Recherche fondamentale

720 souris vont être utilisées, toutes tuées pour prélever leurs tissus, dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger. Privées de nourriture la nuit précédente, elles sont gavées puis subissent trois prélèvements sanguins par voie submandibulaire et rétro-orbitaire, sous anesthésie au sévoflurane. Le porteur énumère six sources de stress, dont l'odeur du sang, et conclut qu'il s'agit de "gestes nécessaires pour l'expérimentation". L'effectif tient à une arithmétique simple, soixante conditions à tester et six individus par sexe, que le RNT ne rapporte à aucune contrainte extérieure.

Objectifs

Le but de cette recherche est : 1- D’évaluer si d’autres transporteurs membranaires intestinaux que ceux déjà identifiés pourraient être impliqués dans le transport des vitamines liposolubles. Nous travaillerons plus particulièrement sur les protéines qui pourraient effluer les micronutriments lipidiques néo-absorbés de l’entérocyte vers la lumière intestinale. Nous utiliserons des inhibiteurs pharmacologiques spécifiques aux transporteurs cibles et des modèles de souris adaptés. 2- D’étudier l’effet de certains composés dit « antinutritionnels » naturellement présents dans l’alimentation (fibres, phytate, saponine et tannins) sur la biodisponibilité des micronutriments liposolubles.

Bénéfices attendus

Ce projet permettra d’enrichir les connaissances quant aux mécanismes d’absorption et aux interactions qui interviennent lors de l’ingestion des vitamines et micronutriments liposolubles. Etudier les interactions avec les composés antinutritionnels présents dans notre alimentation permettra de proposer de nouvelles approches pour concilier un régime plus végétalisé avec une absorption optimale en vitamines et caroténoïdes, ce qui est nécessaire pour le maintien de l’organisme en bonne santé.

Procédures

Les animaux seront soumis à 3 prélèvements sanguins. La durée de chaque prélèvement sanguin est estimée à 5 minutes. Le gavage sera réalisé sur les animaux vigiles. La procédure de gavage est estimée à 2 minutes hors préparation de la seringue.

Impact sur les animaux

Les nuisances attendues sur les animaux seront : 1) Stress lié à la manipulation pendant la pesée et changements de litière ; 2) Stress lié à la privation de nourriture pendant la nuit avant le gavage ; 3) Stress pendant le gavage ; 4) Stress lié à l’anesthésie avec sévoflurane ; 5) Stress pendant les 3 prélèvements sanguins submandibulaires et rétro-orbitaux ; 6) Stress lié à la perte de sang/ odeur du sang. Malheureusement il s’agit de gestes nécessaires pour l’expérimentation. Des effets sur la santé des animaux des inhibiteurs ou des antinutritionnels tels qu’ils seront administrés n’ont jamais été rapportés dans la littérature. Par ailleurs, la dose de composés antinutritionnels utilisés lors de ce projet sera celle d’un régime alimentaire : à ces doses, ces composés ne présentent pas d’effets indésirables sur la santé suite à une ingestion unique.

Devenir

Les animaux de cette procédure seront mis à mort afin de prélever les tissus d'intérêt qui seront ensuite étudiés (dosages en micronutriments).

Remplacement

Les modèles in vitro (culture cellulaire, chambre d’Ussing) ne reproduisent pas la complexité biologique du tube digestif (mucus, mouvement, échange entre organes, présence d’un microbiote). Cependant, l'étude des différentes conditions (transporteurs et composés antinutritionnels) sera faite en fonction des résultats préliminaires obtenus sur une lignée cellulaire humaine qui permet de réaliser un screening de nos conditions.

Réduction

Ce projet est constitué de 60 conditions au maximum. Pour chacune de ces conditions, et compte tenu de la variabilité interindividuelle existant chez la souris et de la difficulté de la mise en place du protocole, des groupes de 6 individus par sexe sont nécessaires pour assurer la validité statistique du phénomène observé. Un nombre plus restreint d’animaux ne permettrait pas une finesse suffisante des résultats pour répondre à nos objectifs de recherche.

Raffinement

Les animaux seront hébergés en cage de 2-4, et l'environnement sera enrichi par la présence d'un igloo en plastique et de matériel de nidification (bandelettes de papier kraft). Le début des expérimentations aura lieu après 7 jours d’adaptation dans l’animalerie. L’enrichissement sera actualisé toutes les semaines afin d’apporter de la nouveauté aux souris (igloos, tubes plastiques, papier kraft, cellulose, bois, foin). Des conflits entre animaux au sein d’une même cage pourraient se produire et engendrer des blessures. Dans ce cas, l’animal blessé sera soigné et placé dans une cage individuelle permettant de garder des contacts visuels, olfactifs et auditifs avec ses congénères jusqu’à la fin du protocole. Les animaux auront accès ad libitum à la nourriture jusqu’au jour avant l’expérimentation et à l’eau jusqu’à la fin de l’expérimentation. Les souris seront observées 15 minutes après les procédures de gavage et prélèvements sanguins pour détecter des signes de douleur ou de détresse. L’apparence, l’abreuvement et alimentation ainsi que le comportement seront évalués grâce à une grille d’évaluation du bien-être adaptée au projet pendant la procédure et pendant la période d’adaptation. Toutes les procédures invasives (prélèvements sanguins rétro-orbitaux, prélèvement sanguin intracardiaque, dislocation cervicale) seront réalisées sous anesthésie générale (8% sévoflurane et débit d'oxygène = 1L/min, 5 min).

Choix des espèces

Les expériences de biodisponibilité des micronutriments sont le plus souvent réalisées chez la souris, dont le système de digestion et d’absorption des micronutriments liposolubles est anatomiquement proche de celui de l’Homme. Les souris constituent un modèle in vivo de référence pour l’étude de l’absorption des vitamines. Les souris seront âgées de 6 à 16 semaines. Ces animaux correspondent donc à de jeunes adultes. Nous évitons à ce stade de développement l’ajout de paramètres confondants tels que le vieillissement. Les animaux seront utilisés avant 16 semaines et aucun phénotype utilisé n’est considéré comme dommageable.

Exposés un mois durant à une lumière artificielle nocturne et à un enregistrement de bruit routier montant jusqu'à 60 décibels, 300 têtards de crapaud commun subissent des procédures impliquant un niveau de souffrance léger. À la fin de l'expérience, chaque têtard est posé sur un support froid pour réduire son activité, écouvillonné, puis tué par surdosage d'anesthésique. Le porteur affirme qu'il est "nécessaire" de tuer les têtards pour prélever l'intestin, et annonce que le reste des tissus, dont la tête, sera congelé pour "rentabiliser" les échantillons pendant plusieurs années. Le champ de devenir déclare pourtant 45 individus rendus vivants, sans que la narration précise lesquels échappent à la mise à mort.

Objectifs

L’approche « Santé Unique » souligne la nécessité d’une meilleure compréhension des perturbations de la dynamique des interactions entre les populations humaines et animales pour le contrôle des épidémies futures. Dans ce cadre, le système immunitaire est un acteur majeur du contrôle de la composition des espèces bactériennes chez les espèces hôtes. En contrôlant les communautés bactériennes aux interfaces hôte-bactéries (tels que le système digestif ou la peau), il a probablement un fort impact sur la composition des microbiotes des organismes. Or en milieu naturel, la fonction immunitaire, qui permet de lutter contre le challenge constant représenté par les agents pathogènes, est modulée par les conditions environnementales. Chez certaines espèces d’amphibien, les gènes liés à la réponse immunitaire innée de têtards de crapaud commun soumis à de la pollution lumineuse nocturne (ALAN pour Artificial Light At Night) sont sous-exprimés par rapport aux animaux témoins, alors que ceux liés à l’inflammation sont très sur-exprimés. En milieu naturel, les organismes sont exposés à un ensemble de pollutions qui peuvent agir de façon synergique. La pollution sonore (bruit du trafic routier), est souvent concomitante à ALAN. Bien que l’effet de la pollution sonore sur le statut immunitaire d’une espèce d’amphibien anoure adulte ait déjà été démontré, peu d’études concerne l’effet synergique de ces deux stresseurs anthropiques. Ce projet a pour objectif de caractériser fonctionnellement l’impact croisé d’ALAN et de la pollution sonore sur les communautés bactériennes (commensales et pathogéniques) du crapaud commun, espèce considérée comme sentinelle des zones humides. Sachant que l’immunité est responsable de l’état de santé global des organismes (résistance aux maladies infectieuses, bactéries pathogènes, développement de cancers) et que les études multi-stress en milieu naturel sont encore rares, les résultats obtenus permettront de mieux appréhender les effets cocktails de l’exposition croisée de ces deux pollutions anthropiques sur la faune sauvage.

Bénéfices attendus

Ce projet va permettre, pour la première fois, de caractériser l’effet croisé (et non unique) de deux sources de pollutions anthropiques très communément expérimentées par les espèces en milieu naturel, et ce, en utilisant des valeurs d’exposition réalistes retrouvées sur un grand nombre de sites en milieu naturel. L’impact croisé de ces deux stresseurs anthropiques sera évalué sur les communautés bactériennes pathogènes et commensales hébergées par l’hôte. Cette étude s’inscrit donc dans le cadre du concept de Santé Unique qui émerge de plus en plus dans la programmation des politiques de santé publique alors que les données scientifiques sont encore parcellaires. En effet, comprendre les dynamiques d’interactions entre les sources de pollutions anthropiques et les espèces en milieu naturel est indispensable au contrôle des épidémies futures. Par ailleurs, les amphibiens sont le groupe de vertébrés le plus menacé d’extinction actuellement, notamment en raison des perturbations anthropiques. Comprendre l’impact de ces pollutions lumineuse et nocturne sonore sur les têtards de crapauds communs fréquemment rencontrés dans les zones humides urbaines et péri-urbaines permettra d’aider à la préconisation de mesures de conservation des populations à destination des gestionnaires d’espaces naturels. Les résultats attendus du projet seront valorisables au niveau fondamental en écologie microbienne et rapidement exploitables par les politiques publiques notamment pour l’établissement de trames noires et de zones refuges pour la biodiversité.

Procédures

Durant l’expérimentation, les animaux du groupe ALAN seront soumis à de la pollution lumineuse de 19h à 07h (intensité 0.1lux), les animaux du groupe Pollution sonore seront exposés à une bande enregistrée reproduisant les niveaux de pollution sonore observée sur un cycle circadien (en moyenne 30dB la nuit et avec des pics ponctuels allant jusqu’à un maximum de 60dB la journée. Les animaux du groupe (ALAN + pollution sonore) seront exposés aux deux pollutions selon ces même modalités. A la fin de l’expérimentation (1 mois) et avant la mise à mort par surdosage de MS-222, chaque têtard sera rincé et placé sur un support froid (de manière à réduire son activité) en vue d’un frottis cutané réalisé à l’aide d’un petit écouvillon stérile. Ce prélèvement unique de < 1 minute sera réalisé par une personne expérimentée. L’individu sera ensuite immédiatement euthanasié.

Impact sur les animaux

Aucune étude scientifique ne renseigne pour l’instant les effets physiologiques et comportementaux de l’exposition croisée à ces deux types de pollutions anthropiques chez des stades larvaires d’amphibien, ce que notre étude sera justement en mesure de mieux comprendre. La pollution lumineuse nocturne induit une expression différentielle des gènes des têtards en particulier au niveau du système immunitaire. Sans que le lien fonctionnel ait été encore formellement démontré, il se peut que les têtards soumis à la pollution lumineuse soit immunodéprimés. Une étude récente a étudié les effets de l’exposition à la pollution sonore seule en animalerie sur des têtards d’amphibien nord-américain. Elle reporte une prise alimentaire diminuée et une activité moindre de ces têtards, mais un taux de croissance et une date d’arrivée à la métamorphose similaire. Cependant, cette étude utilise un niveau de pollution sonore supérieur et continu (70 dB) à celui que nous prévoyons d’utiliser.

Devenir

Il est nécessaire d’euthanasier les têtards à la fin de l’expérimentation pour pouvoir prélever les échantillons intestinaux et ainsi caractériser le microbiote intestinal.

Remplacement

La composition des communautés microbiennes des animaux se met en place durant le développement. Elle est complexe, influencée par de multiples drivers (alimentation, immunité, génétique…) et modulée en miroir des conditions environnementales locales (pollution, stress, présence de pathogènes…). Cette composition des microbiotes n’est pas modélisable et la caractérisation de l’effet de stress externes sur son développement nécessite le prélèvement sur organisme vivant et sain. Aucune expérience in vitro ou in silico ne peut permettre d’accéder à ce type de données.

Réduction

La capture et l’échantillonnage réalisés sur les individus adultes ont été optimisés statistiquement, de façon à réduire au maximum le nombre d’œufs utilisés et prélevés dans la nature et le nombre de têtards élevés en animalerie, tout en obtenant des résultats significatifs. Le nombre de têtards prélevés (N=75 pour chacun des 4 groupes expérimentaux, soit N=300 au total) représente le nombre minimal d’individus nous permettant d’avoir une information réaliste et exploitable statistiquement, compte tenu de la haute variabilité individuelle de la composition des communautés bactériennes intestinales et cutanées. Une autorisation préfectorale est en cours d’obtention pour le site concerné, le nombre d’individus et les prélèvements réalisés. Le reste des tissus, en particulier la tête (cerveau et yeux), sera prélevé et stocké à -80°. Ces tissus pourront servir ultérieurement à l’étude de l’expression génique suite à l’exposition aux différents stresseurs. Ceci permettra de fait de rentabiliser l’ensemble des échantillons pendant plusieurs années. Cette procédure a déjà été utilisée avec succès au laboratoire.

Raffinement

Le bien-être des animaux est une condition sine qua non de cet élevage. Les conditions d'hébergement, couramment utilisées et maîtrisées dans notre équipe, sont les plus appropriées pour réduire le plus possible toute angoisse que pourraient ressentir les animaux. En particulier la température de l’eau (17°C ± 1°C), source de stress importante chez ces animaux sera contrôlés deux fois par jours. L’oxygénation de l’eau se fera en continue par des pompes et bulleurs adaptés aux aquariums. Le nettoyage de fèces par aspiration sera réalisé tous les deux jours (au début de développement) et tous les jours (quand les individus seront plus gros et s’alimenteront plus à ~2 semaines) pour assurer une eau toujours propre et empêcher tout développement bactérien ou fongique dans les aquariums. Enfin, l’élevage des têtards de chaque ponte se fera en petit groupe de 5 individus par aquariums, ce qui permet d’éviter toute pression de densité représentant un fort stress pour ces stades larvaires. Par ailleurs, le bien-être animal sera assuré par la présence de personnel compétent 7J/7J pour l’observation et le soin des animaux.

Choix des espèces

Les amphibiens présentent un état de conservation défavorable dans la plupart des régions du monde. Le crapaud commun, espèce sentinelle des zones humides, est présent dans les zones péri-urbaines et urbaines régulièrement soumise à la pollution nocturne et sonore. Ainsi, dans son environnement naturel, cette espèce expérimente des éclairements nocturnes et des niveaux sonores important pouvant affecter sa physiologie et son comportement. De plus, ce taxa étant particulièrement sensible aux épidémies bactériennes et fongiques, les résultats obtenus seront susceptibles d’avoir une grande portée de conservation afin d’établir des préconisations de gestion auprès des gestionnaires des territoires qui promeuvent la présence de zones humides en ville pour améliorer le bien-être des citadins. Nous avons choisi de travailler sur le stade larvaire car un nombre grandissant d’études reporte l’importance de perturbations environnementales subies pendant les stades juvéniles sur l’état de santé des individus, et plus particulièrement sur le développement du microbiote. Nous savons déjà que l’exposition à de faibles valeurs de pollution lumineuse nocturne est responsable de modifications de l’expression des gènes du système immunitaire chez les têtards, il est donc fort probable que ces modifications immunitaires de l’hôte aient un effet direct sur leur capacité à contrôler leurs communautés bactériennes aux interfaces telles que les intestins ou la peau.

Cinq injections intrapéritonéales en cinq jours consécutifs pour trente souris, une seule injection pour soixante autres, un gavage pour les cinquante-huit restantes : 148 souris vont être utilisées dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger, toutes tuées pour prélever leur cerveau. Le projet compare les propriétés électriques de neurones formés à quatre moments de la vie, du stade embryonnaire à l'âge adulte. Le porteur rattache ce travail à l'élargissement des connaissances fondamentales sur le fonctionnement du cerveau, sans autre débouché annoncé. Les mères utilisées sont tuées elles aussi, l'injection reçue pendant la gestation les rendant inutilisables pour tout autre protocole.

Objectifs

L'objectif de ce projet est de déterminer si les neurones générés au cours du développement ou de la vie adulte dans le gyrus denté, une structure cérébrale impliquée dans la mémoire,ont les mêmes propriétés dans les réseaux neuronaux.

Bénéfices attendus

Ce projet devrait contribuer à terme à élargir nos connaissances fondamentales sur le fonctionnement du cerveau.

Procédures

Les animaux seront soumis 1) à des injections intrapéritonéales (1 injection ou 5 injections sur 5 jours concécutifs; moins d'une minute pour chaque injection), 60 animaux recevront une injection et 30 animaux recevront 5 injections; ou 2) à une injection par gavage (1 injection, mois d'une minute), 58 animaux sont concernés par le gavage.

Impact sur les animaux

Une injection génère une douleur légère et un potentiel stress physique.

Devenir

Tous les animaux seront mis à mort car les cerveaux des animaux sont récupérés pour les analyses. De plus les mères utilisées seront également euthanasiées car l'injection réalisée pendant la gestation peut engendrer des effets secondaires non compatibles avec la réutilisation de ces femelles quel que soit le protocole expérimental (reproduction ou autre).

Remplacement

N'existant pas de modèle in vitro et in silico permettant de reproduire l'environnement complexe caractéristique du gyrus denté (multiples types cellulaires, architecture complexe, afférences variées..) et ce à différents moments de la vie, cette étude ne peut être réalisée que chez l'animal ex vivo ou in vivo.

Réduction

Sur la base de nos études et analyses statistisques précédentes, nous prévoyons d’utiliser le nombre minimal de souris nécessaire pour obtenir des analyses statistiques fiables et cohérentes. Quatre lots seront utilisés afin de cibler les neurones générés à 4 moments de la vie (embryonnaire, postnatal, adolescence, vie adulte). Mâles et femelles seront utilisés.

Raffinement

Un soin particulier sera accordé à l’observation des animaux, en particulier lors des périodes post injection, mais aussi à leurs conditions d’hébergement. Nous utiliserons une« grille-douleur » permettant de scorer (de 0 à 9) de façon objective le bien-être de l'animal par la mesure du poids, l’évaluation de l’apparence et du comportement. Cette grille permet de définir les points limites et/ou les traitements appropriés (anti-douleur) à utiliser pour pallier la douleur.

Choix des espèces

Le modèle utilisé dans ce projet est la souris car il fait appel à des lignées génétiquement modifiées développées uniquement chez la souris. Dans la structure cérébrale étudiée, les neurones sont générés de la vie embryonnaire à l'âge adulte. Nous ciblerons les cellules à l'origine de ces neurones et ce à différents moments de la vie de l'animal: 1) pendant la vie embryonnaire, 2) à la naissance (P0), 3) en période juvénile (P21) et à 4) l'âge adulte (P84). Ces temps précis d'analyse ont été choisi en fonction de la littérature et de nos études précédentes.

Aucune de ces souris ne dépassera six mois, âge auquel elles sont tuées pour devancer les tumeurs spontanées que leurs mutations du gène p53 provoquent. 360 souris réparties sur trois lignées vont être utilisées pendant cinq ans dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger, limitées à l'élevage et au génotypage. Le RNT prévoit la mise à mort immédiate de tout animal chez qui une masse tumorale apparaît. Sur le remplacement, l'équipe affirme qu'aucun modèle de substitution ne permet d'étudier les phases initiales du développement tumoral dans plusieurs organes à la fois.

Objectifs

Le projet consiste à étudier les mécanismes moléculaires qui sous-tendent le développement de tumeurs chez des patients atteints d'un syndrome de pré-disposition tumorale. Cette étude vise à comprendre les mécanismes à l’origine de l’initiation tumorale, et en particulier ceux faisant intervenir le métabolisme cellulaire. Cette étude implique le maintien de trois lignées de souris génétiquement modifiées porteuses d’allèles codant pour différentes mutations d'une protéine appelée p53. Pour cette étude, nous prévoyons d'utiliser 360 souris (3 X120 souris par lignée) génétiquement modifiées en suivant des dispositions permettant l’application de la règle des 3R.

Bénéfices attendus

Les perspectives de ce projet concernent la découverte de nouveaux mécanismes à l’origine de l’initiation tumorale chez les patients porteurs d’une mutation marqueur de la prédisposition tumorale. A termes, les connaissances issues de ce projet devraient permettre d’identifier de nouveaux biomarqueurs tumoraux et de valider de nouvelles stratégies thérapeutiques.

Procédures

Une nuisance liée à l’apparition de tumeurs est possible mais peu probable vu l’âge des animaux maintenus en élevage. Si une masse tumorale apparait chez un animal, ce dernier sera euthanasié. Si des biopsies sont réalisées, leur durée n'exédera pas quelques secondes.

Impact sur les animaux

Les souris de génotype d’intérêt sont susceptibles de développer des tumeurs.

Devenir

Utilisation continue des animaux pour la durée du projet (5 ans). Seuls les animaux de génotype d’intérêt seront maintenus jusqu’à l’âge de 6 mois maximum. Tous les animaux atteignant un point limite dans la durée du projet ou au-delà de l'âge de six mois seront euthanasiés.

Remplacement

Il n’y a pas de modèle de substitution permettant l’étude des phases initiales du développement tumoral dans différents organes simultanément. Par ailleurs, un des objectifs majeurs du projet est d’identifier de nouveaux biomarqueurs circulants (dans le sang ou les urines) du développement tumoral. De fait, seule une étude in vivo dans un modèle animal permet de répondre à ces questions.

Réduction

Le nombre d’animaux utilisés dans le projet (360) a été réduit au nombre minimum nécessaire pour permettre les expérimentations en adaptant la production aux besoins de l’étude tout en limitant les risques d’apparition de phénotypes dommageables.

Raffinement

Ces 3 lignées présentent des caractéristiques spécifiques liées à l’émergence de tumeurs spontanées dans différents organes dont il faudra tenir compte mais qui n’apparaissent que de façon exceptionnelle avant l’âge de 7 mois chez les animaux de génotype d’intérêt. La principale stratégie de raffinement consistera à ne maintenir en élevage que des animaux âgés de 6 mois au plus. Un examen journalier sera effectué pour renseigner dès les premiers signes cliniques des fiches de suivi individuelles (isolement, absence de mobilité, dégradation de l’état d’embonpoint, hérissement des poils, dos voûté…). La sévérité de ces signes sera évaluée selon une grille d’évaluation qui déterminera la nature des soins à prendre ou sa mise à mort. Les souris seront hébergées en portoirs ventilés en conditions standard d’hébergement. Dans chaque cage nous ajouterons de l'enrichissement (bâtonnets en coton, frisottis, cabane en carton). Le change est fait de façon hebdomadaire dans cette zone d’élevage.

Choix des espèces

Les allèles génétiquement modifiés mimant les altérations génétiques présents chez les patients atteints de syndrome de prédisposition tumorale et nécessaires à cette étude ne sont accessibles que chez la souris. Animaux adultes de 8 à 25 semaines maximum pour éviter l’apparition de phénotypes dommageables. Aucun animal ne sera maintenu vivant au-delà de cette période. L’apparition peu probable de signes de douleurs liés au développement tumoral sur cette période entrainera une mise à mort immédiate.

Les souris de ces lignées portent des allèles qui les prédisposent aux tumeurs cérébrales, avec ataxie, troubles du comportement et détérioration de l'état général à la clé. 486 souris vont être utilisées sur cinq ans dans des procédures impliquant un niveau de souffrance léger, limitées au tatouage et à la biopsie d'oreille du génotypage. Le porteur ne garde les reproducteurs porteurs que jusqu'à sept mois, âge auquel les tumeurs commencent à apparaître. Les souris dépourvues du génotype recherché sont tuées, sauf quelques-unes gardées comme "animaux compagnons" pour éviter d'en isoler d'autres, et celles qui le portent partent vers une zone d'expérimentation.

Objectifs

Ce projet s’inscrit dans un projet plus large qui vise à comprendre quels sont les premiers événements impliqués dans l'initiation tumorale de tumeurs cérébrales. Ces travaux pourraient aboutir à de nouvelles stratégies de prévention et de suivi clinique des patients atteints de cancers. Son objectif principal est l’élevage de trois lignées présentant un phénotype dommageable permettant l’étude de l’initiation et la progression tumorales avec prise en charge spécifique pour en réduire les nuisances.

Bénéfices attendus

Les perspectives de ce projet concernent la découverte de nouveaux mécanismes à l’origine du développement de tumeurs cérébrales. A termes, les connaissances issues de ce projet devraient permettre d’identifier de nouveaux biomarqueurs tumoraux et de valider de nouvelles stratégies thérapeutiques.

Procédures

La biopsie pour le génotypage est réalisée à l'oreille généralement entre 8 et 15 jours d'âge. Les souris sont identifiées au préalable par tatouage aux phalanges ou par boucle auriculaire. Le prélèvement d'un bout de l'oreille, d'une durée de quelques secondes au maximum, est réalisé à l'aide d'un poinçon désinfecté entre chaque animal ou à l'aide de ciseaux (un petit bout du pavillon prélevé) désinfectés entre chaque animal. Si une deuxième recoupe est nécessaire, la raison doit être justifiée par l'équipe de recherche et la seconde biopsie sera faite à l'oreille.

Impact sur les animaux

Une gêne transitoire occasionnée par une biopsie à l’oreille prévue dans le cadre du génotypage de ces souris génétiquement modifiées est prévisible. Les souris de génotype d’intérêt sont susceptibles de développer des tumeurs cérébrales avec différents effets indésirables (ataxie, troubles du comportement, déterioration de l’embonpoint, etc).

Devenir

Utilisation continue des animaux pour la durée du projet (5 ans). La gestion de l’élevage sera optimisée pour minimiser le risque d’apparition de phénotype dommageable. Plus spécifiquement, les reproducteurs de génotype d’intérêt seront maintenus jusqu’à l’âge de 7 mois maximum. Tous les animaux atteignant un point limite dans la durée du projet seront euthanasiés. Tous les animaux ne présentant pas les génotypes d’intérêt seront euthanasiés. Les animaux de génotype d’intérêt seront transférés vers une zone d’expérimentation. Certains animaux ne présentant pas le génotype d'intérêt et à phénotype non dommageable pourront être utilisés comme animaux compagnons pour ne pas garder d’animaux isolés.

Remplacement

Il n’y a pas de modèle de substitution permettant l’étude des phases initiales du développement tumoral dans différents organes simultanément. Par ailleurs, un des objectifs majeurs du projet est d’identifier de nouveaux biomarqueurs circulants (dans le sang ou les urines) du développement tumoral. De fait, seule une étude in vivo dans un modèle animal permet de répondre à ces questions.

Réduction

Le nombre d’animaux utilisés dans le projet (486) a été réduit au nombre minimum nécessaire pour permettre les expérimentations en adaptant la production aux besoins de l’étude tout en limitant les risques d’apparition de phénotypes dommageables.

Raffinement

Chez les animaux de génotype d’intérêt, l’apparition de phénotypes dommageables est exceptionnelle avant l’âge de 7 mois. La principale stratégie de raffinement consistera à ne maintenir en élevage que des animaux âgés de 7 mois au plus. Néanmoins, l’apparition de ces phénotypes dommageables sera évaluée au travers d’un examen journalier permettant de renseigner dès les premiers signes cliniques des fiches de suivi individuelles (ataxie, isolement, absence de mobilité, détérioration de l’embonpoint, hérissement des poils, dos voûté…). La sévérité de ces signes sera évaluée selon une grille d’évaluation qui déterminera la nature des soins à prendre ou la mise à mort de l’animal. Les souris seront hébergées en portoirs ventilés en conditions standard d’hébergement. Dans chaque cage nous ajouterons de l'enrichissement (bâtonnets en coton, frisottis, cabane en carton).

Choix des espèces

Les allèles génétiquement modifiés utilisés dans le cadre de cette étude ne sont accessibles que chez la souris. Seuls des animaux adultes de 8 à 28 semaines maximum seront utilisés pour éviter l’apparition de phénotypes dommageables. Aucun animal ne sera maintenu vivant au-delà de cette période.