Résumé non technique d'un projet d'expérimentation animale publié sur ALURES le 07/09/2023
("EC NTS/RA identifier" : NTS-FR-932765)
1056 souris vont être utilisées, toutes tuées à l’issue, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger. Une partie est rendue obèse par un régime gras de seize semaines, une autre l’est par une mutation spontanée du gène de la leptine, avant une mise à mort pour prélever le tissu adipeux et d’autres organes. Le porteur affirme que l’obésité n’induit ni traumatisme ni douleur, tout en notant une mobilité réduite chez les souris mutées. Il présente le modèle murin comme nécessaire faute d’alternative pour développer une obésité à l’échelle de l’organisme.
Objectifs et bénéfices escomptés du projet
Décrire les objectifs du projet.
L’obésité est une maladie chronique que consiste à un excès de masse grasse et à une modification du tissu adipeux. Cette modification entraine des conséquences à niveau métabolique, vasculaire et cardiaque et à une réduction de l’espérance de vie. Le développement et la progression de l’obésité sont dues à différents facteurs, tels que l’alimentation ou la prédisposition génétique. Ainsi, pour ce projet nous utiliserons 2 modeles d’obésité : (1) obésité induite par un régime riche en graisses (2) obésité induite par une mutation spontanée sur le gène de la leptine (Ob), une hormone adipocytaire qui contrôle la prise alimentaire et dont la déficience conduit à une hyperphagie et donc par conséquent une obésité. Nous nous intéressons aux vésicules extracellulaires (VEs) libérées par les cellules de l’organisme. Les fortes concentrations de VEs circulantes mesurées chez les patients obèses suggèrent que ces VEs participent à la mise en place des maladies associées à l’obésité. L’objectif de cette étude est de caractériser le contenu de VEs issues de tissus adipeux sain ou altérés par l’obésité.
Quels sont les bénéfices susceptibles de découler de ce projet?
Une telle étude permettra de mieux comprendre la contribution des VEs dans l’obésité et ses complications. Ce travail ouvre des perspectives thérapeutiques pour le traitement des complications métaboliques associées à l’obésité.
Nuisances prévues
À quelles procédures les animaux seront-ils soumis en règle générale?
le poinçon à l’oreille (durée 2 min) le régime gras (durée 16 semaines) l’euthanasie (durée 5 min), le maintien d’une lignée OGM (durée 8 mois)
Quels sont les effets/effets indésirables prévus sur les animaux et la durée de ces effets?
L’obésité́ n’induit pas de traumatismes ni de douleurs chez̀ l’animal. Avec l’installation de l’obésité́, les souris spontanément mutées pourraient présenter une mobilité réduite. Une attention particulière sera portée lors des transferts de cage (prise dans la paume de la main ou à l’aide d’un tunnel d’enrichissement). Les animaux seront surveillés régulièrement en termes d’aspect, de prise alimentaire et de vitalité́. Des actions seront menées en fonction de l’état de l’animal : l’utilisation des antalgiques voire l’euthanasie de l’animale, si nous constatons des changements des signes comportementaux (fuite ou défense à la manipulation) et/ou de l’apparence (poil hérissé, terne ou posture inhabituelle) selon la grille d’évaluation des points limites.
Justifier le sort prévu des animaux à l’issue de la procédure.
Les animaux seront euthanasiés à la fin de chaque procedure pour prélèvement d’organes pour des analyses post mortem.
Application de la règle des "3R"
1. Remplacement
En absence de modèles existants alternatifs au développement d’une obésité à l’échelle de l’organisme, nous utiliserons 2 modèles murins largement caractérisés : (1) modèle Ob/Ob ou la mutation Ob (apparue spontanément) induit une obésité naturelle, (2) obésité induite par diète riche en graisses induisant une prise de poids consécutive.
2. Réduction
Les modèles seront réalisés sur un nombre nécessaire et suffisant d’animaux. Le nombre total d’animaux utilisés pour cette étude a été défini en fonction du nombre de groupes, du nombre d’animaux et de quantité de tissu adipeux nécessaire pour l’obtention de résultats statistiquement interprétables et fiables. Le calcul d’effectifs a été réalisé à l’aide d’un logiciel spécifique justifiant le nombre de souris total (1056) nécessaires à ce projet, incluant des lots de souris contrôles et obèses (et l’élevage des souris Ob/Ob).
3. Raffinement
Les souris seront hébergées dans des conditions adaptées à l’espèce avec un enrichissement du milieu (cabanes, papier, tubes en carton, morceau de bois). Le protocole expérimental comprend un suivi quotidien des animaux, des indicateurs comportementaux et physiques prédéfinis (état général, prostration, poil hérissé, suivi pondéral de l’animal) qui seront évalués quotidiennement, et constitueront les points limites de l’expérience (mise à mort de l’animal). Une grille d’évaluation des points limites sera utilisée. Afin d’éviter toute souffrance animale au cours du protocole expérimental, des analgésiques pourront être prescrits le cas échéant. Ce projet s’inscrit ainsi dans une gestion éthique de l’expérimentation animale et est donc en accord avec les réglementations européennes et françaises de bonnes pratiques de laboratoire. Les souris obéses spontanément mutées s’obtiennent par croisement des hétérozygotes. Ce projet utilisera toutes les souris obtenues du croisement, évitant les euthanasies inutiles. Les souris hétérozygotes surnuméraires seront utilisées pour l’élevage. Afin d’éviter un prélèvement supplémentaire, le tissu récupéré lors du marquage par un poinçon à l’oreille sera utilisé pour le génotypage. Les souris obèses seront distribuées dans les cages en nombre de 2, tenant en compte leur poids et la dimension de la cage. Les souris obèses présentant une mobilité réduite, une attention particulière sera portée lors des transferts de cage (prise dans la paume de la main ou à l’aide d’un tunnel d’enrichissement). Afin d’optimiser l’utilisation des animaux, le foie, le cœur, les muscles et les reins seront prélevés pour préparer une banque de tissus pour de futures expériences.
Expliquer le choix des espèces et les stades de développement y afférents.
L’espèce animale choisie pour ces études est la souris de type sauvage et obèses (suite à un régime gras ou à une mutation génétique spontanée). La mise en place de la diète riche en graisses sera réalisée sitôt le sevrage des animaux (4 semaines), et les animaux seront euthanasiées à 20 semaines, âge auquel la prise de poids de ces animaux récapitule le développement d’une obésité et de ses complications métaboliques. Les souris destinées aux accouplements seront utilisées à partir de l’âge de 8 semaines et à l’âge de 10 mois elles seront euthanasiées. Tous les animaux (femelles et mâles) seront utilisés.