âgées de 8 à 12 semaines (pesant entre 20 et 30g) possédant un système digestif et immunologique mature, permettant l’étude d’un système physiologique digestif optimal.